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王玉臣: 作品数：10 被引量：36H指数：3; 供职机构：贵州省农业生物技术重点实验室更多>>; 发文基金：贵州省农业科学院专项资金项目贵州省科学技术基金贵州省科技计划项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

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冠突散囊菌转录因子stf1基因的克隆及其表达分析被引量：5: 2015年; 利用RACE技术获得了冠突散囊菌stf1基因的全长DNA序列。该序列全长3 029bp,开放阅读框长度为2 664bp,从114–2 908bp,在253bp处含有一个131bp的内含子,预测编码887个氨基酸。同源分析结果表明该基因与Snd1/p100转录因子同源。应用相对定量SYBR Green I荧光定量PCR技术对stf1基因在不同发育时期的表达量的差异进行了检测。结果表明,这个基因在子囊孢子时期的表达量最高,在分生孢子时期的表达量最低,相比子囊孢子时期下降了1倍。为深入研究冠突散囊菌的产孢调控机制奠定了一定的基础。; 谭玉梅王玉臣刘永翔桑石磊刘作易; 关键词：冠突散囊菌转录因子基因表达

根癌土壤杆菌介导棒形青霉的遗传转化: 2015年; 为实验室棒形青霉的功能基因研究奠定基础,采用根癌土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化方法,以棒形青霉的分生孢子为受体,p DHt-sk-hyg为双元载体,成功实现棒形青霉的遗传转化。结果表明：棒形青霉对潮霉素B比较敏感,30μg/m L就可以抑制其生长;遗传转化的效率为70-90个转化子/106个分生孢子,连续转接5代能够稳定遗传;转化子的PCR检测表明,潮霉素磷酸转移酶标记基因已整合到棒形青霉的基因组中,转化子的遗传表现稳定。; 孙成龙刘永翔任锡毅王玉臣刘作易; 关键词：根癌农杆菌

曲霉生长发育相关基因及分子调控机制的研究进展: 2016年; 随着分子生物学,基因组学和生物信息学等的快速发展,近年来模式菌株构巢曲霉和其他曲霉生长发育的相关基因及分子机制研究逐步深入。为曲霉(Aspergillus)生长发育分子生物学研究提供参考,对曲霉的应答环境条件光、营养和渗透压、参与交配过程、信号传导通路、转录因子及其他调节蛋白、内源性生理学过程、有性发育晚期产生子囊孢子过程等7个方面生长发育的相关基因及分子机制的研究进行了综述。; 余春芳王玉臣谭玉梅刘永翔吴文琴; 关键词：曲霉基因敲除基因超表达

谢瓦氏曲霉间型变种flbA基因cDNA的全长克隆及序列分析被引量：10: 2013年; 为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中flbA基因的结构及其与有性发育的关系,根据FlbA氨基酸的保守序列设计简并引物,利用RT-PCR、RACE方法从谢瓦氏曲霉间型变种的总RNA中扩增出flbA基因的cDNA序列。该序列全长3060 bp,包含2295bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码一个由764个氨基酸组成的蛋白,该蛋白分子量为83 181.19,理论等电点为6.31,为不稳定的亲水蛋白。序列同源性为:该基因与烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的发育调控子flbA相似度,最高为77%,其编码的氨基酸含有一个RGS(Regulator of G protein Singaling)和两个DEP(dishevelled,Egl-10,pleckstrin)保守域,与Aspergillus其他种的FlbA蛋白保守域一致。; 王玉臣谭玉梅刘永翔刘作易

茯砖茶“金花菌”vcx基因克隆及表达分析被引量：1: 2017年; 茯砖茶是一种紧压黑茶,冠突曲霉是茯砖茶发花阶段的主要微生物,其有性发育产生闭囊壳又名"金花菌",其数量和质量常用来判断茯砖茶的品质好坏。冠突曲霉可以用Na Cl来控制其产有性孢子及无性孢子,为了研究这一特殊产孢机理,及钙信号和液泡在这产孢过程中的作用。通过克隆冠突曲霉钙信号途径中的液泡上钙氢交换子vcx基因,并对这一基因进行结构和表达分析。结果表示:冠突曲霉中的vcx基因编码区1 326 bp,不含内含子,预测编码441个氨基酸,不含信号肽,是一个疏水蛋白,含有11个跨膜结构,符合钙氢交换蛋白的基本结构。通过对其在冠突曲霉的有性、无性、菌丝各生长阶段的表达量进行测定,结果显示:vcx基因对其发育产生正调控,可能参与了冠突曲霉的无性产孢及盐压力响应过程。实验结果不仅为该蛋白的后续研究提供了条件,而且为钙信号调控丝状真菌在盐压力应答下的产孢机制奠定基础。; 任秀秀谭玉梅谭玉梅王玉臣王玉臣刘永翔

