陈添弥 作品数:39 被引量:79 H指数:5 供职机构: 军事医学科学院生物工程研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 自然科学总论 更多>>
人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素基因的克隆和表达 1990年 毒素源性大肠杆菌(ETEC)是引起婴儿及旅游者腹泻的重要致病菌,其毒力因子主要有粘附素和肠毒素。后者又分为热敏感肠毒素(LT)和热稳定肠毒素(ST),是引起腹泻的直接因素,因此,其研究具有重要意义。我们在提取ETEC H 10407株LT编码质粒的基础上,克隆和表达了其LT基因,并对LT-B编码基因即tox B基因作了进一步研究。 程新波 陈添弥 黄翠芬关键词:肠毒素 ETEC 粘附素 毒力因子 重组质粒 候选株 人毒素原性大肠杆菌肠毒素ST、LT-B基因的融合 1994年 将毒素原性大肠杆菌(ETEC)编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码热敏肠毒素B亚基(LT—B)的基因进行融合,并在此基础上进行不同数目ST基因的串联。ELISA检测融合基因表达蛋白产物,观察到ST与LT-B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基因串联个数增加而逐渐升高,而LT的ELISA滴度则减弱。本研究说明ST可以通过基因串联提高表达产物抗原活性。这为毒素原性大肠杆菌多价疫苗的研制提供了重要的研究基础。 汪江 陈添弥关键词:基因融合 重组疫苗 表达毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6的一组基因的克隆 被引量:8 1995年 人源毒素源性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.Coil ETEC)是引起婴幼儿及旅游者腹泻的主要致病菌。ETEC的致病因子包括定居因子抗原 (Colonization factor antigens,CFAs)和肠毒素。大多数ETEC菌株均能产生抗原特异的菌毛,介导细菌与宿主小肠粘膜表面并在粘膜表面上受体的结合,使得细菌能定殖于粘膜表面并在粘膜的功能性清除中存活下来。已经报道的定居因子抗原包括CFA/Ⅰ,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅲ、CFA/Ⅳ(PCF8775)、PCF09和PCFO159等。CFA/Ⅰ和CFA/Ⅲ均由单一的菌毛亚基构成,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅳ则由多种表面抗原(colisurface antigen,CS)复合而成。所有的CFA/Ⅳ阳性菌株均表达CS6抗原,其中有些同时表达CS4或CS5抗原。CS4和CS5都是直径6~7nm的菌毛,能引起人和牛血红细胞的甘露糖抗性的凝集反应(MRHA)。迄今为止,没有观祭到CS6明显的菌毛结构,CS6也不能引起MRHA阳性反应。然而动物实验的结果表明,CS6是CFA/Ⅳ复合抗原中一种对定居作用最重要的抗原”,。本研究组已经通过分子克隆的手段获得了能分别表达CFA/Ⅰ和CS3抗原的重组菌株,用于人源ETEC疫苗的研究。本文报道了表达CS6菌毛抗原的DNA片段的克隆,并用免疫吸附制备的CS6抗血清测定了重组菌株表达的菌毛蛋白。 杨晓 张兆山 张蓓宁 陈添弥 黄翠芬 刘纯杰关键词:大肠杆菌 基因克隆 毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6基因的克隆 1994年 通过构建人源毒素源性大肠杆菌野生株E519/66A大质粒的基因文库,成功地筛选出能表达定居因子抗原CS6菌毛的阳性克隆,初步确定了克隆DNA片段的限制性内切酶图谱。