朱海波
- 作品数：20 被引量：81H指数：7
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- 铁过载诱导活性氧物质生成对骨髓造血功能影响的体外实验研究被引量：14
- 2011年
- 目的建立体外铁过载骨髓造血细胞模型，检验铁过载对细胞活性氧物质（ROS）水平的影响以及ROS升高对骨髓造血功能的影响。方法在骨髓单个核细胞培养的过程中添加枸橼酸铁铵（FAC），使细胞铁过载，检验这一过程中细胞ROS水平、细胞凋亡水平、造血细胞集落形成和CD34＋细胞计数的变化。再用去铁胺（DFO）祛铁或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）清除过多的ROS后，检测上述指标的变化。结果①在培养液中加入不同浓度FAC培养不同时间，发现骨髓造血细胞内可变铁池（LIP）水平升高，且具有时间和浓度依赖性，在含400μmol／LFAC的培养液中培养24h时LIP水平达到最高。②在400μmol／LFAC浓度下，培养骨髓造血细胞24h后骨髓造血细胞内总的ROS、粒细胞和红细胞内ROS显著升高，分别为对照组的1．77、1．75和2．12倍。与对照组比较，DFO和NAC处理后均能明显降低细胞内ROS水平（P〈0．05）。⑧对骨髓细胞造血功能的检测发现FAC组细胞凋亡比例[（24．80±2．99）％]较对照组[（8．90±0．96）％]显著升高；造血细胞集落形成单位（CFU—E、CFU—GM、BFU—E和CFU—mix）计数明显低于对照组（P值均〈0．05）；CD34＋细胞比例[（0．39±0．07）％]较对照组[（0．91±0．12）％]也显著降低。且这些损伤都可以通过DFO和NAC处理而部分恢复。结论铁过载通过诱导ROS生成影响骨髓造血功能，这种损伤可以通过祛铁和抗氧化处理减轻。可能为治疗铁过载患者骨髓造血功能低下寻找新的靶点。
- 谢芳赵明峰李玉明朱海波江燕徐新女肖霞穆娟刘鹏江吕海蓉
- 关键词：铁超负荷活性氧骨髓细胞
- PD-L1在恶性血液系统疾病中的表达及临床意义
- 朱海波邓琦赵明峰张蕊李玉明耿莉袁婷
- 白血病干/祖细胞相关基因表达在急性白血病中的临床意义被引量：2
- 2011年
- 本研究旨在检测白血病干/祖细胞(LSPC)相关基因ABCB1、BMI-1、HOXB4在急性白血病患者骨髓中的表达,并探讨其在急性白血病中的临床意义。采集41例初治急性白血病患者的骨髓、16例缓解期患者的骨髓及10例非恶性血液病患者骨髓标本(作为对照)。采用SYBR Green相对定量RT-PCR法检测ABCB1、BMI-1、HOXB4基因的表达水平,并分析它们与急性白血病疗效、预后的关系。结果表明,ABCB1、BMI-1、HOXB4在对照组均无表达,在初治组相对表达量分别为4.26±2.26、3.72±1.91、3.74±2.38;而在缓解标本组分别为2.14±1.47、2.07±0.99、1.47±0.89,均明显低于初治组(p<0.05);正规化疗2个疗程内能够获得完全/部分缓解的患者的基因相对表达量分别为1.77±1.29、2.09±1.26、1.78±1.49,明显低于未缓解的难治病例(分别为7.23±1.78、3.96±0.92、4.48±2.57)(p<0.01)。单因素分析发现,各个基因高表达患者的白血病干/祖细胞免疫表型(CD34+CD38-CD96+和CD34+CD38-CD123+)表达阳性的比例及出现高白细胞(≥30×109/L)的几率均高于低表达患者,差异显著(p<0.05);而综合分析各个基因的表达,上述变化的p值均小于单因素分析p值,差异更显著(p<0.01)。结论:LSPC相关基因(ABCB1、BMI-1、HOXB4)表达与LSPC免疫表型呈相关性,在急性白血病患者发病初期表达增高,缓解后其表达水平明显下降;表达高者易出现高白细胞,化疗效果差,缓解率低。综合多指标分析可能是一种更好地临床评估疗效和预后的方法。
- 朱海波赵明峰谢芳肖霞徐新女穆娟杨皎娃刘鹏江吕海容李玉明
- 关键词：白血病干细胞BMI-1HOXB4急性白血病
- 内源性表达白细胞介素21的CIK细胞的抗白血病作用及其机制被引量：8
- 2013年
- 目的研究内源表达白细胞介素2l（IL-21）对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）抗自血病的作用及其作用机制。方法采集分离健康人外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养CIK细胞，构建表达IL-21基因的慢病毒载体，感染CIK细胞并鉴定后，四甲基偶氮唑盐（Mqq＂）法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；半定量反转录（RT）-PCR法检测CIK细胞干扰素1（IFN-y）、肿瘤坏死因子0（TNF．OL）、TNF．