耿哲
- 作品数：13 被引量：30H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人工抗原呈递细胞诱导CML28特异性T淋巴细胞杀伤急性白血病细胞的研究
- 2009年
- 目的探讨以人工抗原呈递细胞模拟树突细胞（DC）体外诱导特异性T淋巴细胞活化、增殖，观察特异性T淋巴细胞杀伤白血病细胞的效应。方法用慢性粒细胞白血病细胞特异性抗原肽（CML28）作为目标肽，并以磁珠同时负载人工合成的HLA-A2-Ig二聚体-抗原肽（CML28）复合物以及B7-1分子，作为诱导T淋巴细胞的活化、增殖的双信号分子，模拟抗原呈递细胞的生物功能，建立一种人工抗原呈递细胞；从HLA-A2健康骨髓捐献者骨髓或外周血中分离出单个核细胞作为效应细胞，并与人工抗原呈递细胞共孵育，以流式细胞术检测特异性T淋巴细胞活化、增殖程度。以初治急性白血病细胞作为靶细胞，将特异性T淋巴细胞与白血病细胞分别以5：1，10：1，20：1，40：1，80：1比例共孵育4h，用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测杀伤急性白血病细胞的效果。结果以该人工抗原呈递细胞刺激T淋巴细胞后，其CML28特异性T淋巴细胞比例明显增高，实验组中抗原肽ALFCGVACA、FLQGDTSVL、DLMSSTKGL、VLTFALDSV所诱导的特异性T淋巴细胞比例分别为（13．5±1．6）％、（15．2±1．5）％、（14．7±1．8）％、（34．3±3．5）％，与对照组[（2．2±0．4）％]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。当效应细胞与靶细胞分别以5：1，10：1，20：1，40：1，80：1混合后，随着效应细胞的增加，诱导杀伤急性白血病细胞效率也明显增强，与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论以磁珠为平台的人工抗原呈递细胞能有效模拟人抗原呈递细胞，诱导T淋巴细胞特异性杀伤白血病细胞，为白血病的免疫治疗提供了一种新的途径。
- 毛汉文刘文励周剑锋耿哲黄伟
- 关键词：抗原呈递细胞T淋巴细胞流式细胞术
- 多发性骨髓瘤原代细胞异种移植小鼠模型的建立
- 2012年
- 目的利用人多发性骨髓瘤（MM）原代细胞在非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠中建立人MM异种移植模型。方法将2例MM终末期患者骨髓或外周血单个核细胞（MNC）悬液通过尾静脉分别输注给3只NOD／SCID小鼠。每周称量体重，移植2周后以流式细胞术（FCM）检测小鼠外周血中CD45＋细胞百分比。当小鼠出现苍白、竖毛、精神萎靡或体重下降20％时，取小鼠脾脏及肝脏行组织病理学检查，FCM检测外周血、骨髓、脾脏和淋巴结细胞悬液中CD45＋CD38＋细胞的百分比。结果来源于病例1和病例2的MNC移植小鼠的平均体重分别自输注MM原代细胞第7周和第5周后开始下降；以对照组小鼠的单个核细胞做阴性设门，分别于移植（26±4）d和（16±4）d后，在病例1细胞来源组和病例2细胞来源组的小鼠外周血中检测到人CD45＋CD38＋细胞，且其比例随时间延长而逐渐增高，实验终点时分别达（16．2±3．0）％和（31．3±3．5）％；组织病理大体形态观察发现小鼠脾脏、肝脏及淋巴结均不同程度增大，镜下可见典型的恶性浆细胞浸润；FCM检查骨髓、淋巴结和脾脏细胞表面标志，均发现一群人源CD45＋CD38＋细胞。结论成功建立了人MM原代细胞异种移植的免疫缺陷小鼠模型。
- 刘春艳张丽王娜王迪耿哲徐丹梅李春蕊周剑峰黄亮
- 关键词：多发性骨髓瘤原代细胞NOD/SCID小鼠异种移植模型
- 流式细胞免疫分型联合PCR检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断与鉴别诊断中的应用被引量：1
- 2011年
