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张莲芬: 作品数：45 被引量：299H指数：11; 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>; 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

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合欢皂甙Julibroside J_8对人微血管内皮细胞凋亡的影响研究被引量：2: 2011年; 本文采用体外培养人微血管内皮细胞(HMEC-1),不同浓度和时间的Julibroside J8干预,SRB法测定细胞存活率,同时结合DAPI荧光染色,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况;Annexin-V/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。发现合欢皂甙Julibroside J8可显著抑制HMEC-1生长,抑制率可达75.6%,并呈时间-剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡率,最高比例可达32.32%。; 花慧冯磊张小平张莲芬金坚; 关键词：凋亡

赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析被引量：36: 2005年; 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03￣1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.; 黄飚陶文沂张莲芬时瑾杨海麟金坚; 关键词：真菌毒素单克隆抗体

水蛭素促尿激酶纤溶作用研究被引量：8: 2006年; 目的研究水蛭素对尿激酶诱导的纤溶作用的影响,并分析可能的机制。方法采用尿激酶为纤溶激酶,复钙柠檬酸钠抗凝血浆为纤溶酶原来源的体外溶栓模型,通过测定纤溶产物D-D imm er生成量,微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,比较水蛭素与肝素对纤溶的影响。运用土豆羧肽酶抑制剂(CPI)对TAFIa的专一性抑制作用,分析水蛭素与肝素对TAFI活化的影响。结果水蛭素组D-D imm er较肝素组高(P<0.01),水蛭素加CPI组较水蛭素组更高(P<0.01);微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,肝素组有明显的纤溶停止和血栓再形成倾向,水蛭素组则可观察到明显的溶栓现象,水蛭素加CPI组效果最好。结论对尿激酶诱导的纤溶,水蛭素比肝素有更好的间接促纤溶作用,其原因主要是水蛭素能有效抑制再次血凝的发生,减少了尿激酶和纤溶酶原的短暂性耗竭。在这一过程中,水蛭素不能彻底抑制TAFI活化,表明对TAFI活化的抑制可能不是水蛭素促尿激酶纤溶作用的主要原因。; 唐瑜菁张莲芬段作营张荣军孙钧铭金坚; 关键词：水蛭素尿激酶纤溶

合欢皮提取物抑制血管生成作用的研究被引量：13: 2010年; 本文采用体外细胞培养法和体内鸡胚尿囊绒膜模型、荷瘤模型检测合欢皮提取物抑制人微血管内皮细胞(HMEC-1)的增殖、迁移活性,观察合欢皮提取物的抑制血管生成情况。发现合欢皮提取物能显著抑制HMEC-1的增殖(IC50为30μg/mL)和迁移,并且呈明显的剂量依赖性。在体内同时具有抑制鸡胚尿囊膜和肿瘤组织中血管生成的作用。; 花慧冯磊张小平张莲芬金坚; 关键词：合欢皮血管生成内皮细胞

苦参灵芝发酵液在2.2.15细胞中抗HBV作用被引量：17: 2004年; 比较苦参的灵芝发酵液和苦参与灵芝发酵液的混合液体外抗乙肝病毒(HBV)的效果.用HBVDNA转染的2.2.15细胞作为模型,放射免疫法测定2种药物作用后细胞培养上清液中HB sAg和HBeAg量,计算其对HBsAg和HBeAg分泌的抑制率,用MTT法检测细胞毒性.结果表明:剂量在12.5～200μg/mL的范围内,均能不同程度地减少细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg量,发酵液细胞的毒作用不明显,而混合液具有一定的细胞毒作用.结果显示发酵液具有一定的体外抗HBV作用.; 李雁群张莲芬张志斌金坚章克昌; 关键词：苦参灵芝抗乙肝病毒药效

