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H1亚型猪流感病毒一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：7: 2014年; 为建立一种快速、简便、准确的方法以诊断和检测H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV),试验根据H1亚型SIV血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,分别设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,建立检测H1亚型SIV的一步法实时荧光定量RT-PCR技术。结果显示,该方法的敏感性可达102拷贝/μL,除H1亚型SIV外,对H3N2亚型SIV、H9N1亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒的检测均为阴性,且应用该方法对疑似猪流感样品进行检测,其结果与SPF鸡胚分离病毒方法结果的符合率为94%。本试验结果表明该方法特异性强、重复性好,有望成为一种特异、敏感、快速、定量检测H1亚型SIV的方法。; 刘好朋胡京京唐续裴仉福李冰李琳陈瑞爱贺东生; 关键词：猪流感病毒 TAQMAN

表达猪白细胞介素2重组腺病毒的构建: 2011年; 为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315中,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-IL-2-EGFP。利用脂质体转染方法将pDC315-IL-2-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞。根据腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP的荧光信号筛选重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。经western blot鉴定,结果表明获得了一株能够表达猪IL-2蛋白的重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。本研究为进一步研究猪IL-2在疫苗免疫中的增强作用及研制新型免疫增强剂奠定了基础。; 张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰; 关键词：IL-2 重组腺病毒基因表达

规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断及防治被引量：1: 2014年; 通过剖检病理变化、细菌分离鉴定、药敏试验和RT-PCR等方法确诊了一例高致病性猪繁殖与呼吸综合征及副猪嗜血杆菌的混合感染,在此基础上提出和实施了相应的防治措施。; 裴仉福陈瑞爱贺东生张显浩唐续刘好朋胡永浩; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征副猪嗜血杆菌

一株类禽H1N1亚型猪流感病毒的进化研究: 2014年; 为了解猪流感病毒(SIV)的变异情况,2013年1月份从山西某养殖场采集呈流感症状的猪鼻拭子10份,采用常规方法接种10日龄SPF鸡胚,进行RT-PCR鉴定及全基因序列分析。结果表明:分离到1株类禽H1N1亚型猪流感病毒,命名为A/swine/Shanxi/02/2013(H1N1);全基因序列测定及同源性分析发现,8个基因片段均与2011年江苏地区流行的类禽型H1N1亚型猪流感病毒有较高的同源性;系统遗传演化发现,该病毒株是由2011年类禽型H1N1流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)进化而来的;HA1氨基酸位点差异分析发现,该病毒株与2009年人群中流行的甲型H1N1流感和经典H1N1毒株抗原性差异较大,其HA裂解位点基序为PSIQSRGLF,呈低致病性特征。; 唐续贺东生裴仉福李琳刘好朋张显浩李冰陈瑞爱; 关键词：遗传演化分析抗原性分析

一株人源H1N1亚型猪流感病毒的进化分析与生物学特性研究被引量：16: 2012年; 为了解猪流感病毒(SIV)的变异情况,我们2009年11月从河北某养殖场采集呈流感症状的猪鼻拭子40份,接种10日龄SPF鸡胚,分离到一株猪流感病毒,通过RT-PCR和血凝抑制试验鉴定为H1N1亚型,命名为A/swine/Hebei/15/2009(H1N1),其全基因序列测定及同源性分析发现,8个基因片段均与2000年左右H1N1人流感病毒有较高的同源性。系统遗传演化显示,该病毒分离株是由2000年人源H1N1流感病毒A/Dunedin/2/2000(H1N1)进化而来。抗原性分析显示该株与甲型H1N1流感病毒和经典H1N1病毒株抗原性差异较大。对小鼠致病性试验表明该病毒株可以直接感染小鼠并导致小鼠轻微临床症状和组织病理学变化,但不致死小鼠,表现为低致病性。; 唐续杨焕良鄢明华李秀丽陈艳孟沙沙尹航辛晓光步志高乔传玲陈化兰; 关键词：猪流感病毒遗传演化分析抗原性分析

一例猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染病例的诊断及防治: 2015年; 规模化养猪场常出现病毒与细菌混合感染疾病,严重影响我国养猪业的发展。广东某猪场的猪群发病,病猪表现为高热、嗜睡、精神沉郁、咳嗽、皮肤发红、眼结膜发炎、腹式呼吸等临床症状,发病率40%、病死率60%。通过病理剖检、细菌分离鉴定、药敏试验和RT-PCR等实验室检测,诊断为猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株及副猪嗜血杆菌混合感染。在此基础上提出和实施了相应防治措施,疫病得到控制。; 裴仉福陈瑞爱贺东生张显浩唐续刘好朋胡永浩; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒副猪嗜血杆菌

传染性胃肠炎病毒PY-D株的分离鉴定及其S基因B、C抗原位点的克隆与序列分析: 2014年; 猪传染性胃肠炎（transmissible gastroenteritis，TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起的、猪的一种急性、高度接触性传染病，具有高致病性、高死亡率的特点，不同年龄和品种的猪对该病均易感，表现为呕吐、严重腹泻和脱水等临床特征，且该病在世界范围内广泛分布，我国从20世纪50年代末期就有该病的报道，近年来TGE在我国部分地区时有发生和流行，给养猪业造成了极大的危害。对该病的有效监测是预防该病的方法之一，而其中以病毒分离鉴定、抗体监测为主要内容。; 刘好朋胡京京李冰张显浩裴仉福李琳唐续尚辉琴陈瑞爱贺东生; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒病毒分离鉴定抗原位点 S基因抗体监测

抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析被引量：2: 2011年; 本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体。采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达。将pCAGGS-HA以100μg.只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11。其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1∶8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应。该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础。; 张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰; 关键词：HA MAB

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