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蛇毒锯鳞蝰素基因Leul4－Lys15－Glu16的定点突变被引量：1: 1996年; 本研究的目的是利用蛋白质工程定点突变的方法，在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列ＲＧＤ（１４位精氨酸残基，１５位甘氨酸残基，１６位天冬氨酸残基），以其增加该分子的生物活性，并探讨蛋白质一级结构，空间结构和功能的关系。在质粒ｐＪＣ２６４的基础上，利用ＰＣＲ定点突变方法，对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ１５－Ｇｌｕ１６进行定点突变，使相应的ＤＮＡ片段变成表达Ａｒｇ１４－Ｇｌｙ１５－Ａｓｐ１６的核苷酸顺序，经酶切和ＤＮＡ测序鉴定正确。ＣＮＢｒ裂解后，用反相ＨＰＬＣ分析，分离制备突变体蛇毒锯鳞蝰素，制备的突变体蛇毒锯鳞蝰素的Ｎ－末端１０个氨基酸残基与天然蛇毒锯鳞蝰素的相同。在人的富含血小板血浆测活体系中，经１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，突变体蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为３．０×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ；重组野生型蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为４．０×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ；天然蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ_（５０）为２．８×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ。此外，就蛇毒锯鳞蝰素中保守序列Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ以及其空间构象对蛇毒锯鳞蝰素抑制血小板凝集之间的关系进行了讨论。; 李洪超李雄彪胡美浩; 关键词：蛇类基因定点突变

蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建，表达及其活性研究被引量：4: 1995年; 通过ＰＣＲ定点突变的技术，将蛇毒蛋白Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ基因的Ｃ端进行了突变（Ａｌａ４８→Ａｒｇ４８→，Ｔｈｒ４９→Ｖａｌ４９），模拟纤维蛋白Ｎ端的四肽（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｖａｌ），以期增加Ｅｃｓ（Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ）的活性。突变的基因重组到表达质粒ｐＪＣ２６４上，经ＩＰＴＧ诱导，以ＣｈｅＹ－Ｅｃｓ融合蛋白方式进行了表达，表达量占菌体总蛋白的１５～２０％。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５初步纯化该融合蛋白，然后用ＣＮＢｒ裂解，透析，冻干，反相ＨＰＬＣ纯化Ｃ端突变体Ｅｃｓ蛇毒蛋白，Ｎ端十个氨基酸分析与天然的相符，在ＰＲＰ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ）测活体系中，１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，Ｃ端突变体Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性约为野生型４倍。得到了Ｅｃｓ的Ｃ端突变后使Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性提高的结果。; 李洪超李雄彪胡美浩; 关键词：蛇类 ECS 突变基因

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李雄彪

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