B、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体（FasL）和NKG2D分子（NKG2D）的mRNA表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体（IL．21R）、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-^v和TNF-OL的表达。结果经酶切与测序鉴定，IL-21慢病毒载体构建正确，共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达。（1）与空载体组相比，内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义（P=0．856），内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组（24．60％±2．10％比16．95％±4．70％，P=0．042）。（2）内源表达IL．21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组（58．4％±8．3％比23．3％±2．8％，P=0．009），作用第5天时，杀伤作用仍能维持在61．2％±6．2％（P：0．003），相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率（44．6％±8．3％比22．8％±2．8％，P=0．034）更强，而且作用时间更长久。（3）内源表达IL-21组CIK细胞表面IL-21R的表达比空载体组增加约2倍。（4）与空载体组比较，内源表达IL-21组CIK细胞IFN--,／和TNF-仪mRNA的表达升高约1．5倍，穿孔素、颗粒酶B、FasLmRNA的表达量升高近2倍，颗粒酶A、TNF-B和NKG2DmRNA的表达与空载体组差异无统计学意义。（5）对mRNA表达差异有统计学意义的指标进-步行蛋白质表达的检测发现
- 赵楠赵明峰Sajin Rajbhandary卢文艺朱海波马立游权肖霞邓琦李玉明
- 关键词：白血病细胞因子诱导杀伤细胞白细胞介素21抗白血病作用
- PD-1抑制剂Nivolumab对CD19嵌合抗原受体T细胞体外增殖和杀伤活性的影响被引量：4
- 2018年
- 目的评估程序性细胞死亡受体1（PD-1）抑制剂Nivolumab对CD19-CAR—T细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法收集5例外周血PD-1高表达恶性淋巴瘤患者的外周血T细胞制备CD19-CAR—T细胞，在培养第8天加入终浓度分别为72、36、18pg／ml的Nivolumab，同时设患者T细胞联合72μg／mlNivolumab及正常人CD19-CAR—T细胞为对照，采用CCK．8法、LDH细胞毒性检测、ELlSA法比较各组的增殖活性、杀伤活性及炎症因子水平。结果①PD—1高表达患者CD19-CAR-T细胞转染率与正常人接近[（32．80±7．22）％对（35．10±5．84）％，t=-0．554，P=0．593]。②72gg／ml Nivolumab联合CD19．CAR—T细胞不影响其增殖，但联合应用24、48h对Pfeiffer细胞的杀伤率均优于单用患者CD19-CAR—T细胞及患者来源T细胞＋72gg／ml的Nivolumab（P值均〈0．001），其中48h时各组的杀伤率分别为（71．61±9．50）％、（6．77±1．26）％、（15，33±4．11）％。72、36μg／ml Nivolumab联合来源CD19-CAR—T细胞对Pfejffer细胞的杀伤率差异无统计学意义（P值分别为0．281、0．267），二者均高于患者来源CD19-CAR—T细胞＋18μg／ml Nivolumab组（P值均〈0．001）。③不同剂量Nivolumab联合患者来源CD19-CAR-T细胞，不影响炎症因子IFN-γ、TNF-α水平（P值均〉0．05）。结论终浓度为36g／ml的Nivolumab与CD19-CAR—T细胞联合应用，可在减轻药物毒副作用同时增强CD19-CAR-T细胞的杀伤活性。
- 朱海波邓琦张蕊江嫣雨孟娟霞赵明峰李玉明崔蕊
- CAR-T19细胞联合减低剂量PD-1抑制剂治疗PD-1高表达B细胞淋巴瘤临床安全性初探被引量：8
- 2018年
- 随着诊疗模式改进，B细胞淋巴瘤缓解率有了很大提高，但是仍有部分复发难治性患者因为存在肿瘤耐药等原因无法获得缓解[1]。CAR-T细胞疗法是近年来极具前景的肿瘤过继免疫细胞治疗方法[2-1]。程序性死亡受体1（PD-1）及其配体PD-L1信号通路在削弱抗肿瘤免疫应答方面发挥重要作用[5-6]，靶向这一途径的检查点治疗如PD-1抗体Nivolumab、Pembrolizumab及PD-L1抗体BMS-936559、MEDl4736已取得突破性进展”[7-8].
