倪勤
- 作品数：27 被引量：205H指数：7
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- tRNA^(val)-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用被引量：6
- 2006年
- 目的:以tRNAval-shRNA表达框技术筛选高效的HBV C基因siRNA靶位。方法:针对HBV C基因序列设定5个siRNA靶位,以一步重叠延伸PCR技术生成含tRNAval启动子的shRNA表达框(SEC),分别与HBV C基因与EGFP融合表达质粒(pC-EGFP)共转染AD 293细胞,转染后48 h,流式细胞术检测融合基因荧光表达情况,半定量RT-PCR法检测HBV-C基因mRNA表达水平。以筛选的shRNA表达框转染hepG 2.2.15细胞,72 h后放免法检测细胞培养上清HbsA g、HbeA g水平,RT-PCR检测细胞HBV pgRNA水平。结果:共转染shRNA表达框能有效抑制融合表达质粒(pC-GFP)荧光强度和HBV C mRNA表达,其中SEC-492 i抑制效率最佳,而SEC-282 i相对较差。选定的492 i表达框(SEC-492 i)及282 ishRNA表达框(SEC-282 i),均呈剂量依赖性抑制hepG 2.2.15细胞HbeA g分泌和HBV pgRNA水平,其中SEC-492 i抑制HbeA g和HBV pgRNA水平明显优于SEC-282 i。结论:在选定的5个siRNA靶位中,以492 i靶位RNA i效率最高。tRNAval-shRNA表达框技术可用于抗HBV高效siRNA靶位的筛选,有进一步推广应用价值。
- 潘修成陈智倪勤羊正纲徐宁金晗英
- 关键词：乙型基因小干扰RNAHBVC基因
- 小干扰RNA体外抑制HBV表面抗原融合基因的表达
- 目的:利用增强型绿荧光蛋白(EGFF)和小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体技术,初步建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA 有效性的方法。方法:将HBV s 基因融合到EGFP 中...
- 羊正纲陈智倪勤徐宁潘修成金晗英李星仪
- 关键词：小干扰GFP体外抑制HBV
- 文献传递
- 博路定治疗重型和慢性重度乙型肝炎19例临床观察
- 目的:观察恩替卡韦(ETV)治疗重型和慢性重度乙型肝炎28天的疗效及安全性。方法:选择未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者共19例,其中慢重型6例,慢性重度13例。在综合治疗基础上,予 ETV 0．5mg/d口服28天。观察患者...
- 梁伟峰倪勤居红珍盛吉芳
- 关键词：慢性重度乙型肝炎
- 文献传递
- 三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用
- 2005年
- 为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子.
- 倪勤刘克洲羊正纲姚航平陈智
- HBx-siRNA快速筛选体系的建立和应用被引量：5
- 2004年
- 目的 :建立针对 HBx的小干扰 RNA(si RNA)快速筛选体系。方法 :1构建 HBx与增强型绿色荧光蛋白(EGFP) N端融合表达质粒 ;2用一步 PCR法 ,制备针对 HBx m RNA的 RNA多聚酶启动子 - si RNA表达框(SEC) ;3将 SEC转染 HBx- EGFP瞬时表达的 AD2 93细胞 ,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察分析 SEC对 HBx- EGFP荧光表达的抑制效果 ,从而确定有效 si RNA。结果 :1成功构建 HBx- EGFP融合表达质粒 p HBx- EGFP,在瞬时表达细胞中 ,HBx- EGFP绿色荧光主要呈颗粒状 ,聚集在核膜与核膜外周或细胞浆 ;2共转染 SEC能有效抑制 HBx- EGFP的瞬时表达。与 si HBx2 71相比 ,si HBx388是一高效 si RNA位点 ,并且该位点与 t RNAVal和 H1启动子搭配更有效。结论 :成功建立表达 HBx的荧光蛋白报告体系 ,结合快速制备 SEC的方法 ,可用于进行 HBx有效 si
- 倪勤刘克洲羊正纲姚航平爱德华李敏伟陈智
- 关键词：发光蛋白质类HBX增强型绿色荧光蛋白小干扰RNA
- 重型肝炎治疗的若干问题被引量：14
- 2005年
- 刘克洲倪勤侯伟
- 关键词：重型肝炎
- 中低剂量糖皮质激素影响新型冠状病毒清除时间的回顾性研究被引量：20
- 2020年
