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姬秋彦: 作品数：48 被引量：81H指数：4; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：国家科技重大专项云南省自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>

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脊髓灰质炎病毒冻干保护剂的筛选被引量：7: 2006年; 目的筛选脊髓灰质炎病毒冻干保护剂。方法将不同配方的冻干保护剂与脊髓灰质炎病毒(SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型)混合,进行冻干,并检测冻干前后病毒感染性滴度及冻干后的热稳定性。结果经检测发现,第Ⅷ组配方(海藻糖8%、人白蛋白1%、山梨醇5%、明胶0·5%和甘氨酸1%)在脊髓灰质炎病毒的冻干过程中保护作用较好。冻干前后感染性滴度下降在0·5LgCCID50/ml以内,且热稳定性好,37℃放置1周后SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型病毒的感染性滴度平均下降分别为0·2、0·3和0·4LgCCID50/ml,而相应对照组的感染性滴度平均下降分别为1·1、1·1和1·3LgCCID50/ml,二者差异有显著意义(P<0·05)。结论含有海藻糖、人白蛋白、山梨醇、明胶和甘氨酸的保护剂对脊髓灰质炎病毒冻干具有良好的保护效果。; 兰芸胡凝珠姬秋彦胡云章; 关键词：脊髓灰质炎病毒冷冻干燥保护剂

百日咳杆菌气雾感染小鼠模型的建立被引量：3: 2017年; 目的百日咳感染动物模型的建立在以百白破为基础的联合疫苗的研究中具有重要意义。文中探讨不同百日咳攻击菌浓度和不同攻毒时间对BALB/c小鼠的气雾感染效果。方法将BALB/c雌鼠按随机数字表法分为低浓度长时间组、中浓度短时间组、中浓度长时间组、高浓度长时间组和阴性对照组,每组10只。气雾方式攻击小鼠,109cfu/m L攻毒30min(低浓度长时间组)、1010cfu/m L攻毒15 min(中浓度短时间组)、1010cfu/m L攻毒30 min(中浓度长时间组)、1011cfu/m L攻毒30 min(高浓度长时间组),阴性对照组用等渗盐水气雾攻击30 min。分别于攻毒后0、3、7、14、21 d采血测白细胞数和分离肺组织匀浆培养,计算百日咳杆菌肺部克隆数。结果百日咳杆菌气雾攻击小鼠后第3天,与阴性对照组比较,高浓度长时间组白细胞数明显增长(P<0.05);第7天,与阴性对照组比较,中浓度长时间组、高浓度长时间组白细胞数(1.74×1010个/L、5×1010个/L)均明显升高(P<0.01);第14天,与阴性对照组比较,4个实验组均明显升高(P<0.05),其中中浓度短时间组和低浓度长时间组到达峰值(1.77×1010、1.27×1010个/L);第21天,与阴性对照组比较,4个实验组白细胞数均下降,其中高浓度长时间组差异有统计学意义(P<0.05)。在攻毒后第3天,通过各组小鼠肺组织匀浆培养均可证实有少量百日咳杆菌存在;第7天和第14天,4个实验组小鼠肺部菌落数均明显升高(P<0.05);第21天,4个实验组肺部菌落数均下降。结论该气雾攻击方法可成功建立百日咳杆菌感染小鼠模型。; 牟大超梁疆莉高娜顾琴章孟学戴永娟姬秋彦孙明波杨卉娟; 关键词：小鼠模型百日咳杆菌

单纯疱疹病毒I型糖蛋白D在酵母中的表达被引量：2: 2006年; 从提取的HSV-1基因组中扩增得到编码gD蛋白胞外区1～314aa的基因gDt,将其插入毕赤酵母表达质粒pPIC9K的醇氧化酶(AOX1)启动子下游,构建携带gDt的重组载体,经电转化GS115菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达gD蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达到250mg/L,该目的蛋白可被gD单抗(1-I-9)特异性识别。表达产物经离子交换、金属螯合、分子筛柱层析纯化后得到纯度较高的重组蛋白。重组gD蛋白免疫BALB/c小鼠可诱生一定水平的特异性抗体,表明该蛋白具有较好的免疫原性,能够诱导小鼠产生体液免疫应答。; 李智华徐维明姬秋彦龙海亭彭正华李健峰; 关键词：单纯疱疹病毒毕赤酵母表达纯化

悬浮吸附法在人胚肺二倍体细胞(KMB17)中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒被引量：1: 2005年; 目的研究在KMB17细胞中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒及其用于生产疫苗的可行性。方法应用悬浮吸附和添加血清的方法,在KMB17细胞上培养SabinⅠ、Ⅱ、中Ⅲ2型病毒,用微量法检测病毒滴度。结果在悬浮吸附加10%血清培养条件下,SabinⅠ滴度可达8.125 LgCCID50,SabinⅡ滴度可达7.5 LgCCID50,中Ⅲ2滴度可达7.583 LgCCID50。与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度比较,差异无显著意义(P>0.05)。结论可进一步研究应用KMB17细胞进行疫苗生产。; 胡凝珠王荣福瞿素刘国栋姬秋彦胡云章; 关键词：二倍体细胞 KMB17 细胞培养脊髓灰质炎

