李锴男
- 作品数：26 被引量：49H指数：4
- 供职机构：济南军区总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 牛蛙核糖核酸酶在大肠杆菌中的高效表达及其初步纯化
- 2004年
- 目的:利用大肠杆菌系统表达重组RC蛳RNase融合蛋白,并对其表达产物进行初步纯化。方法:以PCR方法扩增出RC蛳RNase基因,插入到融合蛋白原核表达载体PET32a中,构建重组表达载体PET蛳RC蛳RNase,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plyS,利用异丙基硫代蛳β蛳D蛳半乳糖苷(IPTG)诱导表达。工程菌经超声碎菌,离心后,采用Ni亲合层析法在变性条件下进行初步纯化。结果:经IPTG诱导后,SDS蛳PAGE和免疫印迹分析显示,工程菌在相对分子质量为3.1×104处出现一条新生蛋白带,目的蛋白占菌体总蛋白的34%,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化,纯度可达90%以上。结论:重组融合蛋白RC蛳RNase在大肠杆菌中获得成功表达,纯化效果令人满意,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了良好的基础。
- 付勇刘彦仿杨守京赵君李锴男
- 关键词：核糖核酸酶融合蛋白纯化
- 肝癌靶向性T淋巴细胞活化融合基因hdsFv-CD3ζ的构建、表达与应用的研究
- 肝细胞性肝癌/(hepatocellular carcinoma,HCC/)简称肝癌，是恶性程度极高的肿瘤，在我国有着较高的发病率和死亡率，目前，临床对肝癌的诊治仍然十分困难。随着现代分子生物学，基因工程技术和蛋白质工程...
- 李锴男
- 关键词：肝癌靶向性治疗T淋巴细胞
- 文献传递
- 核呼吸因子研究的新进展
- @@线粒体是细胞内产生能量的细胞器，通过氧化葡萄糖并由线粒体内膜呼吸链复合体氧化磷酸化(OXPHOS)合成ATP为机体提供能量。线粒体是真核细胞内唯一的由线粒体基因组(MitochondrialDNA,mtDNA)和核基...
- 王宝成李锴男毕经旺
- 关键词：线粒体细胞调控
- 文献传递
- microRNA和长链非编码RNA在呼吸系统疾病中的表达
- 2015年
- 非编码RNA包括microRNA(miRNA)和长链非编码RNA(1ncRNA),广泛存在于真核生物的基因组中,通过调控转译过程影响各种生物学效应,在多种生物体的重要生命过程中具有不可替代的作用。研究已证实呼吸系统疾病中miRNA存在差异性表达,而lncRNA可调节分子表型,两者的相互作用机制仍需大量实验进行研究。非编码RNA作为一种新型治疗途径的靶点,其具体作用机制及如何更好地应用于临床值得深入探讨。
- 魏炎李锴男毕经旺
- 关键词：呼吸系统疾病MICRORNA长链非编码RNA
- 肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD_(3ζ)的构建与表达
- 2004年
- 目的 :构建抗肝癌单链抗体融合CD3 ζ真核表达载体。 方法 :应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3 ,在 5′端及 3′端分别引入相应酶切位点 ;用RT PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3 ζ的胞内区、跨膜区基因 ,然后将其克隆于scFv的下游 ,并在5′端及 3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3 scFv CD3 ζ转入T细胞 ,采用免疫细胞化学的方法 ,利用抗CD3 ζ的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3 ζ的表达。 结果 :二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的cDNA片段为 73 5bp ,与已知的序列相符 ;CD3 ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为 2 94bp ,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3 ζ染色强度显著增强。 结论 :完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3 ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3 scFv CD3 ζ的构建 。
- 李锴男刘彦仿孙妍琳付勇赵君高娟杨守京
- 关键词：T淋巴细胞
- 抗肝癌hdsFv融合hEDN重组免疫毒素对体外培养的人肝癌细胞的杀伤作用
- 2005年
