杨丽超
- 作品数：17 被引量：15H指数：3
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- 十字花科黑腐病菌hrp基因致病功能分析被引量：1
- 2015年
- 通过对Xcc 8004菌株的hrp基因进行逐一敲除,系统研究单个hrp基因对Xcc致病性的贡献。结果表明,9个hrc(hypersensitive response and conserved)基因单独突变后在满身红萝卜上的致病性和在辣椒ECW-10R上激发HR的能力完全丧失;9个hrp基因中,hrpW突变后在辣椒ECW-10R上仍能产生HR,满身红萝卜上致病性减弱,其余hrp基因突变后致病性和过敏反应均丧失;4个hpa(hrp associated protein)基因突变后,hpaA和hpaB突变体完全丧失在满身红萝卜上的毒性也不能在辣椒ECW-10R上引起HR,hpa1和hpaP突变后致病性和HR显著减弱。另外,通过RT-PCR对Xcc 8004 hrp基因簇的每个基因受hrpX和hrpG的调控情况进行分析,结果表明所有hrp基因在不同程度上都受到hrpG、hrpX的正向调控。
- 曾献莹李婉莲杨丽超蒋国凤王凛甘永亮阳丽艳姜伯乐
- 关键词：十字花科黑腐病菌HRP基因
- 十字花科黑腐病菌一个新的Ⅲ型效应物XC3176的鉴定被引量：1
- 2015年
- 【目的】在十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的致病因子中,III型分泌系统(Type III Secretion System,T3SS)是至关重要的致病系统,III型效应物通过III型分泌系统直接转运到寄主植物细胞内。本研究通过效应物水平转移的特征获得候选基因,旨在鉴定一个新的依赖于III型分泌的效应物。【方法】以缺失了N-端58个氨基酸的Avr Bs1作为报告系统构建效应物鉴定报告质粒p LJB3176,导入Δavr Bs1和Δhrc V,通过检测报告菌株在辣椒ECW-10R上的过敏反应来鉴定XC3176是否为III型效应物。构建XC3176融合GUS报告质粒p LGUS3176,导入野生菌株Xcc 8004、Δhrp G和Δhrp X,通过测定菌株GUS活性检测hrp G、hrp X对XC3176的调控作用。构建XC3176缺失突变体和互补菌株,通过剪叶法接种检测XC3176对Xcc 8004致病性的影响。【结果】XC3176融合Avr Bs1报告菌株在非寄主辣椒ECW-10R上能引发过敏反应,GUS活性检测显示Δhrp G/p LGUS3176、Δhrp X/p LGUS3176比8004/p LGUS3176的GUS酶活显著降低,致病性检测显示突变体Δ3176与野生型Xcc 8004相比在寄主满身红萝卜上的病斑长度有显著减少,互补菌株C3176的病斑长度能补回到野生型水平。【结论】XC3176是依赖于hrc V分泌的III型效应物,hrp G、hrp X正调控XC3176,XC3176与Xcc致病相关。
- 杨丽超苏华杨凤蹇华哗周敏姜伟姜伯乐
- 关键词：十字花科黑腐病菌
- 十字花科黑腐病菌hrpW基因的功能鉴定
- 2016年
- 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)8004菌株基因组中XC_3023注释为Hrp W蛋白基因。本研究利用生物信息学和分子生物学技术,对hrp W基因进行功能鉴定。生物信息学分析发现Hrp W蛋白具有Harpin特征:含有果胶裂解酶结构域,为酸性蛋白,富含甘氨酸和丝氨酸。转录分析结果发现hrp W基因自身有一较弱的启动子,受MMX基本培养基诱导表达。共转录分析结果表明hrp W基因与上游hrp E、hpa B基因共同转录。Western blotting和转运分析结果显示,Hrp W蛋白受Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)依赖分泌,但不转运。植株试验结果发现纯化的Hrp W蛋白能在烟草上诱发过敏反应(hypersensitive reaction,HR)。这些结果揭示XC_3023编码蛋白Hrp W为Ⅲ型分泌系统分泌的Harpin蛋白。
- 王凛李婉莲曾献莹杨丽超周敏刘平磊杨超梁晓夏姜伯乐
- 关键词：十字花科黑腐病菌HARPIN
- 十字花科黑腐病菌的XC1193基因与致病相关
- 2018年
- 十字花科黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc）是一种重要植物病原细菌,在全球范围内侵染十字花科植物引起黑腐病,其σ因子在基因表达中起到重要调节作用。XC1193基因在Xcc 8004菌株编码一个σ-70因子,为进一步研究该σ因子在Xcc中的调控作用,利用自杀质粒p K18mobsac B构建了XC1193基因的缺失突变体DM1193。与野生型菌株的比较发现,XC1193基因突变不影响菌体在丰富培养基和基本培养基上的生长;突变体的胞外蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶等生化表型也与野生型一致;植株实验表明XC1193突变不影响过敏反应。采用剪叶接种法进行致病性检测,突变体致病力与野生型一致。而采用喷雾接种法,突变体致病力显著降低,互补菌株致病力恢复至野生型水平。结果表明,该σ因子在十字花科黑腐病菌致病过程中发挥作用,并与Xcc侵染寄主的早期事件有关。
- 王凛阳丽艳杨丽超甘永亮姜伯乐
- 关键词：十字花科黑腐病菌Σ因子
- 十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物基因avrAC_(Xcc8004)推测的启动子区被引量：5