Sabin2型脊髓灰质炎病毒适应人胚肺二倍体细胞不同代次病毒滴度与5′端非编码区变异关系: 2005年; To investigate the adaptation of poliovirus Sabin 2 in human embryonic lung diploid fibroblast（KMB17） and its relation to nucleotide mutations of 5′ noncoding region（5′NCR）,the Sabin 2 vaccine virus was passaged serially in KMB17 for seventeen passages.The infectious titers of Sabin 2 virus increased along with the passages,the highest titer reached 8.0 LgCCID50/ml at passage 13（P13）.During passage,there were three nucleotide mutations appeared in 5′NCR,G changed to C at position 20,C to U at position 189 and G to A at position 481.The results showed that Sabin 2 poliovirus adapted well in KMB17 after 17 passages.The nucleotide mutation at position 481 that appeared from passage 3 on indicated the possibility of virulent reversion.; 胡凝珠瞿素刘国栋姬秋彦胡云章; 关键词：感染性滴度人胚肺二倍体细胞

幽门螺杆菌oipA基因的克隆及其生物信息学分析: 2005年; 目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacterprlori,Hpylori)前炎症外膜蛋白基因oipA,并对其进行生物信息学分析.方法:利用GenBank已公布序列设计引物,用PCK进行扩增后,酶切,连入载体pGEX-5X-1,并进行序列测定.用数据库Blast,NCBICDD,Swiss—model,Propred以及生物学软件Omigav2.0和Antheprotv5.0分析其生物学特性.结果:克隆片段与GenBank公布序列完全一致.经Blast比对未发现与oipA同源的其他种属基因,通过NCBICDD未找到已知保守区域和oipA编码氨基酸序列相关.应用Omigav2.0,Antheprotv5.0软件预测显示该蛋白具有良好的疏水性和抗原性,将该分析结果和Propred结果比对得到预测的抗原表位.结论:应用生物信息学技术,对幽门螺杆菌基因oipA进行分析,将为Hpylori与相关致病发生机制研究,Hpy-lori疫苗的开发等工作奠定一定基础.; 陈阳李健峰姬秋彦闫玲梅龙海亭徐维明; 关键词：生物信息学分析幽门螺杆菌 HPYLORI OIPA 外膜蛋白基因 CDD

一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法: 本发明提供了一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，所述方法利用新型复合型阴离子层析填料Capto adhere，通过层析纯化去除百日咳毒素(Pertussistoxin，PT)和丝状血凝素(Filamentous ...; 孙明波梁疆莉高娜顾琴姬秋彦马艳李琦涵史茘杨净思姚宇峰杨晓蕾车艳春衡燮和占龙赵刚; 文献传递

去除百日咳毒素、丝状血凝素中内毒素的工艺探索被引量：2: 2018年; 目的探讨无细胞百日咳疫苗纯化工艺中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的内毒素去除问题。方法选用Triton法和离子交换层析法,分别对百日咳杆菌发酵液上清和经Capto SP Imp Res柱纯化的发酵液进行内毒素去除,按《中国药典》三部(2015版)相关方法检测纯化样品的蛋白含量、内毒素含量、抗原含量,并进行SDS-PAGE分析。结果使用Triton法和离子交换层析法均可以将FHA和PT这两种成分的内毒素在脱毒前阶段降低至200 EU/mg以下。在合适的纯化条件下使用离子层析去除内毒素的能力高于Triton法,而在对抗原的回收率上Triton法又稍占优势。结论使用Triton法和离子交换层析法均可解决FHA和PT去除内毒素的问题,两类工艺下对目的蛋白活性的影响有待进一步研究。; 姬秋彦高娜梁疆莉胡文著顾琴马艳戴永娟李婧妍史荔孙明波衡燮杨卉娟; 关键词：无细胞百日咳疫苗百日咳毒素丝状血凝素内毒素

重组肠激酶催化亚基在毕氏酵母中的高密度发酵、纯化及活性鉴定被引量：2: 2012年; 应用RT-PCR和搭桥PCR技术,扩增肠激酶催化亚基的cDNA,测序正确后克隆至酵母分泌型表达质粒p9K中.将重组质粒p9K/EKLC转化至表达宿主pichia pastoris GS115,筛选得到高效表达重组牛肠激酶催化亚基工程菌.经甲醇诱导,目标蛋白肠激酶催化亚基(EKLC)表达并分泌至酵母培养基中.高密度发酵后,经超滤浓缩,采用SP Sepharose F.F一步纯化得到纯度达98%以上的重组目的蛋白,活性达到2.3 U/uL.上述结果表明,本实验成功获得了肠激酶催化亚基,它是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.; 姬秋彦毕研伟肖红剑闫玲梅高丹丹李智华; 关键词：分泌表达高密度发酵

人白细胞介素11的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达: 1999年; 从人胚肺二倍体细胞ＫＭＢ１７抽提总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增到人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ，克隆于ｐＢＳ－ＳＫ，以双脱氧链终止法进行序列分析；扩增去除Ｎ端第一个氨基酸的ＩＬ－１１ｃＤＮＡ，克隆于硫氧还蛋白融合表达载体ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ，经过对表达质粒的改造，使融合表达的ＩＬ－１１能被肠激酶精确切割；表达产物经金属鏊合亲合层析后经肠激酶切，再通过阳离子交换层析纯化后，用其依赖细胞株７ＴＤ１检测活性．结果表明，克隆的ＩＬ－１１ｃＤＮＡ序列与文献报道一致；表达的融合蛋白占菌体总蛋白的３０％左右，以可溶性形式存在；纯化产物具有维持依赖细胞株生长的能力．由此，获得了较高纯度的具有生物学活性的ｒｈＩＬ－１１，为中试生产奠定了基础．; 杜秋江马雁冰刘红岩陈尔佳周丽姬秋彦李智华徐维明孙茂盛戴长柏; 关键词：白细胞介素-11 基因克隆大肠杆菌

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