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肠道病毒71型感染人横纹肌肉瘤细胞不同时期凋亡相关基因差异表达研究被引量：1: 2012年; 目的研究肠道病毒71型（EV71）感染人横纹肌肉瘤（RD）细胞后不同时期凋亡相关基因差异表达及信号通路转导机制。方法锥虫蓝染色观察EV71感染RD细胞的存活率，AnnexinV．FITC／PI双染色法检测病毒感染后凋亡细胞形态学及凋亡发生率，PCR芯片分析病毒感染RD细胞8h和20h后88个凋亡相关基因的表达情况。结果EV71（MOI=5）感染RD细胞8h后存活率显著下降。流式细胞仪检测显示病毒感染20h后早期凋亡及晚期凋亡细胞分别上升至18．0％和19．1％。PCR芯片检测88个凋亡相关基因，EV71感染8h后，除IFN-B1上调5．22倍外，ACIN1、Akt、Apaf1、caspase、CIDEB等47个基因发生明显下调。病毒感染20h后，FasL、CIMOL、TNF、caspase-10、caspase-3等28个基因发生2倍以上上调。结论EV71感染早期RD细胞凋亡相关基因表达下调与病毒凋亡抑制效应相关，而感染晚期病毒可激活Fas／FasL、TNF／TNFR死亡受体信号通路诱导细胞凋亡。同时宿主细胞也通过调节CIM0／CIMOL、NF—KB／RelA、P13K／Akt等信号通路途径抑制凋亡作用。; 李祥侯学伶彭宏君史梅姜庆波刘息平姚玉华何彩珍史伟峰; 关键词：肠道病毒71型 FASL CD40L

肠道病毒71型感染的人横纹肌肉瘤细胞差异基因表达研究: 目的：了解肠病毒71型(EV71)感染人横纹肌肉瘤(RD)细胞的凋亡机制.方法：采用Annexin V-FITC/PI标记并使用流式细胞仪检测,PCR芯片分别检测EV71感染RD细胞8h和20h后的84种凋亡基因的表达；...; 史伟峰李祥侯学伶彭宏君史梅姜庆波; 关键词：肠道病毒71型 FASL 细胞凋亡

逆转录-环介导等温扩增快速检测EV71病毒: 目的:建立一种检测肠道病毒71型（EV71）病毒快速、敏感的一步逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）方法。方法针对EV71病毒VP2基因特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其特异...; 史伟峰李坤石旦罗光华史梅李祥侯学伶; 文献传递

EV71感染横纹肌肉瘤细胞与MAPK信号通路分子基因差异表达的相关性被引量：2: 2012年; 目的探讨肠道病毒71型(EV71)感染横纹肌肉瘤(RD)细胞后丝裂原活化蛋白激酶(MARK)信号通路分子的变化及作用机制。方法按感染复数(MOI)=5的病毒量感染RD细胞,用台盼蓝染色观察不同时间的细胞存活率,annexin V-FITC/PI染色法检测凋亡细胞形态学变化,ELISA法检测感染后不同时间细胞因子(IL-4、IL-10和TNF-α)水平变化,PCR芯片技术检测感染后8 h和12 h MAPK信号通路相关基因的差异表达情况。结果台盼蓝染色结果显示,RD细胞存活率随EV71感染时间延长明显下降,感染组IL-4、IL-10和TNF-α浓度随感染时间延长明显增加,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。EV71感染RD细胞8 h时,88种MAPK相关基因中,FOS、JUN分别上调3.34和3.19倍,而IL-1A、IL-1B、MAP2K3、IRAK1、NGF、IL-4、MAP3K1、MAP3K10、MAP3K11、MAP3K14、MAPK3下调2～5倍。EV71感染RD细胞20 h时,ELK1、FGF1、FOS、JUN、IRAK1、NGF、IL4、MAP3K1、MAP3K10、MAP3K11、MAP3K14、MAPK3、PIK3CG、STAT1和TNF明显上调。结论 EV71感染激活RD细胞MAPK信号通路,产生炎症细胞因子,与细胞凋亡有关。; 侯学伶李祥彭宏君史梅姜庆波刘息平季云姚玉华何彩珍史伟峰; 关键词：肠道病毒71型横纹肌肉瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶

肠道病毒71型体外感染人树突状细胞后启动免疫应答反应的研究被引量：8: 2014年; 目的研究肠道病毒71型（EV71）体外感染人树突状细胞（DCs）后启动免疫应答反应的机制，为探讨EV71感染及宿主免疫应答提供理论依据。方法健康成人外周血单核细胞诱导衍生获得DCs，流式细胞术检测病毒感染前后DCs表面分子，PCR芯片分析DCs感染EV712h和8h后CD分子及细胞因子类基因差异表达，Luminex液相芯片技术检测感染组细胞上清液中细胞因子含量，混合淋巴细胞反应（MLR）检测病毒感染后的DCs对初始T细胞的刺激活性。结果EV71感染刺激后DCs的CD80和CD83表达率分别提高了8．2％和35．4％。PCR芯片显示EV71感染2h和8h后CD80、CD83、IL-1α、IL-6和ICAM-1基因表达显著上调2．08～5．49倍，而IL-18则下调5．12倍。与对照组相比，EV71感染Des组细胞上清液中IL-6和IL-12的含量明显升高（P〈0．05）。而MLR未观察到EV71感染的DCs刺激初始T细胞增殖现象。结论EV71感染能增加DCs活力，延长其存活时间，促使其活化、成熟并分泌细胞因子，启动宿主细胞相应的免疫应答。; 彭宏君侯学伶李祥张莉邓海峰李敏史梅姜庆波史伟峰; 关键词：肠道病毒属树突细胞细胞因子类

逆转录-环介导等温扩增快速检测EV71病毒被引量：1: 2012年; 目的建立一种检测肠道病毒71型(EV71)快速、敏感的一步逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)方法。方法针对EV71病毒VP2基因特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其特异性和灵敏度。结果通过GoldView染色和凝胶电泳均能观察到LAMP扩增产物的存在,且与柯萨奇病毒A16型(CA16)无交叉反应发生。所建立的RT-LAMP检测方法灵敏,最低检测限为1.0×102copies/mL。RT-LAMP检测的41份咽拭子标本中有27份出现EV71阳性反应,与荧光定量PCR结果一致。结论 RT-LAMP是一种快速、敏感、特异、准确的方法,适合用于基层医疗机构临床检测。; 李坤史伟峰石旦罗光华史梅李祥侯学伶; 关键词：肠道病毒71型

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李祥