- 背景与目的:淋巴增殖性疾病是一组病理形态、免疫表型、临床特征高度异质性的疾病。本文旨在评价流式细胞免疫分型联合聚合酶链反应(PCR)检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用价值。方法:分离79例拟诊淋巴增殖性疾病患者的新鲜病理标本(淋巴结、脾脏、胃活检组织和肝穿组织),流式细胞术分析细胞的免疫表型特征;同时采用BIOMED-2多重PCR分析组织的抗原受体基因重排状况及其克隆来源;并与病理诊断及免疫组织化学结果进行比对。结果:患者最终确诊为非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma,NHL)37例(46.8%),霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma,HL)3例(3.8%),淋巴组织良性病变34例(43.0%),恶性肿瘤淋巴结转移4例(5.1%)。在19例B-NHL确诊患者中,流式免疫分型和抗原受体基因重排诊断符合率均为94.7%(18例):18例T-NHL确诊患者中,流式免疫分型和抗原受体基因重排诊断符合率分别为72.2%(13例)和50%(9例);在34例淋巴组织良性病变的患者中,流式细胞免疫分型虽未见单克隆幼稚细胞,但有7例(19.4%)抗原受体基因重排呈单克隆性;在3例HL确诊患者中,流式免疫分型未能检测出来,抗原受体基因重排均为多克隆性;4例恶性肿瘤转移患者中(3例转移浸润淋巴结,1例转移浸润肝脏),流式细胞免疫分型均检测到大量异常幼稚细胞,其中3例无特殊抗体标记,另外1例表达幼稚髓系标记;抗原受体基因重排均为多克隆性。结论:应用流式细胞免疫分型联合抗原受体基因重排分析,对于淋巴组织良、恶性增殖的鉴别和不同类型恶性淋巴瘤的诊断,具有很好的辅助价值。
- 耿哲黄亮王迪熊婕朱莉李春蕊周剑峰
- 关键词：淋巴增殖性疾病聚合酶链反应
- 外科手术联合抗真菌药物治疗造血干细胞移植后侵袭性肺曲霉病一例
- 2009年
- 近年来，造血干细胞移植（HSCT）已成为治疗恶性血液病的一种有效方法，但移植后的侵袭性真菌感染（IFI），尤其是侵袭性肺部真菌感染（IPFI）的发病率明显上升，逐渐成为影响移植疗效、造成患者死亡的重要因素之一。我科对1例重型再生障碍性贫血患者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后发生的侵袭性肺曲霉病（IPA）进行了外科手术联合抗真菌药物治疗，获得了成功。报道如下。
- 肖毅张义成张东华耿哲周剑峰孙汉英刘文励
- 关键词：抗真菌药物治疗侵袭性肺曲霉病移植后侵袭性肺部真菌感染再生障碍性贫血患者侵袭性真菌感染
- NPM1基因突变的急性髓系白血病免疫表型研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究伴有NPM1基因突变的急性髓系白血病（AML）患者的免疫表型特征。方法采用流式细胞术检测237例初诊AML患者的免疫表型，并采用实时定量PCR方法对NPM1基因突变进行筛查，比较NPM1突变型和野生型患者的免疫表型差异。结果NPM1突变型患者占所有AML患者的19．0％（45／237），与野生型相比其CDmCDm、HLA—DR、CD15、CD19表达降低（均P〈0．05）。在正常核型AML患者中，NPM1突变率37．7％（40／106），突变型患者CD34、HLA—DR、CD15和CD7表达降低（均P〈0．05）。伴NPM1突变的正常核型AML患者的免疫表型在M1中表现为CD34、HLA-DR、CD7表达降低（均P〈0．05），在M2中为HLA-DR表达降低和CD，表达升高（均P〈0．05），在M5中为CD117表达降低（P〈0．05）。结论NPM1突变能对AML患者的免疫表型特征造成影响，不同FAB分型的AML患者免疫表型改变存在差异。
- 王迪肖敏朱莉耿哲商臻张娜刘亚楠周剑峰李春蕊
- 关键词：基因NPM1免疫表型分型
- 国内ELISA血清半乳甘露聚糖检测诊断侵袭性曲霉菌病价值的系统评价被引量：8
