李克勤
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人IL-18结合蛋白AcDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 克隆人IL-18结合蛋白A（hIL-18 BPa）的 cDNA,观察其在COS-7中的表达。方法 采用RT-PCR自人白血病细胞株jurkat中获得hIL-18BPa的cDNA,将其克隆至T-vector中,经测序确证后,将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1（+）中。脂质体介导法将其转染COS-7细胞,72h后收集上清纯化,用BCA法测定hIL-18 BPa的含量,用ELISA法测定其活性。结果获得的IL-18BPa的cDNA序列与gene bank登录的cDNA序列一致。上清液中hIL-18 BPa含量为1.4mg/L,并具有良好的生物学活性。结论 成功克隆hIL-18 BPa基因,并实现了在COS-7细胞中的瞬时表达,为研究其活性奠定了基础。
- 黄丰吴达龙万永玲吴德政袁志宏李克勤
- 关键词：COS-7细胞CDNA克隆
- 人IL-18结合蛋白A在CHO细胞中表达的研究被引量：4
- 2002年
- 目的 克隆人IL 18结合蛋白A (hIL 18BPa)的cDNA ,构建真核表达载体及其在CHO细胞中的表达。方法采用RT PCR ,自人白血病血细胞株Jurkat中获得hIL 18BPa的cDNA。将其克隆至T vector中 ,经测序确证后 ,将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3 1中。以脂质体介导法 ,将其转染CHO细胞 ,用G4 18筛选抗性克隆 ,ELISA法测定其生物学活性。结果 获得的IL 18BPa的cDNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hIL 18BPa插入载体pcDNA3.1后 ,成功地构建稳定表达的载体。转染CHO细胞后 ,获得可稳定表达hIL 18BPa的基因工程细胞株。经纯化后 ,证明具有良好的生物学活性。结论 成功地克隆hIL 18BPa基因 ,并实现了在CHO细胞中的稳定表达 。
- 黄丰万永玲吴达龙吴德政袁志宏李克勤
- 关键词：基因表达CHO细胞
