赵威
- 作品数：21 被引量：54H指数：4
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 钙离子通道α2δ1亚基影响肿瘤细胞放疗敏感性的初步研究
- 目的 本实验室前期研究发现钙离子通道α2δ1亚基(CACNA2D1)5亚型是肿瘤干细胞标志物,其单克隆抗体1B50-1与化疗药物联用可有效抑制肿瘤在小鼠体内的生长.本工作在此基础上研究肿瘤细胞中CACNA2D1的表达与放...
- 隋鑫赵威张志谦朱广迎
- 离子通道蛋白X是肝癌肿瘤起始细胞的标志物和治疗分子靶点
- 目的 肿瘤起始细胞(或称为肿瘤干细胞)的存在被认为是肿瘤复发转移、耐受常规治疗的根本原因.对于这类细胞的分离鉴定和研发针对性的治疗用生物技术类药物是肿瘤学研究领域亟待解决的关键科学问题.本研究对离子通道蛋白X是肝癌肿瘤起...
- 张志谦赵威王力民韩海勃
- 关键词：肝癌标志物分子靶标
- RKIP蛋白在多个人肺癌细胞系中的表达下调被引量：19
- 2007年
- 目的检测肺癌细胞系中RKIP的表达情况,探讨其与肺癌细胞侵袭、转移的关系。方法RT-PCR法检测多个人肺癌细胞系中RKIP的表达情况,构建表达人RKIP的融合蛋白,纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。ELISA鉴定血清特异抗体效价,Western blot鉴定血清特异抗体并检测肺癌细胞系中RKIP表达。结果成功构建表达人RKIP的融合蛋白,制备的多抗效价达到106,可特异检测细胞内RKIP表达;有转移性的3个肺癌细胞系中RKIP表达明显下调,且在转移性较高的A549细胞中下调更明显。结论获得了效价和特异性都良好的RKIP多抗,适合应用于RKIP的检测。RKIP表达下调与肺癌细胞侵袭、转移有关,有可能成为肺癌治疗的靶点。
- 韩海勃张志谦赵威
- 关键词：RKIP多克隆抗体肺癌
- 尿液中MMP-2、MMP-9及MMP-9/NGAL复合物的表达在乳腺癌筛查中的意义被引量：5
- 2008年
- 目的检测女性尿液中MMP-2、MMP-9及MMP-9/NGAL复合物的表达,探讨其在乳腺癌高危发病妇女普查筛选中的意义。方法采用明胶酶底物电泳法和Westernblot方法,检测正常女性(n=60)、乳腺良性疾病患者(n=41)、乳腺癌患者(n=127)尿液中MMP-2、MMP-9及MMP-9/NGAL复合物的表达情况。结果MMP-2、MMP-9、MMP-9/NGAL复合物的表达在正常女性尿液中分别为23.33%、15%和13.33%;在乳腺良性疾病患者尿液中分别为43.93%、39.02%和36.59%;在乳腺癌患者尿液中分别为64.56%、76.37%和70.08%。乳腺癌患者尿液中MMP-2、MMP-9和MMP-9/NGAL复合物的表达与正常女性间差异有统计学意义(P<0.001);与乳腺良性疾病患者比较差异也有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌患者尿液中MMP-2+MMP-9+MMP-9/NGAL复合物同时表达,与乳腺良性疾病患者比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论1)乳腺癌、乳腺良性疾病和正常女性尿液中MMP-2、MMP-9、MMP-9/NGAL复合物均有表达。但正常女性很少表达MMP-2和MMP-9,极少表达MMP-9/NGAL复合物。2)乳腺癌患者尿液中MMP-2+MMP-9+MMP-9/NGAL复合物的同时表达,对乳腺癌的诊断具有重要意义。对乳腺癌高危发病妇女的普查筛选也具有指导意义。
- 申哲洙顾晋赵威张志谦
- 关键词：尿液MMP-2MMP-9乳腺癌
- 抗人RKIP单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:制备抗人RKIP(hRKIP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:自行构建表达人RKIP重组蛋白(reRKIP),纯化的reRKIP免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用免疫荧光和Western blot鉴定mAb的特异性。结果:成功构建RKIP原核表达载体,转化BL21后可高效表达reRKIP,成功地获得4株(EC1,ED2,ED5和8B3)分泌抗人reRKIP mAb的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在免疫荧光和Westernblot试验中均可与细胞中RKIP蛋白反应。结论:成功地制备了4株抗hRKIP mAb,为进一步研究RKIP生物学功能奠定了基础。
- 韩海勃张志谦赵威
- 关键词：RKIP单克隆抗体
- Tet-on慢病毒调控系统的构建及其调控作用被引量：1
- 2011年
