李泉
- 作品数：17 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- A20和Caspase 3在异基因CD8^+T细胞致人脐静脉内皮细胞凋亡中的表达及意义
- 2008年
- 目的探讨异基因造血干细胞移植时,供体CD8+T细胞致受体人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中A20蛋白及Caspase3的表达及意义。方法采用密度梯度法分离人周围血单个核细胞,CD8+T细胞亚群阴性分选柱试剂盒分选出CD8+T细胞。HUVEC细胞株经过5ng/mlTNF-α处理后与CD8+T细胞进行混合培养。以AnnexinⅤ和PI双标后,流式细胞仪对HUVEC进行凋亡分析,用全波长荧光分光光度计测定凋亡相关蛋白Caspase3的活性。Westernblot法检测HUVEC中A20蛋白的表达。结果异基因CD8+T细胞在与HUVEC混合后可引起HUVEC凋亡,流式细胞仪检测显示24h时的早期凋亡率最高,达(83.6±0.42)%。而晚期凋亡相关蛋白Caspase3活性在48h时达高峰,荧光强度为(13.585±0.269),此后显著降低,与对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01)。A20蛋白的表达与HU-VEC的凋亡率呈负相关(r=-0.839,P<0.05)。结论体外供体CD8+T细胞致受体HUVEC凋亡过程中,信号蛋白Caspase3的激活介导了凋亡的发生,而A20可能对其起负调节作用。
- 韩红黎纬明邹萍董继华刘峥嵘李泉
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞凋亡CASPASE3
- 异基因CD8^＋T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制被引量：2
- 2009年
- 目的研究异基因CD8^＋T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法磁珠分选正常人外周血CD8^＋T淋巴细胞，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（FITC）试剂盒检测异基因CD8^＋T淋巴细胞作用后人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和人皮肤微血管内皮细胞（HDMEC）凋亡率，RT—PCR检测蛋白酶激活受体1（PAR-1）mRNA表达，Western印迹检测内皮细胞PAR-1、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3表达。结果HUVEC与HDMEC在基因和蛋白水平均有PAR-1表达。异基因CD8^＋T淋巴细胞作用24h和48h，HUVEC凋亡率分别为51．7％±4．1％和29．4％±3．3％，HDMEC凋亡率分别为28．9％±2．2％和15．2％±1．8％，均显著高于对照组（均P〈0．01）；SFLLRN（PAR-1激动剂）诱导两种内皮细胞凋亡的作用与异基因CD8^＋T淋巴细胞的差异无统计学意义（P〉0．05）。异基因CD8^＋T淋巴细胞作用后，HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达均高于对照组（均P〈0．05），30min时分别为对照组的9．8、6．3倍，Caspase-3裂解增加，峰值分别为对照组的5．1、4．3倍；SFLLRN作用后，HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达亦均高于对照组（均P〈0．05），30min时分别为对照组的9．8、6．3倍，Caspase-3裂解增加，峰值分别为对照组的5．7、2．9倍。JNK磷酸化无明显变化。PAR-1抗体和p38MAPK抑制剂（SB203580）可显著降低异基因CD8^＋T淋巴细胞诱导的内皮细胞凋亡（P〈0．01）。结论异基因CD8^＋T淋巴细胞通过PAR-1途径引起细胞内p38MAPK激活、Caspase-3裂解，从而诱导血管内皮细胞凋亡。
- 李泉张剑黎纬明邹萍
- 关键词：细胞凋亡内皮细胞T淋巴细胞P38MAPK
- 异基因T淋巴细胞诱导血管内皮细胞组织因子的表达被引量：1
- 2009年
