徐荣辉
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因的修正及修正基因在大肠杆菌中的表达
- 1992年
- 本文采用寡核苷酸介导的定位诱变技术修正了人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因中出现的合成错误,在该基因编码区的201位插入了原来缺失的G残基,从而使之恢复正确读框。经对修正基因进行DNA全序列测定,表明定位诱变的结果符合设计要求。在此基础上,利用原核高效表达载体pBV220在P_RP_L串联启动子的控制下在大肠杆菌中对该基因进行了表达,并测定了重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的嗜中性白细胞趋化活性。本工作为开展人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8基因工程及蛋白质工程的研究奠定了基础。
- 徐荣辉金冬雁王平袁劲松吴淑华侯云德梁希若
- 关键词：细胞因子大肠杆菌
- 人NAP-1/IL-8基因的合成及在大肠杆菌中的表达
- 1992年
- 人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8),主要由单核细胞产生并具有嗜中性白细胞趋化活性及嗜中性白细胞活化活性的一种新的细胞因子.它在抗感染免疫(尤其是抗菌免疫及抗真菌免疫)、肿瘤免疫及炎症反应中的重要作用,以及作为蛋白质佐剂或作为导向药物的向导分子的应用前景,日益受到重视.有关重组NAP-1/IL-8在大肠杆菌系统的表达,以及以重组NAP-1IL-8为材料利用二维核磁共振技术分析它在溶液中的二级与三级结构的工作均已见诸报道.由于成熟的NAP-1/IL-8只有72个氨基酸,通过化学合成而得到它的全基因,不失为开展NAP-1/IL-8基因工程研究的捷径.本文将报道人NAP-1/IL-8基因的半化学半酶促合成及NAP-1/IL-8合成基因在大肠杆菌中的表达. 一、合成的设计和策略在设计NAP-1/IL-8合成基因时。
- 金冬雁徐荣辉王平袁劲松侯云德
- 关键词：嗜中性活化蛋白白细胞介素
- 一种兼具抗病毒活性及pHSA结合活性的蛋白——乙型肝炎病毒前S2肽段与人α2a型干扰素的融合蛋白
- 1993年
- α型干扰素(IFN-α)是一类具有广谱抗病毒活性的蛋白质,是当前研究资料较为充分而应用前景较为广阔的生物治疗药物之一。本实验室研制的重组人α2a型干扰素(IFN-α2a)已获国家批准进入临床验证。已有资料表明,α型干扰素对于慢性肝炎具有显著的疗效,但需要较大的剂量和较长的疗程。如果能够使IFN的作用具备一定的细胞特异性,将有可能提高疗效、降低用药量并减轻副作用。
- 金冬雁曾庆周圆徐荣辉李玉英侯云德
- 关键词：抗病毒活性抗病毒活性PHSA
- 直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定被引量：1
- 1992年
- 本文利用SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术,从带有相应表达质粒的重组大肠杆菌裂解液中,将所表达的重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8)转移至聚偏二氟乙烯膜上,直接进行N-末端15个氨基酸的序列分析,从而确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-Gel P30凝胶过滤层析和Mono-S阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。
- 周圆金冬雁徐荣辉侯云德
- 关键词：提纯
- 人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8基因的半化学半酶促合成及在大肠杆菌的表达被引量：2
- 1992年
- 本文采用半化学半酶促法合成了人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8)的全基因,并在大肠杆菌系统中利用P_RP_1串联启动子进行了温控型的高效表达,通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明,在摇瓶培养的大肠杆菌中,NAP-1/IL-8的表达量可占菌体可溶性蛋白的18.5％,而在实验室规模的发酵试验中,其表达量则占可溶性蛋白的10.9％.经凝胶过滤层析和阳离子交换层析两个简单的纯化步骤,得到SDS-PAGE纯的重组NAP-1/IL-8,采用琼脂糖平板法进行测定,表明所得NAP-1/IL-8纯品在<10ng/ml的水平上显示出强烈的嗜中性白细胞趋化活性,家兔皮肤试验的结果显示,重组人NAP-1/IL-8可在家兔体内引起早发型超敏反应,采用Edman降解法测定重组人NAP-1/IL-8纯品N末端36个氨基酸的序列,与天然人NAP-1/IL-8的成熟分子完全符合。
- 金冬雁徐荣辉周圆王平侯云德
- 关键词：IL-8基因化学合成