CS6抗原的编码和调控基因集中在一大小为4.6kb的DNA区段中,该片段能产生两种分子量大小不同、但抗原反应交叉的菌毛蛋白。本研究获得的CS6抗原阳性的重组菌株可用于人源ETEC多价疫苗的研制,克隆的基因片段亦可作为研究CS6菌毛蛋白基因表达及调控的基础。 杨晓 张兆山 刘纯杰 张蓓宁 陈添弥 黄翠芬关键词:基因克隆 一株对37种抗菌药物敏感的侵袭性大肠杆菌 1996年 一株对37种抗菌药物敏感的侵袭性大肠杆菌王秀英陈添弥1990~1994年,我们在对西藏600余例腹泻病患者致病菌的调查研究中,从大量标本中分离筛选出1株对多种抗菌药物敏感的野生型侵袭性大肠杆菌(EIEC)。现将结果报告如下:一、材料与方法1.菌株来源... 王秀英 陈添弥关键词:侵袭性大肠杆菌 大肠艾希菌 革兰阴性杆菌 细菌耐药性 诊断血清 全文增补中 用EIEC基因探针检测西藏地区535株埃希氏大肠杆菌的实验研究 王秀英 陈添弥关键词:基因探针 大肠杆菌 腹泻 分子杂交 DNA净化新技术 被引量:2 1989年 本文介绍了一种用玻璃粉从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法.此技术基于在高浓度Nal存在时,琼脂糖的熔点大大降低,在45~55℃下琼脂糖就能溶解.当含有DNA的琼脂糖凝胶溶解后,释放出的DNA吸附于玻璃粉上,与蛋白质、RNA等成分分离.在低盐溶液或水溶液中,DNA从玻璃粉上解脱下来,从而达到净化的目的.此方法简便、经济、快速,DNA回收率可达70~80%. 李淑琴 张兆山 程新波 陈添弥 黄翠芬关键词:碘化钠 玻璃粉 DNA回收 快速克隆 幼畜大肠菌腹泻基因工程多价疫苗 被引量:4 1997年 我国是畜牧业大国,猪、牛、羊等是主要经济家畜。腹泻是影响畜牧业发展的重要疫病,因肠毒素性大肠杆菌引起的新生幼畜腹泻发病率高达30%—80%,死亡率达10%—30%,严重影响幼畜的成活和发育,每年要为此蒙受巨大的经济损失。幼畜腹泻的药物治疗不但价格昂贵、费力费工,而且效果不好;更因致病菌抗药菌株日趋增多,用药往往无效,因而免疫预防是最佳选择。 陈添弥 黄翠芬关键词:基因工程疫苗 仔猪 腹泻 犊牛 羔羊 幼畜 肠毒素大肠杆菌CFA/1重组质粒的高效表达及其结构与功能分析 1995年 肠毒素大肠杆菌(ETEC)是婴幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。每年因 ETEC引起腹泻而死亡的婴幼儿多达百万人。ETEC 腹泻主要是由于细菌通过菌体表面定居因子定居于宿主小肠上皮细胞上,然后大量繁殖产生肠毒素而引起的。定居因子抗原1(CFA/1)是一种优势血清型菌毛,其相应抗体在阻止病原菌在宿主小肠上定居起十分重要的作用。CFA/1基因位于60MDa 的质粒上,在此质粒上有两个区域为 CFA/1表达和菌毛装配所必需。含有 CFA/1结构基因的区域称之 CFA/1-1区,含有调节基因的区域称之 CFA/1-2区。由于 CFA/1-1区和CFA/1—2区相距25MDa。 张兆山 李淑琴 黄翠芬 陈添弥关键词:结构基因 小肠上皮细胞 调节基因 旅游者腹泻 优势血清型 预防仔猪腹泻无抗性基因工程菌株的构建 被引量:5 1990年 以原来含热不稳定肠毒素B亚单位基因质粒DNA为载体,插入lacZ基因,构建了一个既能表达LT-B亚单位又能表达β-半乳糖苷酶的含四环素抗性基因的重组体。在该重组DNA的四环素抗性基因内再插入K88粘附因子抗原基因,从而灭活了四环素抗性基因。经测定该重组体能表达LT-B和K88两种抗原;lacZ基因取代四环素抗性基因,成为良好筛选标记。所构建的重组质粒能稳定存在。 黄培堂 程军 李丰生 徐香 张群伟 陈添弥 黄翠芬关键词:仔猪腹泻 抗性基因 基因表达