杨兴
- 作品数：8 被引量：13H指数：3
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- 牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及分子分类学分析
- 2009年
- 为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计2对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,对测序结果用DNAMAN软件对其与GenBank上8个虫株相关序列进行同源性比较,建立系统发育树。结果显示,牛瑟氏泰勒虫中国延边株的18SrRNA基因大小为1 744 bp,瑟氏泰勒虫延边株、兰州株、日本株以及水牛泰勒虫中国株彼此之间亲缘关系最近;瑟氏泰勒虫延边株与突变泰勒虫亲缘关系较远。
- 沈岩许应天李静栾杨杨兴
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫RRNA基因克隆
- 牛瑟氏泰勒虫套式PCR检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2010年
- 根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33基因序列设计2对特异性引物,建立套式PCR检测方法。该方法与弓形虫RH株、猪附红细胞体和犬新孢子虫均无交叉反应,能检测到的最低DNA量为15 fg。在75份临床样本检测中,62份为阳性,阳性率为82.7%。由此可见所建立的套式PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于牛瑟氏泰勒虫急性感染和隐性感染的早期诊断,为该病的临床检测、流行病学调查、进出口检疫和实验室研究提供了新的技术手段。
- 杨兴许应天白雪梅沈岩孙平杰Ying-tianXue-meiPing-jie
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫套式PCR检测方法猪附红细胞体犬新孢子虫
- 牛瑟氏泰勒虫p33双拷贝基因的真核表达
- 2011年
- 为构建牛瑟氏泰勒虫p33双拷贝基因真核表达质粒,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,应用SOE-PCR技术得到牛瑟氏泰勒虫p33双拷贝基因,将其先克隆到pMD18-T-Simple载体,再亚克隆到真核表达载体pVAX1中,得到重组质粒pVAX1-2p33。对该重组质粒进行PCR、酶切鉴定及测序后,采用脂质体法将其转染到BHK-21细胞,用RT-PCR和IFA进行鉴定。结果表明,牛瑟氏泰勒虫p33双拷贝基因真核表达质粒pVAX1-2p33构建成功并可以在BHK-21细胞中表达。本试验结果为p33双拷贝基因的免疫学研究奠定了基础。
- 杨兴许应天严昌国高旭孙平杰张丽霞
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫真核表达
- 牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及分子分类学研究
- 为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18SrRNA基因序列设计两对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定...
- 沈岩许应天李静栾杨杨兴
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫克隆
- 文献传递
- 牛瑟氏泰勒虫双拷贝p33表面蛋白基因在原核细胞中的串联表达被引量：4
- 2010年
- 为串联融合表达牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)p33表面蛋白,本研究根据GenBank中登录的T.sergenti p33基因序列(D87198),在去掉信号肽的部分设计两对引物。PCR扩增出两段相同的p33基因(p331、p332),大小均为684bp,并将两个基因片段按顺序依次插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建pGEX-p331-p332(2p33)。将pGEX-2p33重组质粒转化E.coli BL21中进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示,该融合蛋白获得了高效表达,分子量约为80ku,表达产物以包涵体的形式存在。Western blot试验表明,融合蛋白可被T.sergenti阳性血清识别,具有较好的反应原性。该蛋白的串联融合表达为T.sergenti新型疫苗的研究奠定了基础。
- 杨兴许应天张守发沈岩白雪梅
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫
- 应用间接荧光抗体技术检测林蛙嗜水气单胞菌被引量：7
- 2010年
- 以感染嗜水气单胞菌的林蛙各组织脏器为抗原,以热灭活的嗜水气单胞菌为免疫原,免疫家兔制备兔抗嗜水气单胞菌血清为第一抗体,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG作为二抗,建立了间接荧光抗体试验方法。分别采用2.5%戊二醛5 min、甲醇10 min、冷丙酮1 h 3种固定方法固定抗原,然后滴加不同稀释倍数的兔抗嗜水气单胞菌血清、羊抗兔IgG-FITC,于荧光显微镜下观察。结果表明,2.5%戊二醛固定腹水5 min,兔抗血清抗体效价为1∶80,荧光二抗的最佳稀释倍数为1∶4000。
- 白雪梅李太元杨兴李艳茹孙丹丹董丹
- 关键词：荧光抗体技术林蛙嗜水气单胞菌
- 牛瑟氏泰勒虫pVAX1-2p33真核表达质粒的构建及其免疫学初步研究
- 牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)寄生于牛的红细胞内而引起的一种以高热、贫血、消瘦和体表淋巴结肿大等临床症状的一种血液原虫病。在我国该病的流行区域逐年扩大,发病率和死亡率...
- 杨兴
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫
- 文献传递
- 延边地区黑熊肠道寄生虫感染情况调查
- 2009年
- 杨兴金清洙许应天白雪梅沈岩李剑锋王亮
- 关键词：肠道寄生虫黑熊寄生虫病生长发育慢性肠炎
