王顺德
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 从中性学说到非线性分子进化被引量：2
- 1998年
- 盛极一时的分子进化的中性学说,在对分子水平遗传多态性的解释以及近缘物种的亲缘关系分析上,迄今仍不失其重要作用,但对远缘物种关系的分析上往往难以自圆其说.结构分子生物学的发展,证实三维构象比一维序列数据更具进化上的保守性并可揭示分子进化的非线性和复杂性.基于上述特性,一些学者分别提出了比较远缘物种(包含了近缘物种)亲缘关系的算法.本文对这些算法作一些扼要的介绍,并对非线性分子进化的美好前景作—展望.
- 吕宝忠王健王顺德
- 关键词：中性学说非线性分子进化进化
- 细小病毒核苷酸序列同源性的比较——对抗癌作用的一点启示被引量：2
- 1990年
- 细小病毒(Parvovirus,PV)在离体培养系统中有抑瘤效应。使用IBM/PC机或Micro Vax II机,对啮齿动物四种PV(H-1,H-3,MVM,KRV)DNA的3′端片段之间及与AAV复制原点片段,H-1与MVM DNA,MVM与MVM_iDNA,H-1与B_(10)-Au DNA序列作了同源性比较。结果表明:啮齿动物四种PV DNA 3′端的同源程度颇高,达96%以上;H-1与MVM DNA的同源性为77%;而H-与B_(19)-Au DNA的同源性仅39%。这显示H-1与MVM DNA可能包含同样的抗瘤片段,而B_(19) DNA则不合此片段。AAV与啮齿动物四种PV的任一种DNA序列的同源程度仅有28%～29%,这表明虽然它们都有抑瘤活性,但机理可能并不相同。
- 罗祖玉王顺德王健刘为平
- 关键词：病毒核苷酸同源性
- FD耐热逆转录酶的同源模建及结构同源性分析
- 1998年
- FD－TRT是一种耐热逆转录酶（是自行表达并提纯的），根据TapDNA聚合酶的晶体结构为模板，采用计算机同源模建的方法建立FD－TRT的三级结构模型，并对FD－TRT和DNA聚合酶家族的其他蛋白功能差异的结构基础以及保守性功能性残基的作用进行研究，从而为进一步改造FD－TRT分子、提高其耐热性、反应活性以及对RNA模板和DNA模板的选择性提供良好的基础．
- 张王顺德郑佐华毛裕民
- 关键词：同源建模嗜热细菌逆转录酶
- 基因多位点定点突变法机理的探讨被引量：1
- 1997年
- 用多个化学合成的寡聚脱氧核苷酸作为诱变引物,对枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E或APr E)基因进行体外突变,借此系统地探讨了基因多位点定点突变中引物的类型和数量、引物的分布、引物间的相互位置、引物与模板DNA间摩尔数比等因素对突变效果的影响。
- 肖谷田谢毅王顺德林卿叶韫辉吴小舟
- 关键词：定点突变蛋白质基因工程突变
- 重组血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达被引量：8
- 1997年
- 目的:使重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大肠杆菌中得到高效表达.方法:通过构建表达重组VEGF的质粒PRL621/VEGF,并在大肠杆菌中高效表达.结果:表达量约占菌体总蛋白的40%.对形成包含体的表达产物进行变性,初步复性处理,得到重组人VEGF粗提液,鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生长活性,N-端15个氨基酸序列分析结果,与天然VEGF蛋白质相应序列一致.
