王灿蔚
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院免疫学教研室更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 含miR-193b前体基因的重组腺病毒感染K562细胞可抑制其增殖
- 2015年
- 目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacI线性化后转入HEK293细胞包装、扩增。倍比稀释法测定病毒滴度。实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力。结果pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组。结论K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖。
- 舒燕齐杰玉王灿蔚于淑静陶崑
- 关键词：腺病毒K562细胞
- Pre-miR-10a重组腺病毒质粒的构建及其在K562细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平。方法化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183感受态细胞,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,经4轮扩增后检测病毒滴度。收集病毒后,以100 MOI感染K562细胞,RT-PCR法检测miR-10a基因的转录水平。结果重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a经PacⅠ酶切,证明带有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中,4轮扩增后腺病毒滴度为1.5×1011pfu/ml,可高效感染K562细胞,感染效率达90%以上;重组腺病毒Ad-pre-miR-10a感染的K562细胞中miR-10a基因转录水平明显升高,过表达率为150.82%。结论已成功构建重组腺病毒表达质粒pAd-pre-miR-10a,并可在K562细胞中高效表达,为进一步从体内和体外水平研究其抗白血病效应奠定了基础。
- 齐杰玉陶崑王灿蔚李秋红邓一平
- 关键词：腺病毒科K562细胞基因表达
- RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应
- 目的： 通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因，构建pSilencer4.1-shRNA-Shp2重组质粒，转染慢性髓系白血病K562细胞株，探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制效应，为后续研究其作用机...
- 王灿蔚
- 关键词：慢性粒细胞白血病RNA干扰技术K562细胞生物学效应增殖抑制
- MicroRNA-193b对K562细胞bcr/abl表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的用Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒感染K562细胞,探讨miR-193b在细胞中过表达对bcr/abl表达的影响。方法将前期构建的Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒感染K562细胞后,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-193b的表达;qRT-PCR检测bcr/abl融合基因的表达;Western blot检测BCR/ABL融合蛋白的表达;CCK-8检测K562细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)检测K562细胞凋亡率。结果与对照比较,K562细胞感染Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒后,miR-193b表达明显升高;bcr/abl融合基因及BCR/ABL融合蛋白表达明显下调;K562细胞增殖能力明显降低(P<0.05),凋亡水平明显升高(P<0.05)。结论 miR-193b可下调bcr/abl表达,抑制K562细胞的生物学效应,过表达miR-193b能作为治疗CML的有效手段。
- 舒燕齐杰玉王灿蔚于淑静陶崑
- 关键词：K562细胞BCR/ABL
- Pre-miR-10a重组腺病毒载体对K562细胞增殖的抑制作用
- 2012年
- 目的:观察在K562细胞高表达miR-10a对细胞增殖及凋亡的影响。方法:用pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体感染K562细胞,采用RT-PCR检测感染后K562细胞中miR-10a和bcr/abl融合基因的表达水平,Western blot法检测BCR/ABL融合蛋白表达水平,MTT、流式细胞术(FCM)分别检测感染后K562细胞的增殖及凋亡。结果:与对照组相比,K562细胞在转染pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体后,其miR-10a表达水平明显升高、bcr/abl融合基因水平显著降低;BCR/ABL融合蛋白表达明显下调、K562细胞增殖活力被抑制、细胞凋亡增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体能明显抑制K562细胞的增殖、促进细胞凋亡。
- 齐杰玉陶崑王灿蔚李秋红邓一平
- 关键词：BCR/ABLK562细胞
- RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应被引量：3
- 2014年
- 通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率,探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明,该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒,转染K562细胞后,其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比,其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。
- 王灿蔚陶崑齐杰玉邓一平
- 关键词：BCRABLK562细胞
