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姚勤: 作品数：115 被引量：435H指数：13; 供职机构：江苏大学生命科学研究院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>

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家蚕二分浓核病毒NS1蛋白的表达及定位: 2015年; [目的]在Bm N细胞中表达家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,Bm BDV)非结构蛋白NS1,并分析其亚细胞定位。[方法]在病毒非结构蛋白NS1基因5'端加上kozak序列、3'端融合Flag标签序列;将重组序列克隆至昆虫细胞表达载体pIBV5/His上,转染BmN细胞,通过Western blot和免疫荧光检测NS1蛋白的表达和亚细胞定位。[结果]PCR和酶切鉴定显示重组表达载体构建正确;Western blot检测到一条大小约37 kDa的特异条带,免疫荧光分析显示表达的蛋白主要定位于细胞核中。[结论]构建的真核表达质粒能在BmN细胞中稳定表达NS1蛋白,该蛋白主要定位在细胞核中。; 张清张晓龙李国辉姚勤胡朝阳; 关键词：亚细胞定位

家蚕生殖细胞相关基因nanos的克隆表达及在胚胎发育中的表达模式被引量：2: 2007年; 【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyxmori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684bp的编码片段,对该片段进行了克隆和表达,亲和纯化表达的蛋白并免疫新西兰大白兔制备抗体。Western blot检测家蚕早期胚胎nanos的表达情况,荧光定量PCR检测nanos在整个家蚕胚胎发育中的表达情况。【结果】克隆并表达了一条长684bp的编码片段,得到了分子量约33kD的融合蛋白。用制备的抗血清对家蚕早期胚胎蛋白的Western blot检测表明,nanos在此阶段基本是恒定表达。荧光定量PCR结果显示刚产的卵中nanos的表达量最大,第2天开始急剧下降,此后到第10天表达量几乎没有变化。【结论】本实验克隆的nanos是家蚕中的一个同源物,该基因在家蚕胚胎发育中的表达模式与蜜蜂等有很大的不同,反映了昆虫生殖细胞形成机制的多样性。; 赵国力陈克平姚勤郭忠建; 关键词：家蚕 NANOS 胚胎发育原始生殖细胞 BLOT

家蚕二分浓核病毒综述被引量：2: 2013年; 家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,BmBDV)归属于新设定的二分DNA病毒科二分浓核病毒属,该病毒曾归属于细小病毒科浓核病毒亚科,主要在家蚕中肠柱状细胞内复制,并引起严重的软化病.与细小病毒不同的是,这种病毒的基因组包含两个节段的单链DNA并编码一个以蛋白为引物的DNA聚合酶.越来越多的证据表明该病毒不同于细小病毒,并采用独特的机制进行复制,到目前为止,该病毒的复制机制尚未明了.本文主要综述了该病毒的病理学和病毒生物学方面的研究进展,包括病毒的基因,基因组结构,以及病毒表达复制方式.; 胡朝阳李国辉李光田姚勤陈克平; 关键词：病毒复制

家蚕春用多丝量新品种春·蕾×镇·珠的育成与推广: 吴玉澄易文仲叶夏裕吴佩兰林昌麒凌韵秋袁金辉赵巧玲姚勤; 该项目属农业科学领域中家蚕遗传育种的应用研究。该品种历经17年，利用杂交育种、系统育种各种质资源的配合力鉴定等方法，我国首批自行育成的主要经济性状达到90年代国际先进水平的优良蚕品种，并在生产中得到了广泛的应用，1990...; 关键词：; 关键词：家蚕杂交育种

家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因截短多肽的表达和抗体制备: 2012年; 通过PCR扩增家蚕二分浓核病毒(Bombyx moribidensovirus,BmBDV)VD1-ORF4基因序列中的两个DNA片段,将测序正确的两个目的片段分别亚克隆到原核表达载体pET-30a上,通过不同浓度的IPTG对含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导,对诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,这两个截短多肽都获得了表达,其N-端融合有6个组氨酸。将割胶纯化的蛋白多肽与佐剂充分研磨,以研磨后的匀浆液对昆明小鼠进行皮下多点注射。获得的抗血清分别对原核诱导表达产物进行Western blot分析,结果表明,在特定的位置都能杂交到一条特异的蛋白带,表明制备的两个多抗能为深入研究VD1-ORF4基因的功能提供基础。; 李国辉王鹏胡朝阳姚勤; 关键词：原核表达融合蛋白抗体制备

利用RAPD技术筛选家蚕抗核型多角体病分子标记被引量：19: 2004年; 在含有抗核型多角体病毒(NPV)病主效基因的家蚕品种NB和高敏感品种306及其近等基因系BC9中,采用500个RAPD随机引物分别在各个品系的DNA混合物中进行扩增以筛选分子标记,获得与家蚕抗NPV病有关的3个分子标记:OPF 072023、OPJ 131300、OPM 161200 其中OPF 072023标记通过各回交代检测,证明获得的标记真实、可靠又对该分子标记的片段进行克隆、测序通过该片段的生物信息学分析。; 刘晓勇姚勤陈克平; 关键词：家蚕近等基因系核型多角体分子标记

家蚕品种资源特殊性状调查被引量：4: 2003年; 对 2 0 0～ 35 0份家蚕资源品种的 2 2项特殊性状进行调查研究 ,涉及 6 0 0 0余种次。发掘出 2 5类特优特色种质 2 0 2种次 ,对其中 10项和 3项性状分别作了相关和遗传分析 ,探明了性状间的内在联系 ,弄清了基因的性质与作用。; 林昌麒陈克平吴冬秀姚勤; 关键词：家蚕品种资源抗性性状

家蚕对浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性及感性品系中肠的差异蛋白质分析被引量：5: 2007年; 【目的】通过比较家蚕Bombyx mori抗性及感性品系的中肠蛋白质表达谱,获得家蚕对家蚕浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性相关的蛋白。【方法】利用双向电泳(2-DE)对感性品种华八35和抗性品种秋丰接种病毒后48h的蛋白质表达谱进行比较分析,并对其中的差异蛋白进行MALDI-TOF-TOF质谱分析,通过NCBInr和MSDB数据库进行蛋白点的鉴定和功能分析。【结果】获得重复性较好的差异蛋白点16个,其中质谱鉴定出5种蛋白,它们分别是糖基转移酶(glycosyltransferase)、糖基转移酶-S(GlcAT-S)、21.5kD小热休克蛋白(21.5kDsmall heat shock protein)、V-ATP酶(vacuolar ATPsynthase)和精氨酸激酶(arginine kinase)。这5种蛋白在抗性品系秋丰中的表达量均高于感性品系华八35。【结论】糖基转移酶和糖基转移酶-S仅在抗性品系中存在,提示它们可能是与抗性有关的蛋白。此外,增强的应激反应和能量代谢也可能与家蚕对BmDNV-3的抗性产生相关。; 包方姚勤李军刘晓勇余蔚尹慧娟陈克平; 关键词：家蚕浓核病毒抗性 MALDI

系统发生分析软件PAUP和TreePuzzle使用方法介绍被引量：5: 2008年; 系统发生分析被广泛应用于研究不同生物DNA、蛋白质序列的进化关系。PAUP和TreePuzzle是目前使用较多的系统发生分析软件,但其使用方法较为复杂,不易被初学者掌握。从序列信息模块、序列参数模块、运算命令模块3个方面介绍了PAUP软件的使用方法,同时也对TreePuzzle软件的使用和进化树的编辑与注释方法做了简单介绍。; 王勇陈克平姚勤; 关键词：系统发生分析