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抗病毒基因MxA真核表达载体的构建及在鸡细胞中的表达被引量：6: 2008年; 将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经PCR和酶切方法鉴定后,重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞,通过荧光观察,RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达。结果表明,MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体,成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光,RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断,免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达,并表现出MxA的表达特征,间接证明了MxA可在鸡细胞中表达。MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础。; 刘莉采克俊张易祥何湃丁志丽张念慈; 关键词：转染

MxA基因修饰的鸡精原干细胞体内移植获得转基因精子被引量：1: 2013年; 本实验旨在探讨鸡精原干细胞(SSCs)经体外遗传修饰后移植获得转基因精子的方法。将人抗病毒基因MxA重组慢病毒体外感染鸡SSCs,获得可表达MxA的SSCs;同时将80日龄公鸡经白消安处理30 d后作为无生精能力的受体鸡。MxA基因转染后的SSCs移植到受体鸡,10 d后开始采精,经PCR检测精液DNA中的MxA基因;取移植后10 d的睾丸组织分离培养并检测外源基因表达。结果表明:MxA重组慢病毒感染SSCs后,可见其特征性荧光表达;白消安处理后的受体鸡睾丸组织曲细精管中内源性生精细胞已基本去除;实验组有1只受体鸡的精液DNA连续4次扩增出MxA特异性片段;睾丸组织细胞的RT-PCR及免疫组化均检测到MxA基因的表达。结果显示,重组慢病毒感染后的SSCs能成功移植至受体组织,并继续分化为携带MxA外源基因的精子。本研究为下一步通过人工授精获得抗病毒转基因鸡奠定了良好基础。; 刘莉何湃采克俊张易祥曹访李景芬; 关键词：MXA 慢病毒载体

MxA抗病毒基因在鸡体内的表达: Mx 蛋白是干扰素诱导表达的一种抗病毒蛋白,至今已在多种动物体内发现此类蛋白质,包括禽类。但鸡 Mx 蛋白的抗病毒活性受631位氨基酸的影响,当631位氨基酸为天冬酰胺时有抗病毒活性,为丝氨酸时则无抗病毒活性。人的 Mx...; 何湃刘莉张易祥采克俊丁志丽张念慈; 文献传递

慢病毒载体介导MxA基因感染鸡精原干细胞及其体内移植: 目的:构建人抗病毒基因MxA的重组慢病毒,体内及体外感染鸡精原干细胞/(spermatogonial stem cells,SSCs/),并将体外感染MxA基因的SSCs移植至受体公鸡睾丸内,检测MxA基因在睾丸内的分布...; 何湃; 关键词：慢病毒精原干细胞 MXA; 文献传递

抗病毒基因MxA在鸡体内的表达: 2008年; 大量提取人抗病毒基因MxA的重组质粒pEGFP-C1-MxA,肌肉多点注射未成年广西土鸡,RT-PCR及免疫组化方法检测MxA基因在鸡体内各组织的分布表达。采用RT-PCR方法于注射后5d、10d在呼吸道上皮、脾脏、肌肉组织中均可检出MxA基因的转录;采用免疫组化方法检测到GFP和MxA基因均能在肌肉组织中得到表达,且注射5d后的表达量高于注射10d后。结果表明重组质粒肌肉多点注射可介导MxA在鸡体内多种组织中转录、表达,为进一步探讨MxA的生物学活性以及禽类抗病毒免疫制剂的研发奠定了基础。; 何湃刘莉张焕相采克俊张易祥董顺利

病毒载体在转基因技术中的研究进展被引量：1: 2008年; 转基因技术的广泛应用对基因导入系统提出了越来越高的要求。构建能将目的基因高效稳定导入靶细胞的重组载体是制备转基因动物以及进行基因治疗的关键技术之一。基因导入系统可分为病毒载体与非病毒载体,病毒载体转染效率高、能介导外源基因稳定表达,因而在转基因技术应用中倍受关注。就病毒载体在转基因技术中的研究进展作一综述。; 何湃刘莉; 关键词：基因导入系统转基因动物基因治疗

EGFP-LacZ双报告基因真核表达载体的构建及体外表达被引量：1: 2009年; 构建(β-半乳糖苷酶与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双报告基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达。采用PCR方法从质粒pLenti6/V5-GW/LacZ中获取LacZ全基因,与pEGFP-C1重组后构建真核表达载体pEGFP-C1-LacZ。该重组质粒经PCR和酶切方法鉴定后,在脂质体介导下转染293FT细胞株及鸡胚成纤维细胞,通过荧光观察和组织化学方法检测Egfp和LacZ基因的表达。结果表明,LacZ基因被克隆到pEGFP-C1,成功构建了双报告基因真核表达载体。该重组质粒转染后的细胞呈现绿色荧光,组织化学方法检测到呈蓝色的细胞,表明两个报告基因均能在细胞内正确表达。; 刘莉周政采克俊张易祥何湃曹访; 关键词：真核表达

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何湃