冠突曲霉钙调素cam基因的克隆及表达分析被引量：1: 2017年; 冠突曲霉是茯砖茶发花阶段的主要微生物,其在Na Cl作为渗透压调节下分别进入有性产孢和无性产孢两个不同的世代,为了考查钙信号途径在其特殊产孢过程中的作用,通过克隆冠突曲霉钙信号调控的关键基因钙调素cam基因,并对这一基因进行结构和表达分析。结果表示:冠突曲霉中的cam基因全长924 bp,开放阅读框为450 bp,含6个内含子,预测编码149个氨基酸。cam参与了冠突曲霉的产孢及盐压力响应过程,cam基因对其无性发育产生正调控。实验结果为钙信号调控丝状真菌盐压力应答下的产孢机制研究奠定基础。; 任秀秀余芳余芳谭玉梅刘永翔刘永翔王玉臣; 关键词：钙调素基因表达

贵州地区茯砖茶“金花菌”的分离和分子鉴定被引量：19: 2017年; 本研究对贵州地区茯砖茶中的"金花菌"进行了分离鉴定。通过PCR扩增及测序技术获得转录间隔区序列及部分核糖体大亚基(ITS+LSU)、β-微管蛋白(β-tubulin)、钙调蛋白(Ca M)和RNA聚合酶Ⅱ(RPB2)4个基因的序列,然后构建多基因系统树,并对其形态特征进行观察,将其鉴定为冠突曲霉Aspergillus cristatus。; 谭玉梅王亚萍葛永怡任秀秀王玉臣刘作易; 关键词：冠突散囊菌系统学

结球白菜COR基因克隆及序列分析被引量：1: 2014年; 为了解结球白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)COR基因结构特征,设计1对保守简并引物,利用RT-PCR和普通PCR方法扩增COR基因。结果表明:获得冷诱导结球白菜COR基因的编码区cDNA。该基因命名为BpCOR,预测编码1个由142个氨基酸组成的理论分子量为14.82kD的蛋白。BpCOR蛋白与十字花科其他植物COR蛋白高度同源,具有很高的亲水性,且预测能形成α-螺旋-环-螺旋的超二级结构。; 黄永会黄永会朱莉莎王玉臣; 关键词：结球白菜基因克隆

赤散囊菌MAPKs超家族的鉴定及分析: 2016年; 本研究以赤散囊菌Eurotium rubrum全基因组序列为对象,利用HMMER软件构建隐马尔可夫模型(hidden markov models,HMM)结合BLAST的方法鉴定了促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)超家族。通过构建系统发育树对鉴定蛋白进行分析,并利用MEME软件进行了保守性基序的预测及活性位点注释。分析结果表明,赤散囊菌基因组包含了4个MAPK蛋白,分别属于Hog1-type、Mpk C-type、Slt2-type和Fus3/Kss1-type类型;3个MAPK kinase(MAPKK)蛋白,分别属于MKK1-type、Pbs2-type和Ste7-type类型;3个MAPK kinase kinase(MAPKKK)蛋白,分别属于BCK1-type、Ste11-type和Ssk22-type类型。保守性基序分析及注释结果表明,MAPKs超家族蛋白都包含了蛋白激酶活性位点"-D[L/I/V]K-"以及保守性的ATP-binding标签序列。MAPK与MAPKK蛋白分别包含了"-Tx Y-"和"-SD[I/V]WS-"磷酸化位点,且MAPK蛋白还包含一个保守性的common docking基序(CD motif),而MAPKKK蛋白则包含了一个功能不明的保守性基序,其一致性序列为"-GTPYWMAPEV-"。研究结果为揭示MAPKs信号途径在赤散囊菌中参与调控的生物学过程奠定了基础。; 王玉臣谭玉梅陈丽刘建魁刘永翔刘作易

冠突散囊菌有性产孢相关基因的生物信息学分析被引量：3: 2014年; 为研究nsdD、esdC及flbA等基因在冠突散囊菌(Eurotium cristatum)中的功能,通过Augustus软件对这3个基因进行重新预测,并利用ExPASy网站中的生物信息分析工具及多序列比对构建系统发育树对这3个基因编码蛋白的性质、结构及其功能进行推测。结果表明:nsdD、esdC及flbA分别编码含有430个、274个和764个氨基酸的蛋白。3个蛋白均不具有信号肽,推测为非分泌蛋白;且均不具有跨膜结构,亚细胞定位发现NsdD和EsdC位于细胞核内,而FlbA可能位于线粒体上;3个蛋白在曲霉中均比较保守。nsdD、esdC和flbA 3个基因均参与冠突散囊菌有性发育的调控。; 王玉臣谭玉梅刘作易刘永翔; 关键词：冠突散囊菌 NSDD 生物信息学

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