- 2011年
- 目的系统评价当前国内酶联免疫吸附试验(ELISA)检测曲霉半乳甘露聚糖诊断侵袭性曲霉菌病文献的质量,分析偏倚和变异产生的来源,以及不同阳性临界值的诊断效能。方法计算机检索CBM、CNKI、VIP和万方数据库(1994.1～2010.11),及手工查阅获得研究人血清半乳甘露聚糖检测诊断侵袭性曲霉菌病的中文文献。由两名研究者按纳入排除标准进行资料提取,采用诊断性试验质量评价标准评价纳入文献质量后,用Meta Disc 1.4软件进行数据分析。通过汇总敏感度、特异度、汇总似然比及汇总受试者工作特征曲线(SROC曲线)等统计指标并计算曲线下面积AUC,选取最佳的阳性临界值。结果从2658篇文献中筛选出20篇符合纳入标准的研究,按不同的阳性临界值分组,异质性检验提示无阈值效应,但存在其他原因导致的异质性,采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示:与其他组相比,CUT-OFF值取0.7组SROC曲线下面积AUC=0.9456,Q*=0.8846,其诊断真实性最好。结论 ELISA人半乳甘露聚糖检测用于临床诊断侵袭性曲霉菌感染,以单次0.7为折点对早期诊断很有意义,有利于降低高危病人曲霉感染病死率。
- 耿哲叶丛肖毅王迪黄亮李春蕊周剑峰
- 关键词：半乳甘露聚糖侵袭性曲霉菌病
- BEAM方案预处理行自体外周血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤被引量：6
- 2008年
- 背景与目的:自体外周血干细胞移植(autologous peripheral blood stem-cell transplantation, APBSCT)是目前治疗恶性淋巴瘤(ML)的主要方法之一,预处理是APBSCT的重要环节,选择高效低毒的预处理方案能有效提高ML治愈率。本研究探讨BEAM方案预处理行APBSCT治疗ML的方法和疗效。方法:对22例ML患者进行APBSCT,17例患者采用经典的BEAM方案:卡莫司汀300mg/m2·d-1×1d(—6d),依托泊苷200mg/m2·d-1×4d(-5d～-2d),阿糖胞苷400mg/m2·d-1×4d(-5d～-2d),马法兰140mg/m2·d-1×1d(-1d)。5例患者在经典BEAM方案基础上加用去甲氧柔红霉素20～40mg,以增强预处理疗效。结果:除1例患者在回输外周血干细胞后的第7天死于多器官功能衰竭以外,其余患者移植后均获得造血功能重建,移植后外周血中性粒细胞绝对计数(ANC)≥0.5×109/L及血小板≥20×109/L的时间分别为(11.4±4.4)d和(15.6±3.8)d。中位随访时间433(7～1410)d,13例患者无病生存,2年预计总生存率为(68.2±3.3)%,2年预计无病生存率(DFS)为(59.1±3.2)%。移植前完全缓解组与移植前未完全缓解组(含部分缓解、复发、进展状态)患者之间的2年总生存率分别为(91.6±3.1)%和(40.2±4.2)%,DFS分别为(91.1±4.2)%和(20.2±4.6)%,两者均有显著性意义(P<0.001)。结论:BEAM方案为主的APBSCT治疗ML患者安全、高效,能提高患者的无病生存期,移植前尽量使患者达完全缓解,能够提高移植的成功率。
- 肖毅耿哲张义成张东华周剑峰孙汉英刘文励
- 关键词：自体外周血干细胞移植恶性淋巴瘤
- 人工抗原呈递细胞复合物体外诱导特异性T淋巴细胞活化的研究被引量：1
- 2008年
