- 不同年龄兔骨髓间充质干细胞的体外生长特性分析被引量：2
- 2009年
- 目的观察不同年龄兔骨髓间充质干细胞(BMSC)在体外分离、培养、扩增的过程,并对其生长特性进行初步比较分析,为BMSC的临床应用提供技术方法和依据。方法选取出生1月、18月、36月的健康中国白兔,分成新生、成年、老年3组,采用密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合,分离培养BMSC,用噻唑蓝(MTT)法观察其增殖及生长特征,用流式细胞仪检测细胞表面标志。结果各组BMSC均贴壁生长,呈成纤维细胞样BMSC典型形态,贴壁率的观察和生长曲线显示,在相同的培养条件下,新生兔细胞增殖最快,细胞可扩增能力最强,而老年兔细胞增殖最慢,细胞可扩增能力最弱,成年兔细胞介于两者之间。结论利用密度梯度离心法结合贴壁培养法可以从不同年龄兔中获得高纯度的BMSC,干细胞的活性和增殖能力随着年龄的增加而降低。
- 李华青牛勃赵宝珍刘伯轩岳晓华李晶樊彩兰
- 关键词：间充质干细胞细胞培养
- Exendin-4在骨髓间充质干细胞治疗糖尿病中作用的实验研究
- 2型糖尿病(T2DM)是由遗传和环境共同作用而引起的一组以糖代谢紊乱为主要表现的临床综合征,由于胰岛素分泌、作用或两者同时存在缺陷引起碳水化合物、脂肪、蛋白质、水和电解质等代谢紊乱,可以引起多个系统器官同时损伤的慢性并发...
- 李华青
- 关键词：骨髓间充质干细胞EXENDIN-4细胞治疗分化胰岛素分泌细胞
- 文献传递
- BrdU体外示踪大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化被引量：3
- 2009年
- 背景:目前还未找到一个理想的标记性分子用来鉴定骨髓间充质干细胞,因此也就不能保证骨髓间充质干细胞的同质性。目的:以BrdU体外示踪标记验证大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导后的分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/10在山西医科大学完成。材料:4周龄Wistar大鼠由山西医科大学实验动物中心提供。方法:密度梯度离心+贴壁培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,达80%融合时胰蛋白酶消化传代扩增。取5×1010L-1个骨髓间充质干细胞接种于25mm培养皿,加入含地塞米松、β-磷酸甘油、维生素C和体积分数为10%胎牛血清的L-DMDM培养基进行成骨诱导。取第3代骨髓间充质干细胞,加入终浓度为10μmol/LBrdU进行体外示踪,200倍荧光显微镜下随机选取10个视野,通过计数阳性细胞与非阳性细胞数得到BrdU标记率。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原,观察诱导后成骨分化潜能,体外BrdU标记率。结果:分离纯化的骨髓间充质干细胞呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主,传至第3代呈明显的同向性改变,漩涡状盘旋排列,细胞存活率均大于95%,至第7代仍未见细胞生长减缓现象;CD44,CD71,CD105均呈阳性表达,CD45呈阴性表达;成骨诱导后Vonkossa染色可见骨髓间充质干细胞中有黑色颗粒沉积;BrdU标记率>90%。结论:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,可在体外长期培养,并具有成骨分化潜能;BrdU可成功标记骨髓间充质干细胞,是安全、有效、便捷的体外示踪方法。
- 樊彩兰刘伯轩李晶岳晓华李华青张悦红王建华牛勃
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨BRDU
- 骨髓间充质干细胞移植后2型糖尿病鼠血糖及肾脏病变的改善被引量：7
- 2009年
