熊德慧
- 作品数：11 被引量：31H指数：4
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省研究生科研创新项目湖南省普通高校青年骨干教师基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 东方田鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性被引量：13
- 2010年
- 目的对影响东方田鼠胚胎成纤维细胞(MfEF)分离和培养的因素进行探索,并观察其生物学特性。方法取室内繁殖饲养不同胎龄的东方田鼠胚胎分离成纤维细胞,通过原代和继代培养,分析比较不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度等因素对MfEF分离及培养的影响,观察MfEF的生长形态及其生物学特性。结果 MfEF为贴壁型生长,细胞形态多样,呈梭形、不规则多边形;采用0.125%的胰蛋白酶室温消化12～13 d胚胎组织5 min,以DMEM培养基添加15%小牛血清分离培养MfEF的效果最佳;MfEF2～7代增殖最旺盛。结论获得了实验室分离、培养MfEF的有效方法 ,为进一步深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定了基础。
- 成钢盖楠熊德慧胡维新
- 关键词：东方田鼠胚胎成纤维细胞生物学特性
- 筛选和鉴定与东方田鼠抗性基因ILKAP表达蛋白相互结合的日本血吸虫童虫蛋白
- 2019年
- 目的筛选和鉴定与东方田鼠抗性基因整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(ILKAP)表达蛋白相互结合的日本血吸虫童虫蛋白。方法提取东方田鼠骨髓细胞蛋白和日本血吸虫童虫蛋白,进行免疫共沉淀,实验组为东方田鼠骨髓蛋白+日本血吸虫童虫蛋白+ILKAP抗体+磁性珠子,阴性对照组以兔IgG抗体代替ILKAP抗体,阳性对照组为东方田鼠骨髓蛋白或日本血吸虫童虫蛋白。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,切取差异性蛋白条带通过基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDITOF-MS)鉴定,获得的混合物肽片段利用Mascot软件进行分析检索。分别以东方田鼠骨髓cDNA和日本血吸虫童虫c DNA为模板, RT-PCR扩增东方田鼠ILKAP (Mf ILKAP)基因和日本血吸虫表膜抗原(Sj TA)基因。将Mf ILKAP和Sj TA基因分别克隆至真核表达载体Flag-pCMV-2b和Myc-pcDNA3.1/(-) b中,构建的重组质粒FlagILKAP-pCMV-2b和Myc-TA-pcDNA3.1/(-) b共转染至HEK293T细胞中作为实验组,设阴性对照组Myc-TApcDNA3.1/(-) b或Flag-ILKAP-pCMV-2b和空白对照组Myc-pcDNA3.1/(-) b或Flag-pCMV-2b。用抗体Myc、 Flag以及ILKAP分别与转染后的HEK293T细胞总蛋白进行免疫共沉淀和蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果东方田鼠骨髓细胞蛋白和日本血吸虫童虫蛋白经过免疫共沉淀实验,结果显示,实验组与阴性对照组、阳性对照组相比,有差异条带。经MAIDI-TOF-MS鉴定,利用Mascot软件中的串级质谱数据搜索功能进行搜索鉴定,鉴定出与东方田鼠ILKAP抗体相互作用的日本血吸虫童虫蛋白8种。RT-PCR结果显示, ILKAP和TA在东方田鼠骨髓和日本血吸虫童虫中均有表达,东方田鼠骨髓ILKAP的扩增产物为1 100～1 200 bp,理论值为1 147 bp,日本血吸虫童虫TA基因的扩增产物大小为500～600 bp,理论值为561 bp。质粒pCMV-Tag 2b、 pcDNA3.1/myc-His (-) b经酶切后,均有单一条带,分别�
