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李林林: 作品数：24 被引量：53H指数：5; 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>; 发文基金：公益性行业(农业)科研专项广东省科技计划工业攻关项目广东省农科院院长基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒二重PCR检测方法的建立被引量：5: 2015年; 参考Gen Bank上已发表的鸭坦布苏病毒(DTMUV)NS5基因序列和产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体(penton)基因序列,分别设计了检测DTMUV和EDSV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为242 bp和181 bp。通过退火温度及引物浓度的优化,建立了针对这两种病毒的二重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法可以同时检测DTMUV和EDSV,且不与鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、番鸭呼肠孤病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒以及大肠杆菌的核酸发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对DTMUV的最低检出限为590个拷贝,对EDSV的最低检出限为3 260个拷贝;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好。通过检测两种病毒感染的阳性病料各10份,结果显示,该二重PCR检测方法对阳性样品的检出率可达100%。这表明该方法可以用于鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒的检测。; 孙敏华李林林董嘉文袁建丰邝瑞欢胡奇林; 关键词：二重PCR

鸭新城疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立被引量：1: 2012年; 为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1。以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1∶10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1∶10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0。试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应;可以检测出0.2μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍;批间和批内变异系数均小于10%。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础。; 孙敏华董嘉文吕殿红周秀蓉李林林胡奇林; 关键词：单克隆抗体夹心ELISA

iTRAQ标记技术及其在微生物比较蛋白质组学中的研究进展被引量：11: 2013年; 病原微生物的致病作用是由多种蛋白质共同参与下的病原微生物．宿主相互作用的复杂过程，因此应用比较蛋白质组学方法动态、整体和定量地分析病原微生物致病过程中蛋白质的差异表达谱，对于解析病原微生物的致病机制具有至关重要的作用。相对和绝对定量的等量异位标签技术（Osobafic tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）以其高通量、重复性好、能够处理复杂样本和同时进行定性、定量分析的优点，在生命科学各个领域中得到了广泛的应用。; 袁建丰李林林孙敏华董嘉文胡奇林; 关键词：比较蛋白质组学病原微生物致病作用致病过程致病机制

禽呼肠孤病毒σC基因的克隆和表达及ELISA抗体检测方法的建立: 将扩增得到的禽呼肠孤病毒(ARV)S1133毒株的σC基因克隆至pMD-18T-Simple载体，经酶切及测序鉴定，证明该基因片段为ARV σC基因。将该基因亚克隆至pET32a(+)成功构建了表达载体pET32a-σC...; 董嘉文孙敏华李林林胡奇林; 关键词：禽呼肠孤病毒抗体检测酶联免疫吸附法

鸭坦布苏病毒JM株E蛋白的截断表达及间接ELISA方法的建立: 本研究构建了重组质粒pET32a-E,该重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达,Western-blot分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗...; 董嘉文李林林孙敏华张建峰邝瑞欢张春红胡奇林; 关键词：E蛋白蛋白表达抗体检测

禽呼肠病毒σC基因的表达及ELISA抗体检测方法的建立: 2012年; 将RT-PCR扩增得到的禽呼肠病毒(ARV)S1133毒株的σC基因克隆至pMD-18T-Simple载体,经酶切及测序鉴定,证明该基因片段为ARVσC基因。将该基因亚克隆至pET32a(+)成功构建了表达载体pET32a-σC。该重组质粒在大肠埃希菌BL21中经1.0mmol/L IPTG诱导5h得到最佳表达。pET32a-σC蛋白的分子质量为55ku,Western blot分析表明,该重组蛋白能与ARV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。将纯化好的ARVσC蛋白作为包被抗原,确定了该方法的抗原最适包被浓度为2μg/mL,血清的最适稀释度为1∶400。用建立的ELISA方法检测接种过ARV疫苗的65份临床血清样品,测得44份为阳性,阳性率为67.7%;未接种ARV疫苗的30份血清样品检测结果均为阴性。; 董嘉文孙敏华李林林胡奇林; 关键词：禽呼肠病毒酶联免疫吸附试验

鸭黄病毒病灭活疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种鸭黄病毒病灭活疫苗及其制备方法<B>。</B>本发明的鸭黄病毒病灭活疫苗含有经灭活的鸭黄病毒毒株及佐剂，其制备方法如下：将鸭黄病毒毒株的生产用种毒进行大规模培养，收获病毒液；将收获的病毒液灭活后加入佐剂中...; 胡奇林孙敏华李林林董嘉文袁建丰; 文献传递

鹅细小病毒VP3基因的克隆及表达被引量：3: 2013年; 根据GenBank中的鹅细小病毒(GPV)全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,利用PCR对GPV-Fos han-2009株的VP3基因进行了扩增。经酶切、连接、转化后,获得了pET32a-VP3重组表达载体。经BL21(DE3)原核表达显示,VP3蛋白为包涵体形式,37℃下该蛋白最佳I PTG诱导浓度为1.2 mM,最佳诱导时间为5 h。SDS-PAGE分析显示所表达的VP3融合蛋白的相对分子质量约80 kD。West ern Bl ot证实该蛋白能与番鸭抗GPV阳性血清反应,这为GPV血清学诊断方法的建立提供了物质基础。; 孙敏华董嘉文李林林袁建丰邝瑞欢胡奇林; 关键词：鹅细小病毒 VP3基因克隆

番鸭细小病毒NS1基因的克隆与原核表达被引量：7: 2013年; 本研究利用PCR方法扩增番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MPV)非结构蛋白NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),构建重组表达质粒pET32a-NS1。将其转化受体菌E.coli Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,NS1基因在大肠杆菌中得到了表达,并且可与抗MPV的多克隆抗体发生特异性反应。MPV NS1基因的成功表达为研制MPV的诊断试剂盒、基因工程疫苗等奠定了基础。; 董嘉文孙敏华李林林袁建丰邝瑞欢胡奇林; 关键词：番鸭细小病毒 NS1基因克隆

检测鸭坦布苏病毒NS1抗体ELISA方法的建立被引量：2: 2017年; 为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况,本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的基础上,建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.188μg/孔,待检血清1:200稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:16000倍稀释时反应条件最佳。在最佳反应条件下,阴阳性临界值判定标准为0.467。用建立的间接ELISA方法对番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为6%和10%,显示该方法具有很好的稳定性。用建立的ELISA方法检测临床鸭坦布苏病毒感染鸭及攻毒蛋鸭的55份临床血清样品,测得52份为阳性,阳性率为94.5%,对36份阴性鸭群血清样品进行检测,36份为阴性,阴性率为100%。该方法为鸭坦布苏病毒的诊断和流行病学监测奠定了基础。; 孙敏华郭建伟李林林董嘉文邝瑞欢吴玄光张建峰胡奇林张春红; 关键词：NS1蛋白 ELISA

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