黄曲霉毒素B_1的高灵敏时间分辨荧光免疫分析被引量：28: 2006年; 采用时间分辨荧光技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1(AFB1)间接竞争免疫分析法(AFB1-TRFIA)。以AFB1-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗AFB1抗体;AFB1与辣根过氧化酶的联结物(AFB1-HRP)包被96孔板为固相抗原,与游离AFB1共同竞争有限的抗AFB1抗体;用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪。该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01—100μg/L,批内和批间变异分别为4.1%和6.8%,平均回收率为97.2%,与黄曲霉毒素B2的平均交叉反应为10%左右;黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B及HRP基本不干扰本方法对AFB1的检测。8条不同时间进行的AFB1-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L、(0.63±0.02)μg/L和(12.5±0.47)μg/L。比较AFB1-TRFIA和AFB1-ELISA检测AFB1,两者的相关系数为0.917。研究表明,AFB1-TRFIA是目前报导的AFB1检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。; 黄飚陶文沂张莲芬时瑾赵晓联金坚; 关键词：真菌毒素

脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫法的建立被引量：4: 2009年; 目的:利用抗脱氧雪腐镰刀烯醇多克隆抗体及其人工抗原,采用时间分辨免疫荧光技术建立间接竞争脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫检测方法(DON-TRFIA)。方法:以DON人工抗原(DON-BSA)包被微孔板,与DON标准或样品中的DON共同竞争结合抗DON多克隆抗体,然后用稀土离子Eu3+标记羊抗兔抗体进行示踪检测,并对建立DON-TRFIA进行方法学的考核。结果:该方法的灵敏度为0.01ng/ml,检测范围为0.01～100ng/ml,IC50为4.84ng/ml,批内、批间变异率均小于10%。不同样品添加回收实验表明小麦、玉米、啤酒、面包回收率分别为89.41%～123.2%、115.6%～123.6%、80.35%～118%、87%～92.45%。玉米样品检测结果表明DON-TRFIA与商品化DON-ELISA试剂盒结果高度相关,具有较好的一致性。结论:DON-TRFIA是目前已见报道文献中最灵敏的DON免疫检测法,具有很好的应用前景。; 高雷黄飚李秋萍张莲芬金坚; 关键词：生物毒素

重组人血管抑素的表达、复性优化及活性研究被引量：1: 2006年; 目的探索一种实效、经济的血管抑素制备工艺。方法对基因工程菌(E.coli,M15/pQE/AS)的IPTG诱导条件及包涵体复性纯化条件进行优化,产物以SDS-PAGE鉴定纯度,在人微血管内皮细胞模型及鸡胚尿囊膜模型上鉴定其生物学活性。结果经优化后重组人血管抑素的表达量约达菌体蛋白的30%,纯化的重组人血管抑素可显著抑制人微血管内皮细胞的增殖,最高抑制可达47%,并可显著抑制鸡胚尿囊膜模型上血管的生成。结论该表达、复性工艺简单,高效可行。; 陶永辉赵砚婷张莲芬蔡刚明金坚; 关键词：血管抑素包涵体鸡胚尿囊膜

改善稀有密码子和氨基酸残基限制提高重组人ADAM15去整合素结构域蛋白表达水平被引量：17: 2008年; 【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。【结果】(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%。【结论】这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达。; 吴静雷楗勇张莲芬花慧金坚; 关键词：稀有密码子抑制血管生成

盐酸克伦特罗的高灵敏时间分辨荧光免疫分析被引量：8: 2006年; 目的采用时间分辨荧光技术建立高灵敏的盐酸克伦特罗（CBL）间接竞争免疫分析法（CBL-TRFIA）。方法以CBL-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗CBL抗体；CBL与卵清蛋白的联结物（CBL-OVA）包被96孔板为固相抗原，与游离CBL共同竞争有限的抗CBL抗体；用稀土离子Eu^3＋标记的羊抗兔抗体进行示踪。结果该方法的灵敏度为0．01μg／L，测量范围为0．01～25μg／L，平均回收率为99．7％，RSD3．9％，与盐酸异丙肾上腺素的交叉反应率为0．01％，与沙丁胺醇、盐酸肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素无交叉反应。8条不同时间进行的CBL-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为（0．07±0．01）／Lg／L、（1．47±0．11）μg／L和（23．6±0．56）μg/L。尿样经TRnA和EUSA试剂盒同时检测CBL，两者的相关系数为0．932，结果相符。结论CBL-TRFIA分析方法稳定性好，可测范围宽，具有很好的应用前景。; 时瑾黄飚张莲芬宓晓黎许赣荣金坚; 关键词：盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫分析抗体

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