蒋太峰
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 串联MS2衣壳蛋白和MS2特异结合RNA表达载体构建及应用
- 2012年
- 目的构建体内研究RNA-蛋白相互作用的表达载体。方法利用MS衣壳蛋白可与MS2结合位点(MS2bs)RNA特异性结合的特点,通过设计特异引物,构建pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,以及表达MEG3非编码RNA的表达载体pcDNA3.0-MEG3V1-12XMS2bs。共转染细胞,进行RNA免疫沉淀,所得RNA进行实时定量PCR分析验证。结果成功构建了pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,实时定量PCR结果表明,与对照相比能明显富集MEG3V1非编码RNA分子。结论成功构建了体内研究RNA-蛋白质相互作用的表达载体,为RNA-蛋白相互作用研究提供了新的技术方法。
- 蒋太峰付汉江刘珊珊金英花朱捷李恩民郑晓飞
- 关键词：RNA结合蛋白
- 哺乳动物细胞CDK3系列表达载体的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶3(CDK3)在哺乳动物细胞的表达载体,并在真核细胞NIH3T3中进行初步表达。方法:从食管癌细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CDK3编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK3片段分别亚克隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;将获得的表达载体转染小鼠成纤维细胞NIH3T3,并用蛋白免疫印迹法进行初步的CDK3表达分析。结果:PCR扩增获得约900 bp目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析显示重组片段是人CDK3基因序列,全长915 bp;CDK3目的片段分别亚克隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP载体,获得相应表达载体;运用构建的表达载体,可以在真核细胞中表达出CDK3蛋白。结论:成功构建了CDK3系列哺乳动物细胞表达载体,并在NIH3T3中得到表达。
- 吴健谊蒋太峰许丽艳李恩民谢剑君
- 关键词：基因克隆真核表达载体
- 长链非编码RNA MEG3作用蛋白筛选与鉴定以及CDK3真核系列表达载体的构建
- 第一部分 目的：建立一种体内研究RNA-蛋白相互作用的新方法，筛选鉴定lncRNA MEG3相互作用蛋白。方法：利用噬菌体MS2衣壳蛋白可与MS2bs RNA特异性结合的特点，设计特异性引物，构建pcDNA3.0-Fl...
- 蒋太峰
- 关键词：蛋白筛选
- 文献传递
- 哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。方法:从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。结果:RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。结论:成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。
- 吴健谊蒋太峰谢剑君张锴杜则澎许丽艳
- 关键词：CDK2基因克隆真核表达载体
