刘爱和
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 磷酸钙法将MMP-2,MMP-3双基因干扰载体转入HEK293T细胞的效率观察被引量：2
- 2009年
- 检测用磷酸钙法能否将修饰后用于沉默MMP-2,MMP-3基因的慢病毒载体有效地转入到HEK293T细胞。利用磷酸钙法,MMP-2,MMP-3双基因干扰载体(MMP组)与对照质粒(对照组)被分别转染HEK293T细胞,在转染后的第24,48及72 h,通过计算绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞数的百分比来判断转染效率。转染24 h后,两组细胞均生长状况良好,荧光显微镜下观察,已有大量绿色荧光出现,计算MMP组转染效率为(91.5±6.2)%,对照组转染效率为(80.3±4.7)%;转染后48-72 h,两组感染效率均未见明显下降。与对照相比,插入了MMP-2,MMP-3shRNA模板序列的慢病毒载体没有降低磷酸钙法转染HEK293T细胞效率,反而有所增高。
- 焦德敏于慧慧张铸业李宙阳刘爱和王彦刈
- 一种简单的慢病毒载体介导的同时沉默双基因的方法被引量：1
- 2010年
- 目的建立一种简单的慢病毒载体介导的同时沉默双基因的方法。方法该研究在慢病毒载体的3'LTR区同时插入沉默两个基因p18和MAD1的shRNA(Small hairpin RNA),通过包装细胞293T和包装质粒包装成假病毒颗粒,感染NIH/3T3细胞。其沉默基因的效果用Western blotting来检测。结果载体构建成功,被感染的NIH3T3细胞中,p18和MAD1基因的蛋白表达被显著抑制。结论该载体构建方法操作简单,无需PCR,及多次连接反应,且可达到两种基因同时被稳定、高效沉默的目的,为相关研究提供了方便。
- 左雨娜焦德敏于慧慧张铸业李宙阳袁军刘爱和王彦刈
- 关键词：SHRNA慢病毒载体