- 2014年
- 【目的】十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc),能侵染所有十字花科植物,引起黑腐病。Xcc通过III型分泌系统(Type III Secretion System,T3SS)将III型效应物(T3SS effector,T3SE)蛋白直接转运到植物细胞内,T3SEs对于病原菌致病性至关重要。许多已鉴定的T3SEs基因的启动子区都存在植物诱导启动子盒(Plant-inducible promoter,PIP-box)和-10 box,但PIP-box及-10 box与经典的启动子-10区及-35区之间的关系如何未见报道,-10 box的序列保守性如何也未见报道。本研究旨在对T3SE基因avrAC Xcc8004推测的启动子区进行研究。【方法】首先,通过5'RACE确定其转录起始位点,接着用Fusion PCR对-10 box TACGTT序列中倒数第二个碱基T进行点突变为A/C/G,即:TACGAT、TACGCT和TACGGT,构建GUS融合报告菌株,定量测定GUS酶活。【结果】5'RACE结果显示avrAC Xcc8004的转录起始位点为A,对比分析得到启动子的-35区位于PIP-box之后8 bp处,而-10区与-10 box重叠;avrAC Xcc8004启动子区的PIP-box和-35区、-10 box的整个模体为:TTCAC-N15-TTCGC-N8-TTGATG-N18-TACGTT。最后,GUS定量测定结果表明,突变为C时(TACGCT)的菌株的GUS酶活最高,突变为G时(TACGGT)的酶活增高最少。在ΔhrpX和ΔhrpG中的GUS酶活均比在Xcc 8004中有显著的降低。【结论】Xcc的T3SE基因PIP-box与-35区前后相衔,-10 box即-10区,-10 box对于avrAC Xcc8004的转录活性有较大的影响,-10 box突变前后avrAC Xcc8004均受HrpG和HrpX正向调控。
- 蒋国凤吴秋菊梁晓夏杨丽超阳丽艳王凛吴小建姜伯乐
- 关键词：BOX
- 一种脂蛋白编码基因的用途
- 本发明披露了一种脂蛋白编码基因的用途，经鉴定该基因与十字花科黑腐病病菌致病相关，故用于防治植物十字花科黑腐病病害。该基因是编码序列表中序列2所示蛋白质的如序列表中序列1所示的DNA序列。
- 姜伯乐何勇强唐纪良杨丽超王凛阳丽艳周乐杭小红
- 文献传递
- 一个用于鉴定十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物分泌与转运的报告质粒的构建
- 2014年
- 通过免疫检测的方法鉴定十字花科黑腐病菌(Xcc)Ⅲ型效应物的分泌和转运,将cyaA基因克隆至带有3×FLAG的pJXG载体上,构建带有3×FLAG和cyaA基因的报告质粒pJAA,并用已鉴定为Ⅲ型效应物的XC_1553启动子区信号区验证该报告质粒。将pJAA1553三亲导入Xcc 8004*和8004*△hrcV,然后通过Western blotting免疫检测XC_1553的分泌,结果在8004*/pJAA1553的胞外蛋白中检测到了XC_1553的分泌,而在8004*△hrcV/pJAA1553的胞外蛋白中没有检测到XC_1553的分泌。通过免疫反应定量检测8004*/pJAA1553和8004*△hrcV/pJAA1553侵染后植物体内的cAMP含量,结果发现8004*/pJAA1553侵染后植物体内的cAMP含量比8004*△hrcV/pJAA1553侵染后植物体内的cAMP含量高15倍。结果表明,报告质粒pJAA能够应用于鉴定十字花科黑腐病菌的Ⅲ型效应物。
- 成春燕杨威甘永亮蒋国凤杨丽超阳丽艳姜伯乐
- 关键词：十字花科黑腐病菌
- 一种脂蛋白编码基因的用途
- 本发明披露了一种脂蛋白编码基因的用途，经鉴定该基因与十字花科黑腐病病菌致病相关，故用于防治植物十字花科黑腐病病害。该基因是编码序列表中序列2所示蛋白质的如序列表中序列1所示的DNA序列。
- 姜伯乐何勇强唐纪良杨丽超王凛阳丽艳周乐杭小红
- 十字花科黑腐病菌N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶影响细胞分裂和致病性的研究
- 革兰氏阴性致病细菌进化了一系列不同的分泌系统，如跨越细胞内膜和外膜的Ⅱ型(T2SS)、Ⅲ型(T3SS)和Ⅳ型(T4SS)等分泌系统，这些分泌系统将致病因子转运至宿主细胞引起病害。细菌内外膜之间的周质空间含有严密的肽聚糖(...
- 杨丽超
- 关键词：十字花科黑腐病菌分泌系统细胞分裂肽聚糖
- 金属离子对十字花科黑腐病菌不同致病系统表达的影响
- 2015年
- 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原细菌,其通过不同的分泌系统将效应物蛋白或细胞毒素转运进真核宿主细胞产生病害,对农业生产造成巨大的经济损失。本研究利用GUS融合报告系统,考察了常见的几种不同金属离子(Zn2+,Mn2+,Ca2+,Fe2+)对Xcc 8004不同致病系统装置基因表达的影响。结果表明,在1滋mol/L^1 mmol/L浓度区间,Zn2+和Mn2+同时对Xcc域型分泌系统(T2SS)和芋型分泌系统(T3SS)有抑制作用;在大于0.01 mmol/L浓度时,Ca2+特异性抑制T3SS;Fe2+同时抑制T2SS、T3SS和郁型分泌系统(T4SS)装置基因的表达。金属离子Zn2+、Mn2+、Ca2+和Fe2+在不同浓度下对Xcc的致病系统均有抑制作用。本研究为分析病原细菌不同分泌系统响应金属离子的模式奠定了基础。
- 唐江涛王成周乐韦载娲付秋霞杨丽超梁晓夏姜伯乐
- 关键词：十字花科黑腐病菌金属离子