- 王嘉邓琦江嫣雨张蕊朱海波孟娟霞赵明峰李玉明
- 关键词：B细胞淋巴瘤抑制剂低剂量CAR抗肿瘤免疫应答
- 氧化应激对铁过载造血干祖细胞造血功能的影响被引量：12
- 2011年
- 目的 体外诱导脐血来源的造血干祖细胞铁过载,检测参与氧化应激的活性氧物质（ROS）的水平以及对造血干祖细胞造血功能的影响.方法 通过体外培养脐血单个核细胞（MNC）的过程中添加枸橼酸铁铵（FAC）,建立铁过载造血干祖细胞模型.实验分组：对照组、FAC组、FAC＋N-乙酰半胱氨酸（NAC）组、FAC＋谷胱甘肽（GSH）组.检测各组细胞内ROS水平,并用抗氧化剂处理,检验这一过程中ROS、细胞内可变铁池（LIP）、凋亡水平、造血集落形成和脐血各系造血细胞数目的变化.结果（1）在培养液中加入不同浓度FAC（50、100、200、400μmol/L）培养不同时间（6、12、24 h）,发现ROS水平随着FAC的浓度和培养时间变化,且在200μmol/L FAC的培养液中培养24h时ROS水平达到最高.（2）用抗氧化剂（NAC、GSH）联合FAC处理细胞发现,抗氧化剂处理组细胞内总的ROS以及髓系细胞和红系细胞内的ROS明显低于FAC组（均P＜0.05）.（3）在200 μmol/LFAC的浓度下,培养脐血MNC 24 h后细胞内总的LIP、髓系细胞和红系细胞内LIP水平均显著高于对照组（均P＜0.05）,但抗氧化剂NAC和GSH对铁过载细胞内LIP没有明显影响.（4）对脐血造血干祖细胞造血功能的检测发现：FAC组细胞凋亡比例[（20.90±3.45）％]明显高于对照组[（9.20±1.29）％]（P＜0.05）；造血集落形成单位（CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-mix）计数明显低于对照组（前3项两组间差异具有统计学意义,P ＜0.05）；CD34＋、CD33＋、GlyA＋细胞比例及细胞计数均显著低于对照组（均P＜0.05）；这些损伤都可以通过NAC或GSH处理部分恢复.结论 氧化应激在铁过载造血干祖细胞的损伤中扮演着重要角色,可以通过升高细胞内ROS水平抑制其造血功能,清除细胞内多余的ROS能减轻这些损伤.研究结果可为治疗铁过载患者因氧化应激诱导的造血功能低下提供新的靶点和研究思路.
