翟玮玮
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 供职机构：蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金安徽省蚌埠市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒介导RNA干扰沉默Fas基因在脐带间充质干细胞中的表达被引量：10
- 2014年
- 目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法以人Fas基因mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获得重组慢病毒,通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染UCMSCs,应用Real time-PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况。结果经酶切以及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×108TU/ml。Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas表达水平较对照组显著降低。结论慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达。
- 王露翟玮玮杨向荣王芳李见张强李玉云
- 关键词：慢病毒SIRNAFAS脐带间充质干细胞
- 三七总皂苷对K562细胞增殖、凋亡及周期的影响及机制被引量：9
- 2015年
- 目的 研究三七总皂苷（PNS）对K562细胞增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法采用MTT法检测PNS对K562细胞增殖的影响；AO／EB双荧光染色法及Annexinv-FITc／PI双染色法观察细胞凋亡及死亡状况；流式细胞术检测K562细胞的周期变化；RT-PCR检测mTOR信号通路主要分子mRNA的表达变化；Westernblot检测cleavedcaspase-3蛋白、cyclinD1蛋白及mTOR信号通路主要蛋白及磷酸化蛋白的表达量变化。结果100—800rtg／mL的PNS作用于K562细胞后能够抑制细胞增殖。PNS能够上调cleavedcaspase-3蛋白表达，促使K562细胞发生凋亡。并且下调cyclinD1蛋白表达，促使K562细胞阻滞在G0/G1期。同时，PNS能够抑制K562细胞mTORmRNA表达，降低mTOR蛋白和磷酸化蛋白p-mTOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr229／389）及P-4E-BP1（Thr37／46）的表达，从而抑制mTOR信号通路活性。结论PNS对体外培养K562细胞有抑制增殖，促进凋亡，使其发生周期阻滞的作用。其机制可能与PNS抑制mTOR信号通路活性、上调cleavedcaspase．3蛋白表达及抑制cyclinD1蛋白表达有关。
- 李玉云翟玮玮杨向荣丁娟阚立新
- 关键词：三七总皂苷K562细胞增殖凋亡周期
- IDO基因重组慢病毒载体构建及其转染hUCMSCs细胞的实验研究
- 2013年
- 目的构建共同表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体,探讨其在人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)中的表达,为下一步利用高表达IDO的hUCMSCs移植治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法将IDO基因克隆至慢病毒pGC-FU-EGFP表达载体中,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。重组慢病毒表达载体质粒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;制备携带IDO基因的慢病毒Lentivirus-IDO,并测定重组慢病毒的滴度。用重组慢病毒以最佳MOI值感染hUCM-SCs作为实验组,以空载体转染的hUCMSCs(空载体组)及未转染的hUCMSCs(未转染组)作为对照,应用RT-PCR及Western blot法分别检测细胞中IDO mRNA及IDO蛋白水平的表达情况。结果经PCR及基因测序鉴定pGC-FU-EGFP-IDO重组慢病毒表达载体构建成功,包装慢病毒Lentivirus-IDO滴度为2×108 TU/mL。通过EGFP表达的阳性细胞数筛选其最适MOI为30,此时对细胞的转染效率可达到80%以上。RT-PCR检测显示实验组IDO mRNA表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性;Western blot检测示实验组细胞内IDO蛋白表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性。结论成功构建了人IDO基因的重组慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-IDO能有效感染hUCMSCs,IDO蛋白可在hUCMSCs中长期、稳定表达。
- 李玉云李见王露翟玮玮吴正中张强
- 关键词：再生障碍性贫血人脐带间充质干细胞绿色荧光蛋白慢病毒载体
- 人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装被引量：1
- 2015年
- 目的:构建人凋亡相关因子(Fas)基因短发夹RNA慢病毒载体,实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达。方法:根据Fas基因mRNA序列,设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列,合成、退火形成双链DNA片段,与经过DNA内切酶Bam HⅠ、EcoRⅠ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞,对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及比对分析。通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。结果:经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜观察证明病毒转入293T细胞,感染效率>90%,并获得高滴度的慢病毒载体,病毒滴度为3×108TU/ml。结论:成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体,为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考。
- 王露李见翟玮玮李玉云
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体293T细胞
- 低相对分子质量肝素对人肝癌细胞生长的影响及机制被引量：3
- 2014年
- 目的探讨低相对分子质量肝素(LMWH)对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721增殖、细胞周期分布及周期调控相关基因Skp2和c-Myc表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,经不同浓度LMWH作用不同时间后,MTT比色法检测细胞存活和生长情况。将对照组和LMWH处理组(400、800 IU/mL)细胞培养36 h后,流式细胞术检测细胞周期分布情况;RT-PCR检测细胞Skp2、c-Myc mRNA表达的变化;Western blotting检测Skp2、c-Myc蛋白表达的变化。结果与对照组相比,经LMWH作用后SMMC-7721细胞的生长受到抑制,且在一定范围内呈药物浓度和时间依赖关系;细胞周期分布发生变化,随LMWH剂量增加,S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著上升(P<0.05);同时,Skp2、c-Myc的mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论 LMWH可抑制SMMC-7721细胞的生长,其机制可能与降低Skp2、c-Myc的表达,阻滞细胞于G0/G1期,从而降低细胞增殖指数有关。
- 于北凯程龙翟玮玮史维维武文娟
- 关键词：低相对分子质量肝素肝癌增殖细胞周期
- 三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）对体外培养K562细胞m TOR信号通路相关分子表达及活性的影响。方法不同浓度的PNS（50~800μg/m L）干预体外培养K562细胞24~72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测m TOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测m TOR、p70S6K、4E-BP1及p-m TOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,浓度为100~800μg/m L的PNS能够抑制K562细胞增殖（P〈0.05）,促进K562细胞凋亡及死亡（P〈0.05）,PNS对K562细胞72 h的IC50为（229.07±2.36）μg/m L;100、200、400μg/m L PNS作用于K562细胞72 h后m TOR蛋白表达量及mRNA表达量降低（P〈0.05）,且磷酸化蛋白p-m TOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）表达水平也随着药物浓度的增加而降低（P〈0.05）。结论 PNS能够抑制K562细胞m TOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一。
- 翟玮玮李玉云杨向荣于北凯王露李见
- 关键词：三七总皂苷K562细胞M
