肖艳
- 作品数：22 被引量：121H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 以腺病毒为模式分析影响病原微生物2种常用灭活方法可靠性的因素被引量：3
- 2009年
- 目的以表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒(rAdvGFP)为模式病毒,模拟实验室内利用次氯酸钠灭活含病毒废液和利用紫外线对生物安全柜台面进行消毒的实验室操作,并评价其可靠性及影响因素。方法终浓度为0(阳性对照)、0.5%、0.2%、0.1%、0.05%的次氯酸钠溶液(0.5%、0.2%、0.1%、0.05%次氯酸钠组)分别与rAdvGFP溶液(1×106TCID50)混合后,将混合液原液与混合液的1:10～1:105倍比稀释液分别接种人胚肾293细胞,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。将rAdvGFP溶液(1×103TCID50)置于紫外灯下分别照射0(阳性对照)、15、30、60、120min(15、30、60、120min照射组),各组再按垂直照射高度的不同分为5、10、20、30、67cm亚组,照射后收集各组病毒液接种293细胞,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。实验均重复3次。结果各组次氯酸钠病毒混合液原液均造成细胞不同程度的损伤,其中0.5%次氯酸钠组混合液原液对细胞的毒性作用较强;稀释10倍后,除0.05%次氯酸钠组外,其余各浓度次氯酸钠组稀释液均导致细胞不同程度的死亡;稀释102倍后,仅0.5%次氯酸钠组稀释液仍对细胞具有毒性作用。荧光显微镜下观察显示,仅0.1%次氯酸钠组的1:10、1:102倍稀释液和0.05%次氯酸钠组的1:10、1:102、1:103倍稀释液接种细胞可见绿色荧光。紫外线照射后在荧光显微镜下观察显示,15min照射组的各亚组细胞均可见明显绿色荧光;30min照射组的20、30、67cm亚组与60、120min照射组的67cm亚组细胞仍可见绿色荧光。结论有效氯浓度须在0.2%以上、安全柜内1.12mW/cm2强度紫外线照射30min以上方能有效灭活重组腺病毒,建立实验室操作的可靠性评价技术体系并据此制定标准操作规程很有必要性。
- 任丽丽陈岚肖艳王健伟
- 关键词：腺病毒科
- 2010至2012年门诊和住院儿童急性呼吸道感染病毒病原比较分析
- 刘春艳申昆玲肖艳谢正德任丽丽胡英惠幺远杨燕钱素云赵成松
- 人腺病毒和博卡病毒荧光定量PCR检测方法及其应用
- 本发明提供了可用于人腺病毒和博卡病毒所致疾病检测的荧光定量PCR的引物和探针；在一个实施方案中，所述引物和探针的序列如SEQ ID NOs：1‑3所示或如SEQ ID NOs：4‑6所示。本发明还提供了所述引物和探针或其...
- 王健伟任丽丽肖艳郭丽李建国
- 文献传递
- 2007年至2014年北京地区儿童急性下呼吸道流感病毒感染临床分析被引量：9
- 2015年
- 目的 了解北京地区儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）流感病毒（IFV）感染状况,比较儿童ALRTIIFV和呼吸道合胞病毒（RSV）的临床特征.方法 采集ALRTI患儿的咽拭子或鼻咽吸出物,利用多重反转录-聚合酶链反应检测方法检测RSV、副流感病毒、鼻病毒和IFV等.对A、B和C型IFV阳性病例进行分析,比较单纯IFV感染患儿与同期单纯RSV感染患儿的临床特征.结果 （1）2007年3月至2014年3月,共采集4 012份北京儿童医院收治的ALRTI患儿的呼吸道标本,2 697例标本病毒检测阳性（67.2％）,IFV标本256例（6.4％）,其中A型（IFA） 154例（3.8％）,B型（IFB）97例（2.4％）,C型（IFC）6例（0.1％）.（2）＜6个月、6个月-1岁、1-3岁、3-6岁和＞6岁年龄组中IFV检出率分别为4.1％、7.6％、12.0％、7.8％和4.8％,其中1-3岁组阳性率最高;男童与女童IFV总检出率差异无统计学意义（6.7％比5.9％,x2=2.63,P＞0.05）;冬春季为北京地区儿童流感病毒的流行高峰.