车巧林
- 作品数：7 被引量：34H指数：3
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金江苏省农业三项工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 江苏省部分地区动物弓形虫病血清学调查被引量：14
- 2012年
- 以间接血凝(IHA)试验方法对江苏省部分地区(徐州、连云港、盐城、宿迁、南通、泰州、扬州、南京、常州、宜兴、昆山)动物弓形虫病进行血清学调查。试验血清样品稀释度在1∶64时,致敏血球达到50%以上凝集的血清样品判为阳性。结果在所调查的1 100份血清样品(猪、牛、羊、猫、狗等动物)中弓形虫抗体呈阳性者为145份,占总调查血清数的13.2%,其中939份猪血清样品中阳性样品数120份,占总调查猪血清样品的12.8%,总体反映出江苏省内动物弓形虫病感染的概况。
- 孔猛白昀丁志勇刘茂军冯志新熊祺琰白方方车巧林王海燕王占伟韦艳娜邵国青
- 关键词：弓形虫病血清学
- 猪肺炎支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 为了建立一种用间接免疫荧光技术检测猪肺炎支原体黏附宿主细胞的方法。以抗猪肺炎支原体单克隆抗体为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗小鼠IgG为二抗,通过对一抗、二抗工作浓度的优化确定合适的抗体浓度;通过以1×107CCU/ml猪肺炎支原体与PK15细胞作用不同时间,确定其黏附细胞需要的时间;通过不同滴度的猪肺炎支原体与PK15细胞37℃作用4 h,确定其黏附细胞需要的滴度。猪肺炎支原体单克隆抗体P463G11的最适工作浓度为1∶1 000倍稀释,FITC-羊抗小鼠IgG的最适工作浓度为1∶200倍稀释,猪肺炎支原体黏附PK15细胞需要的时间为4 h以上,黏附PK15细胞需要的滴度为1×105CCU/ml以上。表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附作用。
- 车巧林熊祺琰冯志新张旭刘茂军邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体间接免疫荧光
- 猪肺炎支原体P159蛋白的截短表达及黏附活性研究被引量：2
- 2012年
- 为了解猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P159蛋白的黏附活性,本实验利用PCR从Mhp NJ株扩增P159基因片段(3'端),克隆于pET-28a(+)进行表达,并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明,PCR扩增的目的基因片段约为450 bp;SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为46 ku;western blot检测表明该重组蛋白能够与Mhp阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的免疫反应原性;表达的截短蛋白与Mhp的黏附试验结果表明,该重组蛋白可以粘附于猪肺上皮细胞(SJPL)表面,并部分抑制Mhp对SJPL的粘附作用。本研究结果为Mhp致病机制的进一步研究奠定了基础。
- 刘茂军杜海霞杜改梅车巧林张悦熊祺琰白方方王海燕冯志新邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体黏附活性
- 猪肺炎支原体对猪气管上皮细胞的黏附作用被引量：6
- 2015年
- 采用气管结扎、链霉蛋白酶灌注冷消化法分离猪气管上皮细胞,并以对数生长期的猪肺炎支原体(Mhp)感染猪气管上皮细胞,通过间接免疫荧光技术定性定量研究不同滴度的猪肺炎支原体对猪气管上皮细胞的黏附及相同滴度的猪肺炎支原体随时间变化对猪气管上皮细胞的黏附。结果表明,分离的猪气管上皮细胞存活率为95%以上,广谱角蛋白染色阳性;Mhp野毒株XLW-1与猪气管上皮细胞37℃作用30min就能看到少量的支原体黏附,作用4h以上时黏附更明显,并且,二者作用1、2、4、6、10h,XLW-1对猪气管上皮细胞的黏附与阴性对照相比差异极显著(P<0.01);1×107、2.5×106 CCU/mL的XLW-1与猪气管上皮细胞37℃作用6h,能看到支原体黏附于细胞表面,并且与阴性对照相比差异极显著(P<0.01),而其他低滴度的XLW-1则看不到黏附。