- 背景:血管内皮细胞是移植物抗宿主病中异基因T淋巴细胞的重要靶组织,而血管内皮细胞损伤、活化后组织因子表达显著增高。因此血管内皮细胞组织因子表达可能在移植物抗宿主病引起的组织损伤中发挥重要作用。目的:探讨异基因T淋巴细胞能否诱导血管内皮细胞组织因子表达及其分子机制。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2008-03/10在华中科技大学同济医学院免疫学实验室完成。材料:人原代脐静脉内皮细胞来源于美国Sciencecell公司。方法:密度梯度离心法分离健康志愿者外周血单个核细胞,分别用结合CD4和CD8抗体的磁珠阳性分选CD4+T细胞和CD8+T淋巴细胞。脐静脉内皮细胞经PBS充分洗涤后,异基因CD4+和CD8+T淋巴细胞以10:1的比例加入脐静脉内皮细胞,以未与T淋巴细胞混合培养组为对照。将脐静脉内皮细胞分别与细胞通路阻滞剂—特异性Jun氨基末端激酶抑制剂、特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂、特异性细胞外信号调节激酶抑制剂提前温育1h,然后再与异基因CD4+和CD8+T淋巴细胞共培养,以未加入细胞通路阻滞剂为对照组。主要观察指标:实时定量PCR和流式细胞术检测异基因T淋巴细胞作用后脐静脉内皮细胞中组织因子在基因和蛋白水平的表达。Westernblot方法检测脐静脉内皮细胞中丝裂原活化蛋白激酶的表达。结果:异基因CD4+T淋巴细胞作用6,12,24h后,脐静脉内皮细胞膜表面组织因子表达率及mRNA表达水平较对照组显著增高(P<0.05)。异基因CD8+T淋巴细胞作用6,12,24h后,脐静脉内皮细胞膜表面组织因子表达率及mRNA表达水平较对照组亦显著增高(P<0.05)。异基因CD4+T淋巴细胞诱导12,24h的脐静脉内皮细胞膜表面组织因子阳性表达率显著高于异基因CD8+T淋巴细胞(P<0.05)。异基因T淋巴细胞作用后,脐静脉内皮细胞内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和Jun氨基末端激酶表达�
- 张剑李泉黎纬明邹萍
- 关键词：T淋巴细胞血管内皮细胞P38丝裂原活化蛋白激酶
- 供体T淋巴细胞和组织因子在GVHD作用中的研究
- ＜正＞目的:研究显示血管内皮细胞也是急性和慢性移植物抗宿主病中异基因T淋巴细胞的靶组织。大量的研究显示,内皮细胞活化、损伤后可高表达组织因子（TF）,其不仅是凝血-炎症网络的重要因子,而且还通过其细胞内转导信号介导炎症过...
- 李泉张剑黎纬明邹萍
- 文献传递
- MAPK和caspase-3在异基因CD8^+T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡中的作用被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨MAPK和caspase-3在异基因CD8+T细胞诱导血管内皮细胞凋亡中的作用。方法:免疫磁珠阳性分选异基因CD8+T细胞,AnnexinⅤ/FITC试剂盒检测异基因CD8+T细胞诱导的HUVECs和HD-MECs凋亡率,Western blotting检测血管内皮细胞内caspase-3、MAPK表达。观察SB203580(p38MAPK抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)、PD98059(ERK抑制剂)、Z-DEVD-FMK(caspase-3抑制剂)对内皮细胞凋亡的影响。结果:异基因CD8+T细胞作用24 h和48 h后,HUVECs凋亡率分别为41.7%±10.1%和29.4%±8.3%,HDMECs凋亡率分别为28.9%±7.2%和15.2%±4.8%,与对照组相比均具有显著差异(P<0.01)。异基因CD8+T细胞作用后,HUVECs和HDMECs内磷酸化p38MAPK表达、caspase-3裂解增强,而磷酸化JNK、ERK无明显变化。Z-DEVD-FMK和SB203580可显著抑制异基因CD8+T细胞诱导的HUVECs和HEMEC凋亡,并降低内皮细胞caspase-3表达。结论:p38MAPK和caspase-3介导了异基因CD8+T细胞诱导的血管内皮细胞凋亡。
- 李泉张剑黎纬明邹萍
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3P38MAPK细胞凋亡血管内皮细胞
- FLAG方案和IA方案对P-gp阳性和阴性急性髓细胞白血病细胞的作用
- 2009年