（3）单纯IFA、单纯IFB和单纯RSV感染的ALRTI住院患儿分别为16例、15例和175例,单纯IFA感染组与单纯RSV感染组（43.8％比84.0％,x2=12.74,P＜0.001）和单纯IFB感染组与单纯RSV感染组（33.3％比84.0％ ,x2=19.11,P＜0.001）中＜1岁年龄患儿所占比例的差异有统计学意义.（4）单纯IFA和单纯IFB感染组重症肺炎的发生率高于单纯RSV感染组（31.2％、26.7％比4.0％,x2=18.49、13.01,P均＜0.001）,单纯IFA和单纯IFB感染组气管插管发生率高于单纯RSV感染组（25.0％、13.3％比1.7％ ,x2 =22.51、7.28,P＜0.001,P=0.001）,差异均有统计学意义,其他临床表现、诊断、机械通气的发生率和住院时间的差异均无统计学意义.结论 IFV是北京地区儿童ALRTI最主要的病毒病原之一,冬春季为儿童流感暴发的高峰期;低年龄组尤其是1-6岁的儿童更容易感染IFV,应作为流感防控的重点人群.ALRTI住院患儿单纯IFV感染与RSV感染的临�
- 朱云郭佳运谢正德刘春艳任丽丽肖艳徐保平杨燕钱素云耿荣申昆玲
- 关键词：急性下呼吸道感染流感病毒呼吸道合胞病毒儿童
- 2007-2015年北京地区儿童急性下呼吸道感染人冠状病毒检测及临床分析被引量：14
- 2015年
- 目的 了解北京地区儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）中人冠状病毒（HCoV）的感染情况,了解儿童急性下呼吸道HCoV感染的临床特征.方法 2007年3月至2015年2月首都医科大学附属北京儿童医院内科急救室就诊及住院的急性下呼吸道感染患儿共4 371例,按年龄分为4组,其中＜1岁组1 890例;1～＜3岁组788例;3～＜6岁组553例;≥6岁组1 140例.采用RT-PCR方法,对患儿鼻咽吸取物进行HCoV（包括HCoV-OC43,HCoV-229E,HCoV-NL63和HCoV-HKU1）及RSV等9种常见呼吸道病毒检测.对单纯HCoV阳性住院病例的临床表现进行分析,并与同期单纯呼吸道合胞病毒感染住院病例的临床特征进行对比.结果 （1）在总共4 371例ALRTI患儿中,病毒阳性2 895例（66.23％）,其中HCoV阳性147例（检出率3.36％）.（2）2007-2014年各年份HCoV的检出率（％）分别为：6.11、3.79、4.69、4.31、2.38、2.10、0.77和2.65;1-12月各月HCoV的检出率（％）依次为2.53、2.12、3.63、6.68、1.53、3.77、3.92、3.00、2.15、5.26、3.叭和2.80.（3）不同种HCoV在4 371例ALRTI患儿中的检出情况如下：HCoV-OC43阳性48例（1.10％）,HCoV-229E阳性32例（0.73％）,HCoV-NL63阳性25例（0.57％）,HCoV-HKU1阳性27例（0.62％）.（4）＜1岁、1～＜3岁、3～＜6岁和≥6岁年龄组HCoV的检出率分别为4.13％、5.08％、2.71％和1.23％（x2 =27.218,P＜0.01）.（5）单纯HCoV急性下呼吸道感染住院患儿共16例,其中支气管肺炎12例,急性喉梗阻3例,支气管哮喘急性发作2例.常见临床表现为咳嗽（14例）、喘息（13例）、呼吸困难（9例）、发热（6例）、声嘶（4例）、喉鸣（4例）,胸X线片异常（包括肺纹理增粗模糊、斑片影或致密影）（12例）.其临床表现、并发症的发生率以及接受机械通气的比例,与同期193例单纯RSV感染患儿差异无统计学意义.结论 2007年3月至2015年2月北京地区HCoV检出率为3.36％;单纯HCoV急性下呼吸道感染住�
- 钱艺谢正德任丽丽刘春艳肖艳徐保平杨燕钱素云耿荣申昆玲
- 关键词：冠状病毒呼吸道感染儿童
- 一种抗新型冠状病毒的抗体及其用途
- 本发明涉及一种抗新型冠状病毒的抗体及其用途，该抗体包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:1～3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；并且轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID...
