蒋智勇
- 作品数：44 被引量：169H指数：7
- 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一种猪饲料中猪源蛋白的检测方法
- 本发明公开了一种猪饲料中猪源蛋白的检测方法。方法包括将猪源IgG的抗体包被在基材上，然后加入受检样品，之后加入用标记物标记的另一种不同动物源的抗猪源IgG的抗体，接着加入底物显色。本发明方法敏感性好、重复性好、检测限低、...
- 宋长绪蒋智勇蔡汝健朱丹
- 文献传递
- 猪葡萄球菌ExhB基因在E．coli中的表达及生物学活性分析被引量：3
- 2009年
- 以猪葡萄球菌基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ExhB基因,克隆测序鉴定后,插入质粒pET32a,构建重组表达载体pET32a-ExhB,通过大肠杆菌BL21表达重组融合蛋白,利用Ni亲和层析的方法纯化重组的融合蛋白,并用纯化的蛋白攻毒裸鼠,鉴定其生物学活性。结果显示,扩增出了猪葡萄球菌ExhB基因并纯化出了重组的融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白的相对分子质量约为45 000,主要以包涵体形式存在;通过ELISA和琼脂扩散试验表明,所表达的包涵体蛋白可以与用菌体制得的多克隆抗血清发生特异性结合;用复性的蛋白在裸鼠身上攻毒后可以产生皮炎病变。结果表明,成功的表达了ExhB基因的重组融合蛋白,并且鉴定出重组蛋白可与猪葡萄球菌阳性血清发生特异性免疫反应和重组蛋白在裸鼠身上的致病性,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及建立该菌完备准确的防治和检测方法奠定基础。
- 杨彩娟张曦蒋智勇陈德坤宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌基因表达生物活性
- 广东省猪伪狂犬病流行病学和净化技术研究及应用
- 宋长绪孙彦伟任裕其陈平洁黄忠蔡汝健余业东陈溥言田云何祝君蒋智勇张春红刘燕玲白丽丽黄庭汝
- 猪伪狂犬病对该省的养猪业造成了很大损失。但国内对该病的流行病学、综合防控和净化得研究仍较肤浅。该成果对广东省的猪伪狂犬病流行病学和净化技术进行了系统全面的调查研究并进行了应用验证。在国内首次开展了PR时间分布研究，运用了...
- 关键词：
- 关键词：猪伪狂犬病流行病学动物疫病
- 猪圆环病毒2型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达被引量：3
- 2005年
- 根据PCV2 ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702 bp)。将此基因片段克隆入pMD 18_T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD_ORF2。将PCV2 ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack_CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack_CMV_ORF2,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV_ORF2,然后用PacⅠ线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒。通过荧光显微镜观察、PCR检测和Western blot检测证明PCV2 ORF2基因在293细胞内获得表达,ORF2多肽具有良好的免疫原性。
- 宋长绪蒋智勇王贵平高向阳赵亚华
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒
- 猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：9
- 2008年
- 以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）Cap重组蛋白作为免疫原，按常规方法免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7，其染色体平均数为98～103，间接ELISA检测3株细胞培养上清效价分别为1：3125、1：3125、1：15625，小鼠腹水效价分别为1：390000、1：390000、1：1950000。ELISA结果显示，1C7A4、4F3F5和4G87F仅与融合表达的PCV2-Cap蛋白反应，而与PET-32a载体表达的蛋白不反应。相加ELISA结果显示3株单克隆抗体对应两个不同的病毒抗原位点。间接免疫荧光结果显示，1C7A4、4F3F5和4G8F7能与PCV2发生反应，而不与PCV1发生交叉反应。结果表明所获得的3株单抗是PCV2型特异性的，为PCV1和PCV2鉴别诊断方法的建立奠定了基础。
- 元永平丛丽媛陈德坤蒋智勇张春红宋长绪
- 关键词：单克隆抗体
- 猪圆环病毒Ⅱ型的分子生物学研究与套式PCR诊断方法的建立及推广应用
- 宋长绪王贵平高向阳林志雄蒋智勇刘燕玲朱道中黄忠苏良科蔡汝健孔德胜李春玲季芳陈建君王浩文
- 建立的检测PCV2的套式PCR方法在生产中已进行了规模化应用，共对287大中型猪场1560份样品进行了检测，其中检测病理材料103份，血清1427份，精液20份。检测的样品中阳性率为63%。其中阳性猪场达72%，检测样品...
- 关键词：
- 关键词：圆环病毒分子生物学
- 一种分离猪Ⅱ型圆环病毒的新方法
- 合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)全基因组的特异性引物,从2份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中,PCR扩增和克隆了2株PCV2全基因组.将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较.结果显...
- 蒋智勇宋长绪黄忠刘燕玲张春红王浩文蔡汝健
- 关键词：全基因组PCR扩增基因序列
- 华南地区猪圆环病毒1型与2型感染情况调查及相互关系被引量：3
- 2007年
- 根据已发表的猪圆环病毒1型(PCV-1)与猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计4对特异性引物,用套式PCR方法对广东地区的规模养猪场或个体养殖户送检的144份猪血清进行了PCV- 1与PCV-2病毒检测。结果显示PCV-1阳性血清21份,PCV-2阳性血清40份,PCV-1与PCV-2均为阳性的血清7份,PCV-1阳性率为14.6％,PCV-2阳性率为27．8％;PCV-1与PCV-2均为阳性的阳性率为4．9％,从数据上的比较可知PCV-2的感染率高于PCV-1的感染率。说明PCV-2感染比较普遍,患病猪群中也存在一定比例的PCV-1病毒感染。
- 孙丽华徐维加刘燕玲蒋智勇郝永清宋长绪李旭阳
- 一种小分子DNA疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种小分子DNA疫苗及其制备方法，小分子DNA疫苗由转录启动子和目的基因构成线性DNA片断，目的基因包含其起始和终止密码子。与现有DNA疫苗相比，本发明的小分子DNA疫苗，可更快地诱导产生抗体，产生的细胞免疫...
- 宋长绪蔡汝健蒋智勇刘燕玲
- 猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2005年
- 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果表明所克隆的ORF2基因与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性为99.5%.与其它PCV-2的ORF2核苷酸序列同源性在92.1%～99.9%之间,推导的氨基酸序列同源性在90.2%～99.5%之间.
- 蒋智勇宋长绪王贵平高向阳赵亚华
- 关键词：ORF2PCV病料多系统消耗综合征猪圆环病毒