- 李荣熊德慧胡维新
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫免疫共沉淀
- 东方田鼠HSP90α和KPNA2基因表达及体内抗日本血吸虫效果比较观察
- 2019年
- 目的比较东方田鼠抗日本血吸虫基因HSP90α和KPNA2的表达差异及体内抗虫效果差异。方法RT-PCR扩增并比较健康东方田鼠新分离的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、皮肤、骨髓组织中HSP90α和KPNA2的表达情况。40只雄性昆明小鼠随机分为空白对照组(DMEM培养基)、阴性对照组(pLXSN质粒转染病毒)、pLXSN-HSP90α组和pLXSN-KPNA2组等4组,每组10只,各组分别于第1、3、7 d每鼠尾静脉注射重组质粒转染病毒(2×10^6 cfu/ml)或培养基0.2 ml。注射后第2天,各组小鼠腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)尾/鼠。感染后第42天,剖杀小鼠,门脉灌注检获成虫,测量死亡后合抱及单性虫体长度,计算虫荷、减虫率、每克肝虫卵数(LEPG)、肝脏减卵率,HE染色观察肝脏病理变化,观察比较HSP90α和KPNA2对日本血吸虫感染小鼠的保护效果。结果RT-PCR结果显示,HSP90α在东方田鼠脑、骨髓中高表达,而KPNA2在心、肾和肌肉中高表达。体内实验结果显示,pLXSN-HSP90α组和pLXSN-KPNA2组小鼠的肝脏颜色分别呈灰黄色和灰黑色,虫荷分别为(11.3±1.1)、(11.6±1.3)条,血吸虫成虫体长分别为(1.19±0.04)、(1.21±0.05)cm,LEPG分别为1852.0±392.4、1035±485.4,与阴性对照组[(16.7±1.3)条、(1.39±0.06)cm、3644.0±523.6]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两个实验组的虫荷、成虫体长差异无统计学意义(P>0.05),而LEPG指标差异有统计学意义(P<0.05)。两组减虫率分别为40.8%和39.4%(P>0.05),肝减卵率分别为57.9%和76.5%(P<0.05),与阴性对照组(12.6%、17.3%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。肝组织切片HE染色镜下观察显示,pLXSN-HSP90α组和pLXSN-KPNA2组小鼠的肝脏虫卵结节数量均远少于阴性对照。结论东方田鼠抗日本血吸虫基因HSP90α和KPNA2在脑、骨髓、心脏、肾脏和肌肉组织中表达存在差异;两者对日本血吸虫感染小鼠保护效果在减卵率和LEPG存在差异。
- 成钢王芊薄龚强熊德慧
- 关键词：东方田鼠HSP90Α日本血吸虫基因表达
- 开放式教学法在分子生物学教学中的实践被引量：8
- 2006年
- 在分子生物学的教学过程中,我们以鼓励学生的创新能力,提高学生综合素质为目标,在教学资源、教学内容、教学评价、教学方法上尝试了开放式教学法,给学生提供更多的学习机会和环境,激发学生学习的热情,培养学生的自学能力、独立思考和解决问题的能力。
- 熊德慧胡维新
- 关键词：分子生物学开放式教学
- 东方田鼠日本血吸虫抗性基因及其编码的多肽
- 本发明公开了东方田鼠日本血吸虫抗性基因及其编码的多肽，本发明利用表达克隆技术，从东方田鼠骨髓cDNA文库中分离到一个抗日本血吸虫的抗性相关基因E77.43，根据该基因的第532到867位核苷酸序列，编码得到产物为111个...
- 胡维新秦志强熊德慧
- 文献传递
- 东方田鼠抗日本血吸虫相关基因E77.43全长cDNA的克隆及生物信息学分析
- 血吸虫病是一种人畜共患寄生虫病。流行病学调查和人工感染实验研究表明，东方田鼠对日本血吸虫感染具有天然抗性，而且这种性状能稳定遗传。
在前期研究中，课题组建立了东方田鼠骨髓细胞cDNA文库，并利用表达克隆法从东方...
