季卫丹
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hSulf-1基因腺病毒表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖、迁移能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的构建携带人硫酸酯酶1基因(hSulf-1)的腺病毒载体,研究其对于人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖、迁移能力的影响。方法通过基因操作技术将hSulf-1基因插入到腺病毒基因组中,构建重组腺病毒Ad5-hSulf1;应用蛋白质免疫印迹法检测hSulf-1蛋白在ECV-304细胞中的表达及细胞内磷酸化Akt、ERK的表达变化;MTT实验检测hSulf-1过表达对于ECV-304细胞增殖的影响;采用划痕实验研究hSulf-1过表达对于ECV-304细胞迁移的影响。结果成功构建携带目的基因hSulf-1的腺病毒载体;免疫印迹结果表明hSulf1基因过表达会下调ECV-304细胞Akt和ERK信号分子的磷酸化水平;细胞增殖实验结果表明hSulf1基因过表达抑制了ECV-304细胞增殖,感染复数为50、100时细胞存活率下降至(68.49±0.05)%以及(67.78±0.06)%(P<0.05);划痕实验结果表明hSulf1基因过表达能够抑制细胞的迁移,相比于对照组细胞迁移能力减弱(P<0.01)。结论重组腺病毒Ad5-hSulf1介导的hSulf-1基因在ECV-304细胞中的过表达明显抑制细胞增殖及迁移,为hSulf-1用于肿瘤及血管生长相关疾病的基因治疗奠定了基础。
- 季卫丹包龙龙严妍曹璐傅晓辉姜小清苏长青
- 关键词：腺病毒血管内皮细胞细胞增殖细胞运动
- 人硫酸酯酶1基因的作用机制及抗瘤活性
- 2011年
- 人硫酸酯酶-1(hSulf-1)能够使细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)脱硫酸化,从而抑制下游肝素结合生长因子信号途径的激活。人恶性肿瘤中hSulf-1常处于失活状态,转染外源性hSulf-1能够抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭,因此hSulf-1是肿瘤基因治疗的一个很有潜力的靶点。
- 季卫丹苏长青
- 关键词：硫酸乙酰肝素蛋白聚糖肿瘤信号途径
- hSulF-1基因腺病毒表达载体的构建及其抗肿瘤机制的实验研究
- 人硫酸酯酶1(humansulfatase1，hSulf-1)是一个细胞生长的负向调控因子，在人体正常组织中恒定表达，而在绝大多数的肿瘤细胞系和肿瘤组织中（如乳腺癌、胰腺癌、肾脏癌、肝细胞癌等）表达水平下调。已有研究证明...
- 季卫丹
- 关键词：腺病毒血管内皮细胞细胞增殖细胞迁移
- 蛋白磷酸酶PHLPP抑制Survivin磷酸化诱导胆囊癌细胞凋亡发挥抗癌活性
- ＜正＞目的细胞凋亡受抑制是恶性肿瘤增殖失控的主要原因,与恶性肿瘤的发生发展密切相关。影响癌细胞凋亡与增殖的因素有很多。在很多调控细胞凋亡的因子中,凋亡抑制基因Survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子,而蛋白磷酸酶（...
