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一株马立克氏病毒miRNA缺失株的构建及鉴定: 马立克氏病(MD)是由马立克氏病毒(MDV)引起的T淋巴细胞增生性疾病。为研究MDV编码的miRNA与致瘤性的关系,本研究通过同源重组的方法构建了一株缺失mdv-miR-M9、-M5和mdv-miR-M12的重组MDV,...; 杨文闯刘长军张艳萍张锋侯广玉丛锋许娜娜; 关键词：马立克氏病毒 MIRNA 致瘤性; 文献传递

马立克氏病病毒“814”疫苗株基因组重复区序列测定及分析: 2010年; 为了解马立克氏病病毒(MDV)强、弱毒株主要致肿瘤相关基因变异情况,本研究根据MDV GA株基因组序列,设计合成扩增基因组重复区的引物,得到MDV814疫苗株病毒基因组中约26kb的序列片段。与GenBank登录的强、弱毒株进行比较分析表明,扩增的MDV1型814疫苗株的长重复区为12774bp,预测的开放阅读框(ORF)有48个;短重复区为11426bp,预测的ORF有38个。发现了4个MDV814株特有的ORF。814株在编码Meq、RLORF6和23ku的重叠基因内具有类似于疫苗株CVI988的177bp的插入;在RLORF12基因编码区内存在69bp的缺失,该缺失位于病毒复制起始位点内。同时,发现7个814疫苗株特有的氨基酸突变,分布在6个ORF内。单核苷酸多态性(SNP)的鉴定发现,多个基因具有单核苷酸的突变,主要分布于Meq基因,其中氨基酸A115V(丙氨酸-缬氨酸),N142D(天冬酰胺-天门冬氨酸)的变异是814疫苗株所特有的。MDV814疫苗株重复区的基因序列的比较分析将有助于MDV致肿瘤机制的研究。; 张锋刘长军张艳萍刘爱玲闫福海候广玉丛锋; 关键词：马立克氏病病毒基因

鸡马立克氏病病毒流行毒株高代次细胞毒株Meq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因变异分析被引量：5: 2009年; 根据鸡马立克氏病病毒（Marek′s disease virus,MDV）GA株的全基因组序列,设计合成了用于扩增MDVMeq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因的引物,分别扩增4株MDV流行强毒株的高代次细胞毒株（L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C）及相应亲本毒株（L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY）、MDV强毒J-1株、814疫苗株等10个毒株的Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因。经克隆测序后,分析4个高代次细胞毒株中相应基因的变异,并与MDV强毒J-1株、814疫苗株及GenBank中已发表MDV毒株的相应序列进行比较。序列比对分析发现,L-CZp75C株Meq基因的第625位存在碱基C插入突变;L-ZYp75C株Meq基因第529位存在碱基C插入,且第602位缺失碱基T,从而致使Meq基因推导的相应氨基酸序列在第177~200位发生移码突变。L-SYp85C株RLORF4基因在第215~265位缺失51bp,致使该基因推导的氨基酸序列相应缺失17个氨基酸残基。分析RLORF12基因序列,发现L-MSp75C株在第67位存在碱基T缺失,814疫苗株在第18~86位缺失69 bp,缺失位置均位于复制起点（Origin of replication,,Ori）内;而L-ZYp75C毒株在RLORF12基因第168~174位存在独特的TGTTGGG碱基缺失。4个细胞高代次毒株的132 bpr基因的扩增结果表明,该基因在病毒基因组中的拷贝数明显增加,可达到10个拷贝以上。上述分析结果提示,4株MDV流行强毒株经体外连续传代后,MDV致瘤相关基因Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因等发生了缺失突变或插入突变。; 刘爱玲刘长军张艳萍李晶梅施维松闫福海张锋程志伟; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ

三株鸡马立克氏病病毒流行毒株基因组重复区的序列测定及分析被引量：2: 2011年; 对国内3株马立克氏病病毒血清1型(Marek’s disease virus type 1,MDV-1)流行毒株的基因组重复区进行序列测定及分析,并与GenBank中登录的MDV-1参考毒株序列进行比较。结果显示,3株毒株的基因组重复区序列具有较高同源性,在进化上属于一独立分支。3株毒株的长重复区长度约为12kb,预测的开放阅读框(ORF)分别为43、40、43个;短重复区约为12kb,预测的ORF分别为27、25、26个。3株毒株的多个ORF中存在它们特有的共性氨基酸突变,是国内MDV-1流行毒株的特有的遗传性特征。该研究为我国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。; 许娜娜刘长军张艳萍李志杰侯广玉张锋丛锋杨文闯成云; 关键词：马立克氏病病毒