- 熊德慧
- 关键词：日本血吸虫抗性相关基因CDNA末端快速扩增技术
- 文献传递
- 人参植物高质量RNA的分离及其皂苷生物合成相关新基因GBR6的表达分析被引量：5
- 2004年
- 为从富含多糖的人参植物组织中分离出高质量的RNA,使用改进的两种异硫氰酸胍法,可从人参植物根组织中提取到较高产量和质量的总RNA。每克新鲜组织的RNA产量在80～110μg之间;经琼脂糖凝胶电泳分析,可见到28S和18SrRNA两条完整、清晰的条带;紫外分光光度法测得的A_(260)/A_(280)比值位于1.8～2.0。而且,使用该改良法分离的RNA,可广泛用于检测基因表达的RT-PCR与Northern印迹杂交分析以及cDNA文库构建等植物分子生物学研究。
- 罗志勇刘水平陈湘晖文斌陆秋恒罗建清熊德慧胡维新
- 关键词：RNA皂苷生物合成基因基因表达异硫氰酸胍法
- 东方田鼠日本血吸虫抗性基因及其编码的多肽
- 本发明公开了东方田鼠日本血吸虫抗性基因及其编码的多肽，本发明利用表达克隆技术，从东方田鼠骨髓cDNA文库中分离到一个抗日本血吸虫的抗性相关基因E77.43，根据该基因的第532到867位核苷酸序列，编码得到产物为111个...
- 胡维新秦志强熊德慧
- 文献传递
- 东方田鼠胚胎成纤维细胞永生化细胞系的建立被引量：9
- 2010年
- 目的建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料。方法运用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线。结果阳性细胞克隆已扩大培养并稳定传代50代,经鉴定SV40T抗原已整合到东方田鼠胚胎成纤维细胞中且稳定表达。结论成功建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系。
- 成钢罗赛群盖楠熊德慧李荣胡维新
- 关键词：东方田鼠胚胎成纤维细胞永生化SV40T抗原
- 重组病毒rAAV2-MfE77.43转导小鼠对日本血吸虫攻击感染的抵抗作用被引量：3
- 2016年
- 目的探讨东方田鼠(Microtus fortis)骨髓E77.43基因片段(Mf E77.43)对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)攻击感染的抵抗作用。方法将Mf E77.43构建至重组腺相关病毒(AAV2)载体上,磷酸钙共沉淀法转染HEK293细胞,纯化重组病毒rAAV2-Mf E77.43后,提取转染后细胞总RNA,RT-PCR检测E77.43基因表达情况,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析rAAV2-Mf E77.43纯度。将18只昆明小鼠随机分为3组,每组6只,实验组每鼠于第0、3、7天肌内注射生理盐水稀释5倍的rAAV2-Mf E77.43病毒液400μl,阴性对照组和空白对照分别注射等量p AAV空载体和生理盐水。每次注射前取小鼠尾静脉血,斑点ELISA法检测小鼠血浆中E77.43表达情况。末次注射后,用日本血吸虫尾蚴经小鼠腹部贴片进行攻击感染,40条/鼠。感染后第41天,剖杀小鼠,分别收集各组小鼠的肝脏和小鼠体内的血吸虫成虫,计数成虫数和每克肝脏虫卵数(LEPG),计算减虫率和减卵率,HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿病理特征。结果RT-PCR检测获得约330 bp的目的DNA片段。SDS-PAGE分析结果显示,重组病毒rAAV2-Mf E77.43外壳蛋白可见3条特征性蛋白条带,相对分子质量(Mr)分别为87 000、72 000、62 000,且杂带较少,病毒纯度较好。斑点ELISA法检测结果显示,小鼠注射rAAV2-Mf E77.43后第3天,血浆中E77.43蛋白开始表达,且稳定表达至第41天。实验组小鼠体内日本血吸虫成虫数和LEPG分别为20.16±3.93和19 800±2 715,均低于阴性对照组的29.16±2.44和28 000±2 192(P<0.01);实验组的减虫率和减卵率分别为27.3%和26.2%。HE染色可见,实验组小鼠肝脏虫卵周围嗜酸粒细胞和浸润炎性细胞较少,并以单个肉芽肿较为多见。结论东方田鼠E77.43基因对血吸虫感染具有一定的预防保护效果,提示E77.43基因可能参与东方田鼠天然抵抗日本血吸虫感染。
- 王红梅熊德慧罗赛群杨杰钱颖骏秦志强
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫腺相关病毒载体