- 王健伟张乔郭丽许刘辉任丽丽肖艳
- 从临床呼吸道样本直接扩增人冠状病毒0C43全基因组序列方法研究
- 2014年
- 目的针对普通人冠状病毒（humancoronavirus，HCoV）基因组较大、难以分离培养的特点，建立无需分离、直接从微量临床呼吸道样本中扩增HCoV-0C43全基因组序列的PCR方法。方法从HCoV-OC43检测阳性的鼻咽洗液样本中提取核酸，用逆转录的方法获得病毒cDNA，根据GenBank中HCoV-OC43序列设计一整套合成扩增引物，根据样本PCR扩增结果进行引物序列和扩增条件的优化，序列测定后进行拼接和序列特点分析。结果建立了基于普通PCR方法的HCoV．0C43全基因组序列扩增体系，利用200tzl呼吸道样本可完成全基因组序列的扩增和验证，并成功从60份临床样本中获得40株全基因组序列。结论所建立方法可利用微量呼吸道样本获取HCoV-0C43病毒全基因组序列，为系统分析HCoV-0C43的基因组变异和进化特征提供了简单易行的技术方法。
- 张越肖艳任丽丽王健伟
- 关键词：基因
- 气道抽吸液标本单细胞转录组测序前细胞处理技术的比较
- 2023年
- 目的探索适用于气道抽吸液标本单细胞转录组测序的细胞前处理方法。方法从4例急性呼吸道感染患者中新鲜采集4份气道抽吸液标本, 用痰消化液消化后过细胞滤网制备成单细胞悬液, 分别用新鲜细胞直接建库(direct emulsion, DE)、用10×Genomics的单细胞RNA固定试剂固定后混合建库(direct-fix, DF)、将细胞冻存复苏再固定后(frozen-fix, FF)混合建库3种方法操作, 3种方法均以104个细胞进行油包水处理, 用10×Genomics平台进行单细胞测序, 对获取的细胞数量、数据质量、注释的细胞种类、标记基因的表达水平进行比较分析, 用Pearson相关性分析3种前处理方法获得的同种细胞亚群高变基因表达差异。比较3种前处理方法获得的同一细胞亚群的差异基因在不同方法之间的表达水平。通过Pearson相关分析研究3种前处理方法获得的同一细胞亚群之间差异基因表达的相关性。结果 DE、FF、DF方法获得的单细胞数量中位数分别为2 733、1 140和5 897个(P>0.05), 唯一分子识别符高于500, 基因中位数分别为801、887、1 259(P>0.05)。评估RNA复杂度的新颖性评分超过0.8的细胞比例分别为99%、87%和93%。3种方法获得的细胞亚群均有鳞状上皮细胞、分泌细胞、纤毛细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、浆细胞、中性粒细胞等9种细胞亚群, 与DE方法比较, DF和FF方法可多获得特异性高表达角蛋白5的基底细胞。3种前处理方法中同一细胞亚群差异基因和高变基因在不同方法之间表达高度一致, 具有显著相关性(P<0.001)。结论在相同的测序数据量下, 气道抽吸液标本单细胞悬液先固定再进行探针杂交和转录组测序的方法得到的数据质量与新鲜细胞直接操作的质量相近, 该方法更适用于临床样本的单细胞转录组测序分析的样本前处理过程。
- 马永朝肖艳黄鹤吴超任丽丽王健伟
- 关键词：标本前处理
- 严重急性呼吸综合征冠状病毒2单克隆抗体的制备
- 2020年
- 目的制备针对严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)的单克隆抗体,用于抗原诊断。方法收集分泌抗SARS-CoV单克隆抗体的杂交瘤细胞上清液,并用Western blot和间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测单克隆抗体与SARS-CoV-2 N蛋白之间的反应。通过免疫荧光,检测单克隆抗体与Vero细胞培养物中SARS-CoV-2的反应性。结果从杂交瘤细胞中获得了两种单克隆抗体,分别称为A1和A2。它们都可以与SARS-CoV-2 N蛋白发生反应,而A2也可以识别SARS-CoV N蛋白。这些单克隆抗体可用于ELISA和免疫荧光实验。结论获得了2种针对SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体,为发展SARS-CoV-2抗原检测方法提供了基础。
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- 关键词：核衣壳蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附试验免疫荧光
- 一种抗新型冠状病毒的抗体及其用途
- 本发明涉及一种抗新型冠状病毒的抗体及其用途，该抗体包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:1～3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；并且轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID...
- 王健伟张乔郭丽许刘辉任丽丽肖艳