- 目的探讨FLAG和IA方案对P-gp阳性和阴性急性髓细胞白血病（AML）细胞增生抑制作用的优劣及其机制。方法流式细胞仪检测K562和K562／A02细胞的P-gp表达，MTT法检测FLAG和IA方案对K562和K562／A02细胞的增生抑制作用，高效液相色谱法检测细胞内Ara-CTP、Ara-C水平，实时定量PCR检测细胞hENT1基因表达。结果K562和K562／A02细胞的P-gp阳性率分别为（1．32±0．24）％和（97．66±3．77）％，两种化疗方案对细胞的P-gp表达无影响。FLAG方案对K562细胞的增生抑制作用较IA方案差[（73．17±13．20）％对（84．41±9．33）％，P〈0．05]，而对K562／A02细胞的增生抑制作用优于IA方案[（70．55±11．32）％对（48．46±12．81）％，P〈0．01]。FLAG方案作用时AML细胞内Ara-CTP、Ara-C水平及人平衡核苷载体（hENT1）基因表达均较IA方案作用时升高（P〈0．05）。结论P-gp阳性AML细胞对FLAG方案较IA方案更敏感。氟达拉滨对Ara-C的生化调节可能是其主要机制。
- 李泉张剑邹萍
- 关键词：FLAG方案去甲氧柔红霉素阿糖胞苷
- 甲硫米唑致粒细胞缺乏症合并感染四例临床分析被引量：7
- 2006年
- 李泉邹萍
- 关键词：GRAVES病甲硫咪唑粒细胞缺乏症
- 异基因CD8^+T细胞致人脐静脉内皮细胞株凋亡及其信号机制
- 2007年
- 目的探讨异基因造血干细胞移植时,供体 CD8^+T 细胞致受体血管内皮细胞的凋亡效应及其信号机制。方法采用密度梯度法分离人周围血单个核细胞,用 CD8^+T 细胞亚群阴性分选柱试剂盒分选出 CD8^+T 细胞。将人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)分为4组:低剂量 TNF
- 韩红黎纬明邹萍黄士昂董继华刘峥嵘李泉夏凌辉
- 关键词：人脐静脉内皮细胞异基因造血干细胞移植凋亡相关蛋白信号机制单个核细胞细胞亚群
- 异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病患者血清组织因子、组织因子途径抑制因子的变化及其临床意义被引量：1
- 2009年
- 近年来组织凶子（TF）和生理性抑制剂组织因子途径（TFPI）在炎症反应、肿瘤迁移等非凝血功能方面表现出的重要作用得到许多学者的重视。现已发现，内皮损伤可能在器官移植后移植物抗宿主病（GVHD）的发生和发展中起重要作用。我们应用ELISA法检测异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）患者在移植前、后及发生GVHD的不同时段血清中TF、TFPI的水平变化，探讨TF、TFPI是否参与并影响了GVHD的病理过程，从而寻求预测GVHD发生、发展的有效检测指标。
- 郝琎琎李泉邹萍游泳夏凌辉黎纬明
- 关键词：组织因子途径抑制因子移植物抗宿主病移植后ELISA法检测TFPI
- 组织因子在移植物抗宿主病患者内皮损伤中的作用机制研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨组织因子（TF）在移植物抗宿主病（GVHD）血管内皮损伤中的作用及其机制。方法用实时定量PCR和Western blot方法检测TF在异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）和自体造血干细胞移植（auto-HSCT）小鼠各组织中基因和蛋白水平的表达。用流式细胞术、实时定量PCR和Western blot方法分别检测异基因CD4^＋或CD8^＋ T淋巴细胞对脐静脉内皮细胞（HUVEC）中TF、VCAM-1、TNF-α、IFN-γ、IL-6以及MAPK表达的影响，观察抗TF抗体、p38MAPK和JNK阻滞剂对异基因T淋巴细胞诱导的HUVEC中细胞因子表达的影响。结果①在allo—HSCT后发生GVHD小鼠的皮肤、胃、小肠和肝组织中，TF在基因水平的表达为对照组的（15．1±2．1），（5．5±1．4），（9．7±2．3），（14．3±2．9）倍，TF蛋白的表达水平分别为对照组的（13．5±2．7），（6．2±0．9），（7．9±1．6），（15．3±3．2）倍；②异基因T淋巴细胞可显著诱导HUVEC中TF、VCAM-1、TNF—α、IFN-γ和IL-6的表达；异基因T淋巴细胞作用后，HUVEC中p38MAPK和JNK磷酸化增强，而磷酸化ERK无变化。p38MAPK和JNK阻滞剂可显著降低异基因CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞诱导HUVEC的TF表达。抗TF抗体和p38MAPK、JNK阻滞剂均可下调异基因T淋巴细胞诱导的HUVEC中VCAM-1、TNF-α、IFN-γ和IL-6的表达。结论TF通过细胞内信号通路p38MAPK和JNK参与了GVHD导致的血管内皮细胞损伤和活化。
- 李泉张剑黎纬明邹萍
- 关键词：移植物抗宿主病T淋巴细胞血管内皮细胞丝裂原激活蛋白激酶类
