孙会卿
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
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- 乙肝病毒X基因真核表达载体pEGFP-X的构建及其表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建pEGFP-X真核表达载体,观察其在肝癌细胞株中的表达。方法:从质粒pcDNA3.1(+)-X酶切获HBV X基因片段,克隆至pEGFP-N1;用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP-X载体;用脂质体法,将重组载体(pEGFP-X)和空载体(pEGFP-N1)瞬时转染肝癌细胞细胞株BEL-7402;分别用RT-PCR、荧光显微镜鉴定HBV X和EGFP基因表达。结果:鉴定证实pEGFP-X载体构建成功;该质粒瞬时转染的BEL-7402有HBV X基因表达,并发绿色荧光。结论:构建的pEGFP-X真核载体能在BEL-7402中表达,绿色荧光蛋白示踪利于表达HBV X基因稳定细胞株的筛选,并为探讨HBV X基因在HCC中的致瘤机理提供实验模型奠定基础。
- 王文龙贺兴鄂杨旭蒋永芳雷建华孙会卿
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因真核表达载体BEL-7402
- 靶向HBx基因shRNA载体稳定表达人肝癌细胞的建立
- 2009年
- 本研究采用整合有HBV DNA而HBsAg表达阴性的人肝癌细胞株MHCC97-H，应用免疫荧光法初步研究HBx表达，并从基因组中克隆HBx基因，采用RNA干扰（RNAi）技术，构建靶向该HBx基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，通过转染和筛选，研究shRNA载体在MHCC97-H细胞中稳定表达对HBx基因表达的影响，最终构建稳定表达靶向整合HBx基因的shRNA载体的人肝痛细胞模型，为进一步研究构建平台。
- 贺兴鄂孙会卿杨旭雷建华童明王文龙
- 关键词：肝炎病毒乙型基因疗法RNA干扰
- RNA干扰HBx稳定表达肝癌细胞株细胞增殖及化疗增敏作用的研究
- 背景及目的:
目前大量实验研究证实HBx片断可在多数并发乙肝病毒感染的肝癌组织中检测到,它是肝细胞发生恶性转化的主要因素之一,并可提高肝癌细胞的增殖活性,促进肝癌细胞快速增长。因此,高效特异的基因治疗新技术RN...
- 孙会卿
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰HBX化疗增敏
- 文献传递
- RNA干扰HBx基因对肝癌细胞化疗效果的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞(转染空质粒的MHCC97-H细胞)和21543细胞(转染含HBx-shRNA质粒的MHCC97-H细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBx mRNA沉寂作用,CCK8和TUNEL分别检测RNA干扰HBx后化疗药物对MHCC97-H肿瘤细胞生长的抑制及诱导细胞凋亡情况。结果:RT-PCR结果显示,与MHCC97-H细胞组比较,21543细胞的HBx mRNA水平下降约91%,HK3细胞HBx mRNA水平下降不明显;RNA靶向干扰HBx基因后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC97-H细胞)和HK3细胞增殖明显减慢,而后两种细胞差别无统计学意义;3种不同细胞加用3种不同浓度的氟尿嘧啶(0～120mg/L)、顺铂(0～32mg/L)后细胞生长明显减慢并呈浓度依赖性,以RNA靶向干扰HBx基因后的21543细胞生长抑制最明显;相同浓度的氟尿嘧啶对3组不同肝癌细胞均可引起细胞凋亡,以21543细胞凋亡最明显。结论:RNA干扰HBx可明显抑制肝癌细胞的增殖,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性;RNA干扰HBx基因和化疗药物联合应用使肝癌细胞凋亡更明显,细胞增殖速度明显减慢。
- 何艳贺兴鄂孙会卿王文龙雷建华
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰HBX基因细胞周期化疗
- 应用短发夹状RNA研究HBV X基因表达对三氧化二砷诱导HepG2细胞凋亡特性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBVX基因的HepG2-X细胞的生长抑制率。以未处理细胞为对照,流式细胞术分析细胞凋亡比和细胞周期,采用Caspase3/cpp32活性比色试剂盒测定As2O3处理后细胞裂解物中Caspase3的活性。应用脂质体介导HBX序列特异性shRNA表达载体pXi-1、pXi-2和序列无关对照pXi-3转染HepG2-X,再次分析细胞凋亡比、细胞周期和Caspase3活性的变化。结果:MTT法表明2.0μmol/L As2O3处理36小时具有理想的细胞生长抑制率。As2O3作用后细胞凋亡比明显增高(P<0.05),G2/M期细胞增多(P<0.05)。不同HBV X基因表达水平的细胞As2O3诱导的细胞凋亡比有统计学差异(P<0.05),HepG2-X与HepG2比较,其As2O3诱导的细胞凋亡比下降,且细胞裂解物的Caspase3活性下降(P<0.05),但应用序列特异性shRNA抑制HBV X基因表达后凋亡比和Caspase3活性可再次增高,而作为对照的序列无关的shRNA则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。结论:As2O3可诱导HepG2细胞凋亡。表达HBVX基因后As2O3诱导的HepG2细胞凋亡比和Caspas3活性下降,特异性shRNA抑制HBV X基因表达后则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。
- 贺兴鄂雷建华杨旭孙会卿童明
- 关键词：乙型三氧化二砷HEPG2细胞细胞凋亡
- RNA干扰肝癌细胞HBX基因表达及细胞增殖的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰技术对肝癌细胞乙型肝炎病毒X基因(HBX)表达和细胞增殖的影响。方法鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对HBX基因shRNA的稳定肝癌细胞株(21543细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBX基因mRNA沉寂作用,利用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果复苏后细胞形态差别不大;RT-PCR显示相对于MHCC-97H细胞,21543细胞的HBXmRNA水平的下降约91%,HK3细胞的HBXmRNA水平下降不明显;靶向HBX的RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC-97H细胞)和对照细胞(HK3细胞)增殖明显减慢,而后两种细胞差别不显著;21543细胞周期显示RNA干扰后细胞延缓进入S期,增殖活性明显减低。结论RNA干扰可降低肝癌细胞HBX表达水平,并可明显抑制肝癌细胞的增殖,改变细胞生长周期。
- 孙会卿贺兴鄂王文龙何艳雷建华
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰乙型肝炎病毒X基因细胞周期
- 靶向整合于MHCC97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。
- 王文龙孙会卿杨旭贺兴鄂雷建华童明
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA乙型肝炎病毒X基因