- 车巧林余姗姗刘茂军甘源孔猛邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体
- 不同毒力猪肺炎支原体侵入宿主细胞的观察被引量：2
- 2014年
- 旨在研究不同毒力猪肺炎支原体对宿主细胞的侵入以及侵入后在宿主细胞内的分布位置。首先用猪肺炎支原体野毒株XLW-1感染PK15细胞不同时间后,间接免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜对PK15细胞进行断层扫描,以观察XLW-1能否侵入细胞以及感染时间对XLW-1侵入细胞的影响。然后,在能侵入细胞的基础上,用不同毒力的猪肺炎支原体感染宿主细胞STEC、PK15、SJPL和3D4/21,观察它们对宿主细胞的侵入情况。结果表明,猪肺炎支原体野毒株XLW-1与PK15细胞作用8h时不能侵入PK15,作用10h以上时可以侵入PK15,并且随着作用时间的延长侵入的猪肺炎支原体也在增加。研究还表明猪肺炎支原体野毒株XLW-1、168致弱株和168疫苗株均能侵入STEC、PK15、SJPL和3D4/21。并且,STEC中3个菌株均随机分布在细胞质中;PK15中3个菌株均主要分布在靠近细胞膜和细胞两端狭长的细胞质中;SJPL中XLW-1和168疫苗株主要分布在贴近细胞膜内侧的细胞质中,168致弱株则散布在细胞质中;3D4/21中XLW-1和168致弱株主要分布在贴近细胞膜内侧的细胞质中,168疫苗株则在整个细胞质中分布较多。结果提示不同毒力的猪肺炎支原体均能侵入宿主细胞STEC、PK15、SJPL和3D4/21。
- 车巧林刘蓓蓓刘茂军熊祺琰邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体宿主细胞
- 猪肺炎支原体黏附猪肾细胞模型建立及体外黏附特性研究被引量：3
- 2013年
- 为了建立猪肺炎支原体全菌体外黏附细胞模型及初步探讨其对不同细胞系的黏附特性,选取实验室保存的Mhp野毒分离株(XLW-1、XLW-2、XLW-3、WX株)、国际标准株232、弱毒疫苗168株感染猪肾传代细胞系(PK15),同时利用本实验室已建立的Mhp间接免疫荧光检测方法检测各菌株对PK15的黏附特性。结果发现,不同Mhp株全菌均可黏附PK15细胞,但不同菌株黏附能力存在差异。其黏附能力强弱依次为野毒株XLW-1株、WX株、疫苗168株、国际标准株232、野毒株XLW-2、XLW-3株。选取黏附能力较强的XLW-1株,继续探讨其对猪原代气管上皮细胞、猪肺泡上皮细胞(SJPL)、猪肺泡巨噬细胞(3D4/31)、恒河猴肾细胞(Marc145)的黏附性。XLW-1株能在体外黏附不同的细胞系,但对不同细胞的黏附能力存在差异,其中对猪源的原代分离的猪气管上皮细胞、SJPL细胞系、3D4/31细胞系黏附性均较强,而对非猪源的Marc145细胞系的黏附性较弱。本研究结果表明,Mhp全菌体可在多种细胞系上建立黏附感染模型,不同Mhp菌株的黏附能力存在着差异,且同一菌株对不同细胞系的黏附特性也存在差异。
- 张旭冯志新武昱孜车巧林刘茂军熊祺琰华利忠李彬邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体
- 不同毒力的猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附被引量：3
- 2013年
- 为研究不同毒力的猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附作用,本研究采用体外培养的猪气管环检测不同毒力的猪肺炎支原体代表菌株对猪气管上皮细胞及纤毛的损伤情况,初步验证不同猪肺炎支原体代表菌株的毒力。应用间接免疫荧光技术研究不同猪肺炎支原体分离株、标准株、168致弱株及疫苗株对猪肾细胞PK15、肺泡上皮细胞SJPL和猪肺泡巨嗜细胞3D4/31的黏附情况。结果表明猪肺炎支原体野毒株XLW-1能引起猪气管上皮细胞严重病变及纤毛损伤、脱落;国际标准弱毒株J株仅能引起猪气管上皮细胞轻微病变;168疫苗株既不能引起猪气管上皮细胞病变,也不能引起纤毛损伤。野毒株XLW-1、国际标准强毒株232株、弱毒株J株及168疫苗株均能黏附PK15、SJPL和3D4/31,168致弱株可以黏附PK15和SJPL。野毒株、标准强毒株、标准弱毒株、168致弱株及疫苗株均能黏附PK15、SJPL和3D4/31。
- 车巧林冯志新白方方刘茂军邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体宿主细胞间接免疫荧光
