李付娟
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
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- ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化被引量：4
- 2013年
- 根据Genbank提供的猪ADIPOQ基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGPU6/GFP/Neo中U6启动子的下游,转化DH5α菌株,双酶切鉴定正确后进行测序,将构建好的真核表达载体转染前体脂肪细胞,并对条件进行优化。限制性内切酶PstⅠ和BamHⅠ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,测序结果显示插入片断与设计序列完全一致,证明重组质粒构建成功,转入到前体脂肪细胞中,可以看见绿色荧光蛋白表达。当质粒浓度0.6μg,脂质体2000是1.2μL,两者质量/体积比为l∶2时,此时转染效率最高,达到53.9%。成功构建了猪ADIPOQ基因的shRNA真核表达载体,并成功将该质粒转入猪的前体脂肪细胞中去,还对质粒与脂质体2000用量比条件进行了优化,此举能为进一步研究ADI-POQ在猪前体脂肪细胞中的功能奠定了良好的基础。
- 李付娟王帅朱亚楠任久生柳思源徐靖博张阳阳孙广杰高妍张嘉保陈承祯
- 关键词：SHRNA真核表达载体RNAI前体脂肪细胞
- 秋水仙素条件优化及其对牛卵细胞c-mos基因表达水平的影响
- 2013年
- 为探讨秋水仙素对牛卵母细胞产生细胞膜突起的最适条件与对减数分裂纺锤体组装起重要调控作用的母源基因c-mos表达量的影响,设计如下试验:比较试验组(Deme+sucrose处理)与对照组1(Deme单独处理)和对照组2(sucrose单独处理)的卵母细胞细胞膜突起率变化。用荧光定量检测最适合秋水仙素浓度处理的卵母细胞与空白组和对照组母源基因c-mos基因表达量的差异。结果表明,用0.6mg/L秋水仙素+0.05mol/L蔗糖处理牛卵母细胞1h细胞膜突起率达72.0%,要显著高于对照组1(13.0%)和对照组2(P<0.05);0.6mg/L秋水仙素浓度优于其他质量浓度(P<0.05)。秋水仙素加蔗糖处理的卵母细胞的母源基因c-mos表达高于蔗糖处理组和空白组c-mos基因的表达(P<0.05)。
- 任久生邓琼刘慧玉徐靖博柳思源李付娟俞先峰张嘉保
- 关键词：秋水仙素牛卵母细胞
- 非营养性抗热应激剂对热应激种公牛生产性能及血液生化指标的影响被引量：3
- 2012年
- 选用12头延边黄牛、延黄牛和西门塔尔牛肉种公牛作为研究对象,在夏季热应激时往日粮中添加一定比例的含小苏打、瘤胃素、乙酸钠等非营养素性抗热应激剂,试验期为30 d。观察并统计它们的干物质采食量、精液产量,检测精液品质;在试验开始和结束时采集血液样品并检测其相关离子、酶和激素的含量。结果发现,与对照组相比较,添加非营养性抗热应激剂的试验组显著提高了种公牛的干物质采食量、精液产量与精液品质。说明所添加的非营养性抗热应激剂能在一定程度上减缓热应激对肉种公牛的不利影响。
- 李付娟李玉林陈健张嘉保袁宝陈承祯
- 关键词：抗热应激剂热应激
- 促黄体素受体LHR的一种剪接体在牛黄体不同发育时期表达量差异的研究
- 2012年
- 利用TaqMan-MGB探针实时荧光RT PCR检测方法,对牛黄体中促黄体素受体(luteinizing hotmone recep-tor,LHR)的一种剪接体(F类)在黄体4个不同发育时期(前,中,后,末)的相对表达差异进行了分析。同时将Re-al-time PCR中获得的数据用Realplex软件进行相对基因表达差异分析,应用SPSS软件对结果进行统计学分析。结果表明,LHR的F类剪接体在牛黄体发育的4个时期中,中期表达量是前期的0.535倍,后期表达量达到最高,是前期的5.65倍,末期显著下降是前期的0.011 6倍,各个时期LHR的F类剪接体表达量间存在极显著差异(P<0.01)。
- 徐靖博任久生柳思源李付娟张阳阳王帅孙广杰朱亚楠高研张嘉保
- 关键词：TAQMAN-MGB探针
- 营养性抗热应激剂对热应激肉种公牛的影响被引量：5
- 2012年
- 选用12头延边黄牛、延黄牛和西门塔尔牛肉种公牛作为研究对象,在夏季热应激时在日粮中添加一定比例的含锌、硒、维生素E等微量营养素的抗热应激剂,试验期30 d。统计干物质采食量、精液产量,检测精液品质和血液中相关离子、酶和激素的含量。结果发现,与对照组比较,添加营养性抗热应激剂的试验组显著提高了种公牛的干物质采食量、精液产量与精液品质。说明所添加的营养性抗热应激剂能在一定程度上减缓热应激对肉种公牛的不利影响。
- 陈健张嘉保吕伟东袁宝吕爱辉李付娟陈承祯
- 关键词：硒维生素E热应激
- ADIPOQ基因对猪前体脂肪细胞分化的影响
- 脂联素（ADIPOQ）是一种由脂肪组织分泌的胶原细胞因子，主要产生于白色脂肪组织。ADIPOQ在机体内参与糖脂代谢，促进葡萄糖转运，调节血液循环中脂质含量，也参与脂肪细胞代谢和脂肪组织沉积的调节。 因此，本研究以7日龄内...
- 李付娟
- 关键词：前体脂肪细胞RNAI脂肪细胞分化
- 文献传递
- 牛黄体不同发育时期中LHR一种转录本的表达差异研究
- 本研究通过利用Taqman-MGB探针实时荧光RT-PCR检测方法，选择GAPDH作为内参，对牛黄体中LHR的剪接体F，在黄体四个不同发育时期的表达差异进行了检测。将Real-time PCR中获得的数据用Realple...
- 徐靖博任久生柳思源李付娟高研张嘉保
- 关键词：发育时期RT-PCR检测基因表达
- ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化
- :以猪ADIPOQ基因为靶基因,构建特异性的短发夹样RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并转染前体脂肪细胞,为研究该基因对前体脂肪细胞分化机制奠定基础.方法:根据Cenbank提供的猪A...
- 高妍李付娟张嘉保陈承祯
- 关键词：猪前体脂肪细胞
- miR-26a和miR-30d在牛不同组织中表达的规律分析被引量：2
- 2013年
- 检测miR-26a和miR-30d在牛不同组织中的相对表达水平,并应用生物信息学方法分析其靶基因,探讨两者在牛不同组织中可能发挥的作用。以西门塔尔牛为研究对象,利用TRIzol一步法提取牛各组织总RNA后,根据miRBase提供的bta-miR-26a和bta-miR-30d成熟序列,设计特异性的反转录茎环引物以及荧光定量PCR引物,反转录获得cDNA后进行荧光定量PCR检测其在牛不同组织中的相对表达水平,并应用Targetscan、RNA22、miRDB等生物学软件预测其可能存在的靶基因。miRNA-26a和miR-30d在牛心脏、肝脏等组织中均有不同程度的表达,miR-26a在心脏中表达量最高,其次在脾脏、睾丸中的表达量最低。miR-30d在肾脏中表达量最高,其次在心脏、睾丸中表达量最低。通过生物信息学方法分析miRNAs的靶基因,推测miR-26a和miR-30d可能参与调控机体的免疫、繁殖等活动。
- 孙广杰戴立胜袁宝朱亚南张阳阳柳思源任久生徐靖博李付娟张嘉保
- 关键词：MIRNA实时荧光定量PCR靶基因