- 本研究旨在以人工抗原呈递细胞(artificial antigen-presenting cells,aAPCs)体外模拟树突状细胞生物学功能,探讨诱导特异性T淋巴细胞活化、增殖的作用。以磁性微珠为载体,选取慢性髓系白血病特异性抗原CML28作为目标抗原肽,通过抗原表位预测软件获取CML28表位序列(Vltfaedsv),并以该抗原表位与MHC分子(HLA-A2-Ig)偶联,作为第一信号分子,B7-1分子作为第二信号分子,将两种信号分子同时负载于磁珠表面,构建人工APC复合体;取HLA-A2+的健康骨髓捐赠者骨髓单个核细胞,以磁珠分选出CD8+T淋巴细胞并与人工APC复合体系统共培养。培养过程中加入羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(5,6-carboxylfluorescin diacetate succinimidylester,CFSE),并以此检测T细胞增殖,用流式细胞仪检测特异性T细胞增殖程度。结果发现:实验组中CML28-特异性T细胞增殖程度明显增高,实验组平均值为(17.34±0.35)%,对照组平均值为(2.25±0.43)%,两者比较差异显著(p<0.01)。结论:人工APC复合体系统在体外能模拟人体抗原呈递细胞,刺激CD8+T特异性淋巴细胞活化、增殖。
- 毛汉文刘文励周剑锋耿哲黄伟
- 关键词：特异性T淋巴细胞树突状细胞慢性髓系白血病
- BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用被引量：4
- 2009年
- 目的建立敏感而有效的检测免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排的方法，并探讨在淋巴增殖性疾病诊断和鉴别中的作用。方法采用BIOMED-2多重聚合酶链反应，检测来自54例淋巴增殖性疾病患者的58份淋巴组织标本，分析抗原受体基因重排状况及其克隆来源。结果在88．0％（25份标本中22份）B细胞淋巴瘤／白血病和53．3％（15份标本中8份）T细胞淋巴瘤中检出Ig／TCR呈单克隆重排；在17例淋巴组织非恶性增殖患者的病理活检标本中，14例（82．4％）呈多克隆重排；在合格的57份标本中有44份（77．2％）的结果与最终诊断相符。联合检测Igk和TCR8并未提高Ig／TCR单克隆重排的检出率，但可能有助于Igk^＋和TCR8^＋淋巴瘤的诊断。结论对于分析淋巴增殖性疾病，尤其是不典型病例的克隆来源状况，BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基因重排是迅速、敏感而可靠的方法。
- 黄亮熊婕耿哲柯昌庶刘艳玲黄梅李登举肖毅汤屹孟凡凯邓金牛孙汉英刘文励周剑峰
- 关键词：淋巴组织增殖性疾病克隆分析基因重排聚合酶链反应
- 急性白血病患者造血干细胞P-选择素表达的研究
- 2011年
- 目的研究急性白血病（AL）患者骨髓白血病干细胞表面分子P-选择素（CD62P）的表达情况及其临床意义。方法采用流式细胞术（FCM）检测56例初治AL患者骨髓CD62P的表达情况，以15例健康成年人骨髓标本为对照。结果38例急性髓系白血病（AML）患者干细胞（CD45^＋CD34^＋CD38^-）中CD62P平均表达水平为（6．72±7．64）％，12例急性B淋巴细胞自血病（B—ALL）患者干细胞（CD45^＋CD34^＋4CD19^＋）为（3．46±2．51）％，6例急性T淋巴细胞白血病（T—ALL）患者干细胞（CD45^＋CD34^＋CD7^＋）为（6．23±4．95）％，均明显高于健康对照组[（1．04±1．23）％]（t值分别为2．847、3．284、3．091，P〈0．01）。经过正规方案治疗后，完全缓解组患者CD62P表达与健康对照差异无统计学意义（6=0．397，P〉0．05）。另外CD62P^＋的AML及T-ALL患者白细胞计数、血红蛋白及血小板计数均明显高于CD62P^-患者（t值分别为4．153、8．095、8．289、7．235、8．692、9．832，P〈0．05）；而CD62P^＋与CD62P^-的B—ALL患者无明显差异（t值分别为0．340、1．142、0．019，P〉0．05）。结论CD62P是血小板活化的标志物之一，在不同类型的AL中有不同程度的表达。AL骨髓造血干细胞中CD62P可能作为白血病造血干细胞的标志，以及临床疗效观察预后判断的指标之一。
- 肖敏吴颖杨漾王迪耿哲周剑峰李春蕊
- 关键词：P-选择素骨髓祖代细胞流式细胞术