- 何延政张培华刘建平王顺德蒋米尔陆民黄新天林卿谢毅
- 关键词：血管内皮细胞大肠杆菌VEGF
- 用PCR技术克隆细小病毒H－1部分非结构蛋白基因
- 1995年
- 应用ＰＣＲ技术定向克隆了细小病毒Ｈ－１的非结构蛋白（ＮＳ）部分基因片段。自行设计并合成了ＰＣＲ引物△Ｐ３和△Ｐ４，在两个引物中分别引入两个突变碱基，使扩增后的ＤＮＡ片段的两端含有限制性核酸内切酶ＨｉｎｄⅢ或ＢａｍＨＩ的酶切位点，经双酿切法把该ＤＮＡ片段重组到ｐＵＣ１１８质粒中。对插入片段的ＤＮＡ序列测定和分析结果证实该片段为Ｈ－１ＮＳ－１基因序列。以此重组质粒为探针，采用分子杂交的方法，分别测定了Ｈ－１及ＭＶＭＤＮＡ在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备Ｈ－１的质量监测、Ｈ－１及ＭＶＭＮＳ－１蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。
- 黄青山黄建罗祖玉王顺德刘为平
- 关键词：细小病毒H-1聚合酶链反应非结构蛋白基因
- 血蓝蛋白在非线性分子进化上的意义被引量：4
- 1998年
- 在强自然选择（包括天文、地质、地理和生物诸灾变因子群）作用下，部分生物大分类元之所以绝灭而另一些生物不但幸存且有了大爆炸式的演化，其中一个极重要的原因可能是发生了同功分子的替代，这种变化显然是非线性的。本文以血红蛋白替代血蓝蛋白行使分子肺功能，推测三叶虫绝灭的秘密，并在此基础上揭示了非线性分子进化的一个新内容———同功替代式的非线性分子进化。
- 吕宝忠王健王顺德
- 关键词：分子进化血蓝蛋白
- 细小病毒与致癌蛋白质序列同源性比较佐证细小病毒无致癌潜力
- 1991年
- 在Micro Vax II及IBM/PC机上用Framis,Genepro软件,蛋白质、核酸序列数据库Swissprot,PIR,EMBL和Genbank,比较了H-1或MVM的四种蛋白质与现已报道的致癌蛋白质序列的同源性。结果表明,它们之间的配对百分数很低且是随机的,这可能是细小病毒没有致癌潜力的佐证。本实验室还初步证明PV MVM可以杀死经人Ha-ras与v-myc共转染大鼠胚胎成纤维细胞形成的转化细胞,这将为临床治疗抗放射线的人癌提供新途径。
- 罗祖玉陈涛生严尚军王顺德刘为平王健孙俭波
- 关键词：病毒蛋白质序列同源性致癌
- 绛红色小单孢噬菌体MPh1在大肠杆菌中有启动子功能的DNA片段的克隆及顺序测定
- 1995年
- 从绛红色小单孢噬菌体Ｍｐｈ１ＤＮＡ中，用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＧＡ４６克隆到在大肠杆菌中具有启动子功能的ＤＮＡ片段，筛选到的启动子功能片段具有抗四环素能力达１００μｇ／ｍｌ以上。对这些活性片段进行分子杂交，证明确实来自绛红色小单孢噬菌体Ｍｎｈ１。在此基础上，对其中一个２５０ｂｐ长的片段从克隆位点的一端进行了ＤＮＡ序列分析，其结构类似于大肠杆菌启动子。并进行了Ｇ＋Ｃ百分比的统计和限制性内切酶位点分析。
- 周健明陈孝康杜艳王建红汪训明王顺德江行娟杨庆云
- 关键词：噬菌体克隆DNA测序
- 寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因被引量：6
- 1997年
- 用５个化学合成的寡聚脱氧核苷酸片段作为诱变引物，对枯草杆菌蛋白酶Ｅ基因（ＡｐｒＥ）同时进行体外诱变．转化子经打点杂交及温度梯度洗膜法筛选出了若干在５个预定位点同时突变了的突变子，其突变效率达到５０％．同时还得到了１个四点突变的突变子．突变子经ＤＮＡ测序分析。
- 谢毅肖谷田王顺德王顺德张婕徐万祥吴小舟
- 关键词：定点突变枯草杆菌蛋白酶寡聚脱氧核苷酸诱变