- 季卫丹孙斌徐洋彭章晓苏长青
- 文献传递
- hSulf-1过表达提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨人硫酸酯酶-1(human sulfatase 1,hSulf-1)基因过表达是否提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性。方法:采用不同浓度AZD2281处理细胞,并筛选AZD2281处理的最佳浓度。将携hSulf-1基因的重组腺病毒Ad5-hSulf1感染MCF-7细胞,以Ad-hSulf1和AZD2281单独或联合处理MCF-7细胞,以Ad5-EGFP处理为对照。采用流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的表达,Transwell法、MTT法分别检测细胞的迁移及增殖。结果:AZD2281浓度为7μmol/L时对MCF-7细胞的抑制作用趋于峰值,用于后续实验。Ad5-hSulf1+AZD2281联合处理与AZD2281单独处理相比,MCF-7细胞的G2/M期细胞比例明显增多[(22.15±0.17)%vs(17.44±0.57)%,P<0.01],细胞克隆形成率[(21.43±1.52)%vs(49.43±1.44)%,P<0.01]及细胞周期蛋白CDK4的表达[(0.67±0.02)vs(0.72±0.02),P<0.05]、AKT的磷酸化水平[(0.17±0.003)vs(0.42±0.02),P<0.01]均明显降低,同时细胞的增殖率和迁移能力也有明显下降[(57.69±4.83)%vs(79.35±5.44)%;(10.33±1.53)个vs(50.67±2.31)个,均P<0.01]。结论:hSulf-1过表达可明显提高乳腺癌细胞MCF-7对AZD2281的化疗敏感性,阻滞细胞周期于G2/M期,并更明显地抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,这一效应可能是通过调节细胞周期蛋白CDK4及AKT通路产生的。
- 徐高亚季卫丹严妍包龙龙沈舒文顾蕾傅晓辉姜小清苏长青吴孟超
- 关键词：乳腺癌MCF-7细胞周期蛋白化疗敏感性
- MiR-21通过AKT/ERK途径对肝癌BEL-7402细胞增殖和迁移的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对人肝癌BEL-7402细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:将携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green luorescent protein,EGFP)基因的miR-21表达载体pGL3-miR21-EGFP瞬时转染BEL-7402细胞,实时荧光定量-PCR检测细胞中miR-21的表达水平,蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化蛋白激酶B[phospho-protein kinase B,p-PKB(又称p-AKT)]、磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)的表达,MTT法检测miR-21过表达对BEL-7402细胞增殖的影响,细胞划痕和Transwell小室法检测miR-21过表达对BEL-7402细胞迁移和侵袭能力的影响。将pGenesil-shAKT载体转染BEL-7402细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-21的表达,蛋白质印迹法检测细胞中AKT和p-AKT的表达水平,MTT法和细胞划痕实验检测pGenesil-shAKT对BEL-7402细胞增殖和迁移的影响。结果:与空白对照组(未转染质粒的BEL-7402细胞)相比,pGL3-miR21-EGFP转染后,BEL-7402细胞中miR-21的表达水平明显上调(P<0.01),p-AKT和p-ERK的表达水平同时上调(P<0.05);与空白对照组相比,miR-21的过表达明显促进了BEL-7402细胞的增殖、迁移和侵袭的能力(P<0.05)。pGenesil-shAKT转染BEL-7402细胞后,伴随着AKT和p-AKT表达水平的下调,细胞的增殖和迁移能力均明显下降(P<0.05),而细胞中miR-21的表达水平无明显变化。结论:MiR-21可能通过AKT/ERK信号通路促进BEL-7402细胞的增殖和迁移。
- 包龙龙严妍季卫丹沈舒文吴孟超苏长青
- 关键词：细胞增殖细胞运动肿瘤侵润微RNAS
- 融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效果
- 2014年
- 目的:观察融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效应。方法:采用编码11个精氨酸(11R)的穿膜肽序列融合HSP70基因序列,构建重组腺病毒载体AdCMV-HSP70s、AdCMV-HSP70(无穿膜肽对照)和AdCMV-EGFV(空载体对照)。Western blotting、ELISA法检测重组腺病毒介导的HSP70基因在胃癌SCG-7901细胞中的表达,MTT检测重组腺病毒感染后HSP70分泌性表达对胃癌细胞的抑制作用。裸鼠移植瘤模型的抗瘤实验检测HSP70基因联合CIK细胞对胃癌移植瘤的抗瘤效应。结果:与AdCMV-HSP70感染细胞比,AdCMV-HSP70s感染细胞的HSP70表达量明显增加[胃癌SGC-7901细胞:(360.72±20.89)vs(121.01±15.94)ng/ml,P<0.05;胃黏膜上皮GES-1细胞:(188.62±10.82)vs(135.00±13.96)ng/ml,P<0.05]。融合11R的HSP70蛋白能够穿膜并分泌到细胞外后对胃癌细胞产生一定的增殖抑制作用[MOI=100 pfu/cell时,细胞存活率(66.33±4.33)%vs(101.33±7.64)%,P<0.01]。AdCMV-HSP70s+CIK联合治疗对胃癌移植瘤的抑制率显著高于AdCMV-HSP70+CIK组[(66.5±7.3)%vs(43.6±5.6)%,P<0.05],该组移植瘤组织间质中CD3+T细胞浸润数量也明显多于后者。结论:融合穿膜肽可明显促进HSP70蛋白的表达和分泌,和CIK细胞联合治疗能增强抗瘤免疫效应,从而显著抑制裸鼠胃癌移植瘤。
- 梅伟群李晓雅王伟国马炬明季卫丹胡慧珍宋启哲苏长青吴孟超
- 关键词：胃癌热激蛋白穿膜肽