- 背景:胰岛细胞移植可改善胰岛功能,但其来源匮乏。骨髓间充质干细胞可被诱导分化成胰岛细胞,在糖尿病足、糖尿病心肌病、糖尿病神经病变中具有较强的组织修复能力。目的:观察骨髓间充质干细胞移植后在2型糖尿病模型鼠胰腺、肾脏组织中的存活及转归,及对血糖及肾脏病变的改善。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2008-02/07在山西医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。材料:雄性Wistar大鼠由山西医科大学实验动物中心提供,造模使用的链脲佐菌素为Sigma公司产品。方法:取1只大鼠体外分离培养骨髓间充质干细胞,反复贴壁纯化,传至第3代行BrdU标记后用于移植。60只大鼠随机分为3组,模型对照组、细胞移植组向标准混合饲料中添加含体积分数为0.1的猪油和蛋黄高脂成分,喂养2个月后向大鼠腹腔内注射链脲佐菌素,血糖≥16.77mmol/L且维持3d稳定代表成功建立2型糖尿病模型。正常组采用标准混合饲料喂养2个月后,向大鼠腹腔内注射等容积柠檬酸缓冲液。造模成功后,细胞移植组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液0.5mL(细胞数1×106个),其余两组注射等量PBS液。主要观察指标:各组大鼠血糖浓度及三酰甘油、胰岛素水平的变化,肾组织病理学变化,细胞在肾脏及胰腺组织中的分布。结果:与移植前比较,移植后7,14,21d模型对照组血糖浓度无明显变化,细胞移植组血糖浓度明显下降(P<0.001);移植后21d与正常组比较,模型对照组及细胞移植组三酰甘油水平均显著升高(P<0.001),胰岛素水平均显著降低(P<0.001),但细胞移植组胰岛素降低幅度小于模型对照组(P<0.001)。糖原染色结果示模型对照组肾小球发生肥大,细胞移植组肾小球基质变薄,肥大得以改善。胰岛素免疫荧光染色后,模型对照组胰岛细胞明显减少,而细胞移植组胰岛细胞增加,在胰腺、肾脏组织中均可见Brd
- 刘伯轩刘师伟王建华樊彩兰李晶李华青岳晓华张悦红刘卓拉牛勃
- 关键词：骨髓间充质干细胞血糖肾小球肥大2型糖尿病
- 瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响被引量：2
- 2009年
- 背景:瘦素及其受体在中枢和外周多个部位均有表达,具有多种生物学功能,对于骨代谢有着重要的影响作用,但目前瘦素影响骨重建的机制尚未完全明了。目的:探讨瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2008-09在山西医科大学生化与分子生物学实验室完成。材料:健康志愿者髂骨骨髓由山西医科大学第二医院提供。瘦素为Sigma公司产品。方法:采用全骨髓法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代以1×108L-1密度接种至预置盖玻片的6孔培养板中,设立3组:成骨诱导组添加原代培养液后,再加入含10-8mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-磷酸甘油、50mg/L维生素C的成骨诱导培养基;成骨+瘦素诱导组添加成骨诱导培养基后,再加入50nmol/L瘦素;空白对照组仅加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液。主要观察指标:骨髓间充质干细胞表面标志表达、钙化结节染色结果、碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原及骨钙素含量、骨保护素和RANKL蛋白的表达。结果:第3代骨髓间充质干细胞CD44和CD71阳性率分别为95.21%,72.31%,CD34阳性率仅为0.39%。成骨诱导21d后vonKossa染色可见呈棕黑色的细胞外基质钙盐沉积。诱导14d与空白对照组比较,成骨诱导组、成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性及Ⅰ型胶原、骨钙素含量均明显升高(P<0.05);且成骨+瘦素诱导组各指标升高幅度明显高于成骨诱导组(P<0.05)。与成骨诱导组比较,成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞骨保护素蛋白的表达明显上调(P<0.05),RANKL蛋白的表达明显下调(P<0.05)。结论:瘦素作用于人骨髓间充质干细胞后可促使其向成骨细胞分化,可能通过骨保护素/RANKL途径发挥对骨代谢的调节作用。