- 目的构建四环素诱导基因表达的3代慢病毒系统,为慢病毒介导的基因治疗提供实验依据。方法将四环素调控的转录激活因子(rtTA和M2rtTA)分别克隆入带有新霉素(neo)筛选标记的慢病毒载体中,得到pELNS-rtTA-IRES-Neo和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo质粒,将四环素顺式应答作用元件(TETO和TREpitt)和绿色荧光蛋白(GFP)克隆入带有杀稻瘟素(blasticidin)筛选标记的慢病毒载体中,得到plenti6-TETO-GFP和plenti6-TREpitt-GFP质粒,将pELNS-rtTA-IRES-Neo与plenti6-TETO-GFP和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo与plenti6-TREpitt-GFP分别以10∶1共同转染293细胞,用四环素类似物强力霉素(Dox)诱导GFP基因表达,48h后检测GFP表达。结果成功构建了1代四环素调控体系pELNS-rtTA-IRES-Neo和plenti6-TETO-GFP重组质粒。共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为90%,而未加Dox组细胞GFP阳性表达率约为30%。成功构建了2代四环素调控体系pELNS-M2rtTA-IRES-Neo和plenti6-TREpitt-GFP重组质粒。共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为95%,而未加Dox组细胞未见GFP表达。结论 2代四环素调控体系3代慢病毒系统可以高效诱导目的基因表达,且目的基因背景表达值低。
- 韩海勃赵威张志谦
- 关键词：四环素慢病毒基因调控基因工程基因克隆
- 转移相关分子链Actin-CD44-MMP-2在乳腺癌转移实验中的改变被引量：1
- 2011年
- 目的研究乳腺癌转移相关的分子机制及抑制体内外转移的作用和机制。方法选择高、低转移性乳腺癌细胞系BICR-H1和MCF-7,用明胶底物非变性电泳分析法、Western blot和免疫荧光染色等方法,观察肌动蛋白、CD44和基质金属蛋白酶2分子链（ACM）成员分子的定性与定位关系。利用荧光标记肿瘤鸡胚尿囊膜（CAM）模型,血管内注射顺铂或MMP-2 C末端PEX融合蛋白,利用荧光显微镜直接观察鸡胚肺转移抑制情况与癌细胞的ACM水平。结果高转移的BICR-H1细胞ACM分子链呈高表达,分子定位相互关联。低转移性的MCF-7细胞呈低表达或无表达。体外实验中,顺铂和PEX分别抑制了CD44和MMP-2的表达。体内实验中,5~30μg顺铂能够抑制BICR-H1和MCF-7肿瘤的体内生长,呈剂量依赖性。30μg顺铂使乳腺癌BICR-H1细胞体内转移克隆数下降到（8±6）个[对照组为（30±15）个],而同剂量PEX可以完全抑制其体内转移。结论 ACM分子链表达与乳腺癌的转移性密切相关。顺铂和PEX分别通过封闭ACM分子链的环节,使CD44或MMP-2表达抑制,从而抑制乳腺癌细胞的体内外生长和转移。
- 赵威韩海勃林仲翔张志谦
- 关键词：乳腺癌肌动蛋白CD44MMP-2
- 利用骨骼肌细胞高效表达人基质金属蛋白酶-9
- 2006年
- 为探讨利用培养的骨骼肌细胞表达人基质金属蛋白酶的可行性,利用PCR和DNA重组技术构建人mmp-9-myc-his/pcDNA3基因表达载体,转染成肌细胞QM-7,G418筛选阳性转染子.诱导细胞分化成肌管后,收集细胞培养上清.经Western印迹检测,表达产物分子量为93 kD,与蛋白标准品对照推测表达量约10～15 mg/L.利用Ni-NTA琼脂糖从1 L培养上清中纯化到4～6 mg MMP-9纯品,纯化效率约50%.经明胶酶谱检测,表达蛋白可以降解明胶.这些结果表明：所表达的MMP-9具有生物活性,为以MMP-9为靶分子的特异拮抗剂和/或药物的筛选、MMP-9定量检测试剂盒的开发以及MMP-9的功能研究奠定了基础;以鹌鹑成肌细胞QM-7作为外源蛋白脊椎动物细胞表达体系具有表达量高、经济等优点,有可能进一步研究开发成为新的外源重组蛋白脊椎动物细胞表达体系.
- 刘江莹赵威张志谦
- 关键词：骨骼肌细胞基因表达
- 小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体。方法采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达。SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性。结果成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在。SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况。结论获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体。
- 张媛王力民赵威韩海勃
- 关键词：融合蛋白表达多克隆抗体
- 基质金属蛋白酶9及其复合物在乳腺癌患者尿中的表达被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其复合物在乳腺癌患者尿中表达的临床意义。 方法 采用明胶酶电泳法、Western印迹法 ,观察 97例乳腺癌患者、4 1例乳腺良性疾病患者和 6 0例正常人尿中MMP 9及其复合物的表达状况。 结果 乳腺癌患者MMP 9及其复合物表达率分别为76 2 9%、6 4 95 % ;乳腺良性疾病患者为 4 6 34%、4 3 90 % ;正常人为 2 3 33%、2 3 33%。乳腺癌患者MMP 9及其复合物表达水平与乳腺良性疾病患者和正常人比较 ,差异有非常显著性意义 (χ2 =7 4 5 6 ,P <0 0 1)。乳腺癌患者尿中MMP 9及其复合物表达与淋巴结转移有关 (χ2 =5 2 0 6 ,P <0 0 5 ) ,与肿瘤大小、TNM分期、年龄、绝经前后、雌激素受体表达无关。 结论 尿中MMP 9及其复合物表达对判定乳腺癌淋巴结的转移具有重要意义。对乳腺癌早期预防及普查可能具有重要意义。
- 申哲洙赵威顾晋张志谦严立
- 关键词：基质金属蛋白酶9复合物乳腺癌