- 谢芳赵明峰朱海波卢文艺徐新女肖霞穆娟刘鹏江李玉明
- 关键词：氧化性应激铁超负荷造血干祖细胞造血功能
- 初治急性髓系白血病患者首次诱导化疗后血小板计数与预后的关系研究被引量：15
- 2016年
- 目的分析初治急性髓系白血病（AML）患者首次诱导化疗后血小板计数情况,评估其与预后的关系及重要性,探索预测AML预后的简单易行的指标。方法选取2011年5月—2014年12月天津市第一中心医院明确诊断为初治AML的患者110例,均采用经典DA化疗方案或类似化疗方案进行诱导缓解化疗。首次诱导化疗结束后3周时检测血小板计数,根据血小板计数分为4组：〈100×10^9/L组45例、（100^150）×10^9/L组19例、（151^300）×10^9/L组25例、〉300×10^9/L组21例。比较4组患者的性别、年龄、初治时白细胞计数、预后不良染色体、首次诱导化疗是否获得骨髓完全缓解、复发率。以患者年龄60岁为界,分为≥60岁41例,〈60岁69例;以患者初治时白细胞计数30×10^9/L为界,分为≥30×10^9/L 28例,〈30×10^9/L 82例;以患者是否预后不良染色体为界,分为预后不良染色体16例,非预后不良染色体94例;以患者首次诱导化疗是否获得骨髓完全缓解为界,分为完全缓解70例,未完全缓解40例;以患者首次诱导化疗后血小板计数300×10^9/L为界,分为〉300×10^9/L 21例,≤300×10^9/L 89例。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分别以总生存率和无病生存率作为观察终点,采用Log-rank检验和多因素Cox比例风险回归模型分析预后的影响因素。结果首次诱导化疗后不同血小板计数组患者性别、预后不良染色体、首次诱导化疗获得骨髓完全缓解所占比例比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;血小板计数〈100×10^9/L组、（100^150）×10^9/L组患者年龄高于〉300×10^9/L组（P〈0.05）。血小板计数〈100×10^9/L组患者初治时白细胞计数≥30×10^9/L所占比例、复发率高于〉300×10^9/L组（P〈0.007）。Log-rank检验示,不同年龄、初治时白细胞计数、首次诱导化疗是否获得骨髓完全缓解、首次诱导化疗后血小板计数患者总生存率、无病生存率比较,差异均有统计�
- 朱海波赵明峰李玉明邓琦耿莉崔蕊刘鹏江
- 关键词：抗肿瘤联合化疗方案血小板计数预后
- 白血病干细胞相关基因研究进展被引量：2
- 2011年
- 0引言
白血病干细胞（leukemia stem cells,LSCs）于1994年由Lapidot等在急性髓系白血病的研究中首先提出,其具有与正常造血干细胞（HSCs）相同的特征,即自我更新、无限繁殖以及多向分化潜能。LSCs的存在解释了传统化疗不能根除白血病的原因,准确界定LSCs是清除LSCs而不损害HSCs的关键。
- 朱海波赵明峰
- 关键词：白血病干细胞基因
- 铁过载骨髓造血细胞体外模型的建立及其对造血的影响被引量：7
- 2011年
- 本研究通过铁与骨髓单个核细胞共培养,建立铁过载骨髓造血细胞模型并观察其对造血功能的影响。在体外培养骨髓单个核细胞的过程中,在培养液中添加枸橼酸铁铵(FAC),使细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,然后检验这一过程中造血细胞的凋亡水平、造血集落形成(CFU-E、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)和CD34+细胞的计数变化。再用去铁胺(DFO)祛铁,观察上述指标的变化。结果发现:在不同时间加入培养液中不同浓度FAC,骨髓造血细胞内可变铁池(LIP)水平升高,且具有时间和浓度依赖性,在含400μmol/L FAC的培养液中培养24小时时LIP水平达到最高。骨髓细胞造血功能检测表明,FAC组细胞凋亡比例(24.8±2.99%)较对照组(8.9±0.96%)显著升高(p(0.01);造血集落形成单位计数明显低于对照组(p(0.05);CD34+细胞比例(0.39±0.07%)与对照组(0.91±0.12%)相比也显著降低(p(0.01)。这些损伤影响可以通过DFO的处理部分消除。结论:在体外培养过程中添加铁能诱导骨髓单个核细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,并能引起骨髓造血功能损伤,而这种损伤作用可以通过祛铁法减轻。本模型为深入研究铁过载对骨髓细胞造血功能的作用机制提供实验方法,并为骨髓造血功能低下的铁过载病人治疗提供新的靶点。
- 谢芳赵明峰朱海波肖霞徐新女穆娟李玉明
- 关键词：铁过载造血功能