- 李华青刘师伟刘伯轩赵宝珍刘卓拉张悦红牛勃
- 关键词：骨髓间充质干细胞瘦素成骨分化
- DAPI标记的骨髓间充质干细胞体内外示踪实验研究被引量：9
- 2009年
- 骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells。MSCs）是成体干细胞的一种，除参与构成造血微环境外，可分化为成骨、成软骨、脂肪、胰岛、骨骼肌、肌腱样组织等结构。在组织工程和细胞治疗方面具有广阔的应用前景。
- 刘伯轩刘师伟王建华樊彩兰李晶李华青岳晓华张悦红刘卓拉牛勃
- 关键词：骨髓间充质干细胞体内外示踪DACELLS
- 高糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响被引量：4
- 2008年
- 目的分离培养和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),探讨高浓度葡萄糖对BMSCs增殖及凋亡的影响。方法贴壁培养法分离纯化Wister大鼠BMSCs,体外培养和连续传代。将传至第三代的BMSCs用低糖-DMEM培养液(含葡萄糖5.6 mmol/L)制成细胞悬液,计数并接种于培养瓶中,待细胞贴壁后,分组加入含不同浓度葡萄糖(5.6 mmol/L、11 mmol/L、25 mmol/L、40mmol/L)的DMEM培养液,短期组培养3～4天,长期组培养4周。分别收集细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Annexin-V/PI法检测其凋亡。结果在实验研究中,与高糖对内皮祖细胞(endothelial p rogenitor cells,EPCs)等的影响不同,一定浓度的高糖并不显著抑制BMSCs的增殖,并不促进BMSCs的凋亡率显著增加。25 mmol/L的高糖有助于BMSCs成骨分化。结论短期和长期(4周)培养,BMSCs具有显著的高糖耐受性。与低糖条件相比,高糖提高了细胞的成骨分化能力。
- 岳晓华李晶刘伯轩樊彩兰李华青牛勃
- 关键词：骨髓间充质干细胞葡萄糖增殖凋亡
- 磁标记骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨不同时间及浓度超顺磁性氧化铁(SPIO)标记大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)标记效率、标记后细胞活力等情况,寻找最佳标记浓度和时间。方法配制含不同浓度SPIO培养基,加入MSCs孵育,于标记后不同时间行铁染色、细胞活力、铁含量测定。结果细胞活力检测显示标记1d和3d时,0μg/ml组与25μg/ml组,0μg/ml组与50μg/ml组,25μg/ml组与50μg/ml组的细胞拒染率差异无统计学意义(P>0.05)。铁含量测定显示标记浓度在50μg/ml,标记时间3d时铁含量最高。结论50μg/ml浓度,标记3d不仅标记效率高对细胞活力无影响,而且细胞内铁含量最多,为最佳标记浓度和时间。
- 李晶牛勃张辉刘伯轩岳晓华樊彩兰李华青张悦红王慧珍张栋闫峻
- 关键词：间质干细胞超顺磁性氧化铁
- 尼克酰胺预防NOD小鼠发生1型糖尿病的机制研究
- 探讨尼克酰胺(NA)对NOD鼠1型糖尿病(T1DM)发病率、胰岛炎的影响及其机制.NA有降低NOD鼠T1DM发病率及胰岛炎严重程度的作用,这种作用可能与其抑制胰岛细胞Fas表达使胰岛β细胞凋亡减少、影响淋巴细胞亚群分布从...
- 李华青
- 关键词：1型糖尿病NOD尼克酰胺细胞凋亡T淋巴细胞亚群
- 文献传递
- 高糖高脂对人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 骨髓间充质干细胞（BMSCs）是成体干细胞的一种，是骨髓中除了造血干细胞（HSC）外的另一类间充质干细胞，可分化为成骨、成软骨、脂肪、肌腱样组织等结构。BMSCs取材相对容易，体外适当培养仍然保持多向分化潜能，有利于自体移植。近年研究显示BMSCs在组织工程和细胞治疗方面具有重要的应用价值。本实验旨在研究高糖高脂对体外培养人BMSCs的影响。从而为进一步研究糖尿病患者的BMSCs以及移植BMSCs治疗糖尿病提供依据。
- 岳晓华李华青李晶刘伯轩樊彩兰王慧珍牛勃
- 关键词：骨髓间充质干细胞干细胞增殖高脂高糖BMSCS多向分化潜能