鸡马立克病毒流行强毒株的致弱研究被引量：1: 2010年; 针对马立克病毒(MDV)毒力逐渐上升的现状,本研究对国内MDV流行强毒株进行了致弱研究。本实验采用近年来从东北、四川2地区免疫发病鸡场中分离的4株MDV流行强毒株(L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY),经噬斑纯化后,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养至75代～85代,获得了4株高代次细胞毒株(L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C)。并分析了L-SYp85C和L-MSp75C毒株的体外、体内生长特性和对SPF鸡的致病力。结果表明,L-SYp85C和L-MSp75C株在CEF适应性显著提高;以10倍感染剂量感染的SPF鸡,在12周内均未发生MD肿瘤,体重平均值与对照组体重平均值差异不显著;检测7d～45d羽髓中病毒载量,均低于106copies/106cell,显著低于亲本毒株。同时,4株传代毒株132bpr基因拷贝数显著增加。上述结果为MDV强毒株的致弱研究以及进一步筛选MDV弱毒疫苗株提供了实验依据。; 刘爱玲刘长军张艳萍闫福海张锋; 关键词：马立克病毒鸡胚成纤维细胞增殖能力

马立克氏病病毒miRNA缺失株的构建及其体外生长规律: 2011年; 为了研究马立克氏病病毒(MDV)编码的miRNA与致瘤性的关系,采用同源重组的方法构建了1株缺失MDV1-miR-M9、MDV1-miR-M5和MDV1-miR-M12的重组MDV,命名为rMS△miR9-12。经PCR和测序分析鉴定,证实该重组病毒编码MDV1-miR-M9、MDV1-miR-M5和MDV1-miR-M12的基因片段已缺失。将纯化后的病毒在鸡胚成纤维细胞上连续传20代,对第10代和第20代进行PCR鉴定,证明该重组病毒的遗传性状稳定。用荧光定量PCR方法比较重组病毒rMS△miR9-12与原始毒株MS的体外生长规律,发现rMS△miR9-12株比MS株有更快的生长速度。重组病毒rMS△miR9-12的获得为下一步研究MDV编码的miRNA与致瘤机制关系提供了一个新的平台,同时为获得免疫原性较好的疫苗候选毒株提供了新的途径。; 杨文闯刘长军张艳萍李志杰张锋侯广玉丛锋; 关键词：马立克氏病病毒 MIRNA 致瘤性

马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究: 马立克氏病病毒(MDV)在鸡羽髓组织中大量复制，并形成感染性病毒粒子，该组织的蛋白质组学研究对揭示MDV的传播及致病机理具有重要意义。本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡，通过双向电泳技术分析了在MDV不同感染期，羽...; 丛锋刘长军张艳萍李志杰张锋成云杨文闯许娜娜; 关键词：鸡马立克氏病双向电泳技术

马立克氏病病毒致弱毒株的致病性及致瘤相关基因序列分析: 2011年; 为培育及鉴定马立克氏病病毒(MDV)致弱病毒株,本研究将4株现地流行MDV强毒株(L-ZY、L-CZ、L-MS和L-SY株),在体外经CEF连续传代至110代,获得相应的4株高代次病毒株(L-ZYp110C、L-CZp110C、L-MSp110C和L-SYp110C株)。其中的L-MSp110C和L-SYp110C株对SPF鸡的致病性试验结果显示:以2×103 pfu和2×104 pfu的剂量接种1日龄SPF鸡,在试验期(12周)内试验鸡均没有引起马立克氏病病变;高代次病毒株在体外增殖能力增强,而在体内增殖能力显著低于亲本病毒株。与亲本病毒株基因序列比对发现:4株高代次病毒株病毒基因组中Meq和RLORF12基因均有不同程度的缺失和插入;132 bpr序列拷贝数均显著增加;其中3株病毒株的RLORF4基因存在大片段缺失。以上结果表明,MDV强毒株体外传代至110代后,病毒增殖能力和主要致瘤相关基因的遗传特性均发生了改变,致弱毒株的毒力已完全弱化。该研究为进一步筛选MD弱毒疫苗提供了实验依据。; 侯广玉刘长军张艳萍杨玉英张锋丛锋杨文闯许娜娜; 关键词：马立克氏病病毒致弱毒株特性分析

马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究: 引言/目的马立克氏病病毒(MDV)在鸡羽髓组织中大量复制,并形成感染性病毒粒子,该组织的蛋白质组学研究对揭示MDV的传播及致病机理具有重要意义。材料方法本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡,通过双向电泳技术分析了在M...; 丛锋刘长军张艳萍李志杰张锋成云杨文闯许娜娜

马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究被引量：2: 2011年; 为鉴定鸡羽髓上皮细胞感染马立克氏病病毒(MDV)前后差异表达的蛋白,本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡,并通过双向电泳技术进行分析。结果显示:在病毒感染后4 d、7 d、14 d和21 d显著差异表达的蛋白点分别有2个、8个、25个和9个;而通过质谱技术鉴定出29种蛋白质,其中包括能量代谢相关蛋白、增殖和凋亡相关蛋白、细胞骨架蛋白、信号传导蛋白、转录相关蛋白、免疫相关蛋白和其他功能蛋白质。本实验首次对鸡羽髓上皮细胞感染MDV后各时期蛋白表达水平的变化进行研究,鉴定了多种差异表达蛋白质,为进一步揭示MDV与宿主的相互关系、感染性病毒粒子的成熟和致病机制提供了依据。; 丛锋刘长军张艳萍李志杰张锋成云杨文闯许娜娜; 关键词：马立克氏病病毒双向电泳蛋白质组学

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张锋

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