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新疆羊源戊型肝炎病毒基因型分析及间接ELISA检测方法的建立: 本研究分为以下几个部分：1.从戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)IgG检测阳性的新疆羊场采集54份羊粪便，利用逆转录套式聚合酶链方法(RT-nPCR)，检测HEV RNA，其中6份为阳性，阳性率为...; 王永霞; 关键词：戊型肝炎病毒基因型分析间接ELISA检测血清学诊断; 文献传递

猪戊型肝炎病毒ORF2-62的克隆、表达及间接ELISA方法的初步建立被引量：1: 2012年; 为了获得具有反应原性的重组蛋白,以该蛋白建立初步的间接ELISA检测方法。本研究通过RT-PCR从猪粪便中克隆了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2与急性期血清反应的抗原决定簇基因片段,将该片段插入pET-32a表达载体,命名为pET32a-ORF2-62,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用1.0mmol/L IPTG进行诱导表达,通过Western-blotting检测其反应原性,并利用镍柱亲和层析纯化所获目的蛋白。结果,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为30 600,Western-blotting显示重组蛋白与HEV阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。经方阵滴定确定最佳包被浓度为7.7mg/L,血清最佳稀释比为1∶40。利用大肠杆菌表达的HEV重组蛋白建立了间接ELISA检测方法,此方法的建立为戊型肝炎早期诊断提供了一种快速简便的血清学诊断方法。; 王永霞郝成武马勋; 关键词：戊型肝炎病毒 ORF2 原核表达间接ELISA

戊型肝炎病毒流行病学研究进展被引量：9: 2010年; 戊型肝炎(HE)是由肝炎病毒科(hepeviridae)肝炎病毒属(hepevirus)戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)所引起的一种人兽共患传染病,主要经粪—口途径传播。对食源性戊型肝炎病毒感染的预防与控制、异种器官移植及猪源细胞的使用有重要意义。作者就该病近年的流行病概况、传播途径、动物宿主及人工感染试验进行了综述。; 王永霞郝成武马勋; 关键词：戊型肝炎流行病学

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ N端基因的克隆、抗原表位的分析及表达被引量：1: 2011年; 参照猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)ApxⅣ基因序列(AF021919),从临床分离株2009JH扩增出1段2 427bp的序列,应用DNAstar等软件进行了序列分析和抗原表位的预测,利用PCR扩增了包含预测抗原位点的3个片段,ApxⅣ1(1～1 503bp)、ApxⅣ2(1 051～2 427bp)、ApxⅣ3(1 051～1 503bp),并构建了原核表达载体pET-ApxⅣ1,pET-ApxⅣ2,pET-ApxⅣ3。将重组表达质粒转入E.coli BL21,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot检测。结果显示,2009JH分离株ApxⅣN端序列与参考序列(AF021919)的同源性为98.00%,与血清1型、2型和7型的同源性分别为98.23%,99.46%,98.06%。3个片段的重组质粒分别诱导表达出相对分子质量为55 000,50 000,20 000的蛋白,Western blot检测显示除20 000蛋白未检测到特异性条带外,其余有很好的反应原性。; 郝成武王永霞马勋; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌抗原表位克隆表达

猪胸膜肺炎放线杆菌新疆株的分离鉴定及ApxⅣA基因的克隆与序列分析被引量：1: 2010年; 从新疆北疆4个规模化猪场的20份发病猪病料中分离到1株细菌。经形态染色镜检、培养特性、生化特性和部分生物学特性试验鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌。根据猪胸膜肺炎放线杆菌ⅣA毒素基因特异性引物进行PCR扩增,得到1条与预期大小一致的2427bp的条带,将PCR产物纯化后克隆至pMD19-T载体上并测序。结果表明,该片段的碱基序列与GenBank中参考序列的同源性为98%,并与三株标准株比较,同源性分别为98.23%、99.46%和98.06%。; 郝成武王永霞李尚华马勋

新疆羊粪便戊型肝炎病毒RNA的检测与序列分析被引量：3: 2010年; 【目的】为了了解新疆地区羊群中是否存在戊型肝炎的感染,我们从戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)IgG检测阳性的新疆某羊场采集54份1-3岁的羊粪便,【方法】利用逆转录套式聚合酶链方法(RT-nPCR),检测HEVRNA,其中6份为阳性,阳性率11.11%。【结果】将PCR扩增产物克隆,测序并进行序列分析,结果表明,6株羊源HEV检测株在HEV ORF2 189bp 99.38%-100%,为同一基因型;与HEVⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性分别为78.67%-85.33%、81.33%-82.67%、78.67%-84.00%和84.67%-95.36%,与Ⅳ型最高同源性达94.04%-95.36%。以该189bp片段绘制进化树,发现与新疆牛源分离株、中国大陆猪源分离株(FJ610232)和中国大陆人源分离株(AJ272108)在同一分枝上,同属基因Ⅳ型;【结论】提示新疆羊群中可能存在HEV感染,并且羊可能是人类HEV传染源中除猪之外的新宿主。; 王永霞马勋; 关键词：戊型肝炎病毒基因型

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王永霞