- 目的研究中低剂量糖皮质激素治疗对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者病毒清除时间的影响。方法回顾性分析2020年1月19日至2月17日浙江大学医学院附属第一医院收治的72例COVID-19患者的临床资料。全部患者均接受阿比多尔和/或联合洛匹那韦/利托那韦、达芦那韦/考比司他抗病毒以及对症支持治疗,其中51例使用甲泼尼龙(0.75~1.50 mg·kg-1·d-1)抗炎治疗作为糖皮质激素治疗组,21例未使用糖皮质激素者作为对照组。比较两组患者及普通型患者痰液病毒核酸转阴时间和肺部影像学改善时间。组间比较采用Kruskal-Wallis检验或Fisher精确检验。结果糖皮质激素治疗组与对照组中位年龄分别为52(45,62)和46(32,56)岁,两组比较差异有统计学意义(χ2=4.365,P<0.05)。两组临床分型差异有统计学意义(P<0.01),糖皮质激素治疗组中重型患者占52.0%,而对照组中普通型占71.4%。两组患者从发病至痰液病毒核酸转阴中位时间分别为15(13,20)和14(12,20)d,差异无统计学意义(P>0.05);两组患者从发病至肺部影像学好转中位时间分别为13(11,15)和13(12,17)d,差异无统计学意义(P>0.05)。在普通型患者中,糖皮质激素治疗组与对照组从发病至痰液病毒核酸转阴中位时间为13(11,18)和13(12,15)d,差异无统计学意义(P>0.05);从发病至肺影像学好转中位时间分别为12(10,15)和13(12,17)d,差异也无统计学意义(P>0.05)。结论在不同临床类型的COVID-19患者中,中低剂量糖皮质激素使用对病毒清除时间未见明显影响;普通型患者中未观察到激素可以加快肺损伤的改善,故不建议使用。
- 倪勤丁丞李永涛赵宏刘骏张旋陈燕飞郭永征俞亮居红珍陶晶晶易萍郎关晶苏俊威石鼎吴文瑞吴晓鑫俞伶盛吉芳徐凯进
- 关键词：冠状病毒感染糖皮质激素病毒清除
- tRNAval-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用
- 目的目前生成siRNA的五种方法中,小发夹RNA(small hairpin RNA shRNA)或siRNA表达框技术被认为是快速经济筛选siRNA靶位的有效方法。我们首次以重叠延伸一步PCR法分别制备了三种RNA P...
- 潘修成陈智倪勤羊正纲徐宁金晗英
- 文献传递
- RNA干扰技术防治病毒性肝炎的研究
- 2003年
- RNA干扰技术作为继反义和核酶之后新的强有力的快速基因阻断技术,迅速在基因功能、抗肿瘤和抗病毒的研究领域中掀起热潮。应用RNA干扰技术进行高效抗HCV和HBV的实验研究,以及体内诱导干扰Fas基因表达对小鼠肝损伤的治疗保护作用,显示了该技术在清除慢性感染状态的肝炎病毒和防治肝炎中具有巨大的应用潜力。
- 倪勤刘克洲
- 关键词：病毒性肝炎RNA干扰技术乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒
- 恩替卡韦经治慢性乙型肝炎患者联合聚乙二醇干扰素α-2b提高临床治愈率研究被引量：16
- 2018年
- 目的 探讨恩替卡韦经治后低HBsAg水平慢性乙型肝炎患者（CHB）联合聚乙二醇干扰素α-2b（Peg IFNα-2b）治疗后的临床疗效.方法 选取2014年1月至2016年1月浦江县人民医院和浙江大学医学院附属第一医院门诊治疗的69例恩替卡韦经治的CHB患者作为研究对象,所有患者HBsAg＜2 000 IU/mL且HBV DNA＜100 IU/mL,将患者随机分为Peg IFNα-2b（1.5 μg/kg,皮下注射,1次/周）联合恩替卡韦（0.5 mg/d）治疗组39例（联合治疗组）与恩替卡韦（0.5 mg/d）继续治疗组30例（恩替卡韦组）.观察两组患者血清HBsAg定量、HBsAg阴转、HBeAg血清学转化和丙氨酸转氨酶（ALT）的基线以及治疗后12、24、48、72及96周时的水平.结果 联合治疗组HBsAg水平随着治疗时间的延长逐渐下降,治疗24周时与恩替卡韦组相比,差异具有统计学意义（ Z＝－2.566, P＜0.05）,在治疗48、72和96周时HBsAg下降幅度明显高于恩替卡韦组（ Z＝－3.499、－3.825和－3.864,P＜0.01）.联合治疗组在治疗24周出现HBsAg阴转,阴转率为7.70%（3/39）,在第96周HBsAg阴转率为28.20%（11/39）,恩替卡韦组在治疗96 周才出现HBsAg 阴转,阴转率为3.30%（1/30）,联合治疗组在48、72和96周HBsAg阴转率均高于恩替卡韦组组（ P＜0.05或＜0.01）.联合治疗组临床治愈11例,临床显效11例,临床有效17例;恩替卡韦组临床治愈1例,临床显效1例,临床有效28例,联合治疗组疗效优于恩替卡韦组（χ2＝18.496,P＜0.01）.联合治疗组HBeAg在治疗12周阴转率为30.00%（6/20）,在治疗96周时为65.00%（13/20）,恩替卡韦组在治疗48周出现2例HBeAg阴转（2/18）,在治疗96 周4例出现HBeAg阴转（4/18）,两组在治疗12、24、72 和96 周HBeAg阴转率差异均具有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）.联合治疗组在12周、24周时ALT均有升高,与恩替卡韦组差异具有统计学意义（Z＝－1.236和－2.658,P＜0.05）,在治疗48周后ALT水平逐渐下降,与恩替
- 金灵肖倪勤赵旭宏黄海珍殷骏峰洪江浩茅佳梁严冬徐凯进
- 关键词：抗病毒治疗恩替卡韦