- 目的:探讨重组免疫毒素hdsFv-hEDN在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化,观察其体外杀伤作用。方法:利用IPTG诱导hdsFv-hEDN免疫毒素在大肠杆菌中的表达。诱导转化菌经超声碎菌、离心、N i-NTA Agarose亲合层析等步骤纯化,并通过SDS-PAGE和W estern-b lot进行分析及检测。采用MTT比色法观察其对人肝癌细胞的杀伤作用。结果:IPTG诱导后,hdsFv-hEDN在大肠杆菌中获得了可溶性表达,表达量为8%。表达产物纯化后,纯度达到基本均一。MTT结果表明,其对人肝癌细胞具有一定的杀伤作用。结论:本研究实现了hdsFv-hEDN重组免疫毒素在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化,获得了具有一定杀伤作用的抗肝癌重组免疫毒素。
- 付勇苏雪梅刘彦仿杨守京赵君李锴男邹赛英
- 关键词：免疫毒素单链抗体
- 前列腺癌中miRNAs的表达及其临床意义
- 2014年
- MicroRNAs属于内源性小分子非编码RNAs,它在多种肿瘤病理学过程中起着关键的调控作用。不同类型肿瘤中的microRNA的表达谱可用于疾病的诊断及预后的判断,且癌症组织中miRNAs的异常表达与临床病理学指标有关。外周血与组织中的miRNAs均有可能作为生物学标记物用于预测疾病的复发及患者生存期。此外,许多miRNAs还具有一定的治疗价值。本文旨在探讨组织来源与循环血液中miRNAs的诊断及预后在前列腺癌中的临床意义。
- 魏炎郭少鹭李锴男王俊毕经旺
- 关键词：前列腺肿瘤MICRORNAS生物学标记
- 竞争性内源RNA在不同类型肿瘤中的作用被引量：1
- 2015年
- 竞争性内源RNA(ce RNA)是一种相互作用的RNA转录本,通过竞争性结合并降低靶标微小RNA(mi RNA)的水平,解除信使RNA(m RNA)的抑制作用。肿瘤相关性ce RNA在多种肿瘤的形成过程中发挥关键作用。我们对肿瘤相关性ce RNA做简要综述,并简单分析其与靶标mi RNA的相互作用,为进一步理解ce RNA介导的肿瘤生成分子机制提供新思路。
- 魏炎李锴男李梦岩毕经旺
- 关键词：微小RNA长链非编码RNA肿瘤
- 乳腺癌组织NRF-1表达及其意义的探讨
- 2011年
- 目的:探讨乳腺癌组织中核呼吸因子-1(NRF-1)蛋白表达与乳腺癌发生、发展及临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化EnVision二步法,对211例乳腺癌组织和50例乳腺良性病变组织中NRF-1蛋白表达进行检测。结果:NRF-1蛋白表达定位于细胞核,着色呈棕黄色,乳腺癌中阳性表达(82.7%)低于乳腺良性病变组织阳性表达(100%),χ2=100.288,P=0.000;高分化乳腺癌NRF-1阳性率明显高于中、低分化乳腺癌(χ2=16.242,P=0.001;χ2=72.802,P=0.000),中分化乳腺癌也明显高于低分化乳腺癌,χ2=30.190,P=0.000。乳腺癌淋巴结转移患者NRF-1蛋白阳性表达率明显低于未转移者,χ2=12.025,P=0.007;TNM分期中I期NRF-1蛋白阳性表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ期,χ2=12.025,P=0.007。结论:NRF-1蛋白的表达可能与乳腺癌的发生发展密切相关,可作为乳腺癌患者疾病进展监控和预后观测的指标,具有临床应用价值。
- 李锴男赫军毕经旺王宝成陈洁秦艳李西启
- 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学
- 葡萄糖糖基神经酰胺合成酶特异性小干扰RNA表达载体的构建及其逆转乳腺癌细胞耐药的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 构建葡萄糖糖基神经酰胺合成酶(GCS)小干扰RNA表达载体,观察其对乳腺癌耐药细胞(MCF- 7 /ADR)GCS基因表达和耐药性的影响。方法 设计合成2对GCS基因的特异性siRNA,分别定向克隆入真核表达载体pSUPER,构建pSUPER -GCS1和pSUPER -GCS2重组质粒,脂质体LipofectAMINE2000介导转染MCF -7 /ADR细胞,空载体pSUPER转染作为对照,逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)分析GCSmRNA的表达,流式细胞仪观察GCS蛋白的表达,四氮唑盐法检测阿霉素对MCF -7 /ADR细胞的半数抑制浓度(IC50 ),流式细胞技术检测细胞凋亡率的改变。结果 酶切分析和测序证实成功构建了针对GCS的siRNA表达载体pSUPER -GCS1和pSUPER GCS2。两对重组质粒均可特异性抑制GCS基因表达,转染后48hGCSmRNA抑制率分别为89 .4%、88. 5%,GCS蛋白含量分别下降为8 .3%±1 .0%, 9. 2%±0 .8%,四氮唑盐法显示重组质粒对阿霉素耐药性相对逆转率分别为93. 7%、91. 6%,明显提高了乳腺癌细胞对于阿霉素的药物敏感性,流式细胞仪结果表明细胞凋亡率增加为15. 38±1 .16, 13. 92±1 .73,而空载体对照组无以上作用。结论 GCS特异性siRNA表达载体构建成功,且有效抑制了GCS基因表达,并通过诱导耐药细胞凋亡率增加,逆转乳腺癌细胞多药耐药。
- 孙妍琳周庚寅李锴男李文通宋现让高鹏
- 关键词：逆转特异性小干扰RNA合成酶神经酰胺
