李向东
- 作品数：17 被引量：19H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家自然科学基金上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达被引量：5
- 2011年
- 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒
- H3N2亚型猪流感病毒NS2基因表达产物特性分析
- 2014年
- 采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS2全长基因,构建NS2基因原核表达质粒pET-28a-NS2和真核表达质粒p3xFLAG-CMVNS2,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS2基因,并制备抗NS2多克隆抗体。用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS2转染表达NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。结果表明:经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS2在大肠杆菌中得到表达。表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS2蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS2多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS2蛋白、转染Vero细胞表达的NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。间接免疫荧光发现NS2蛋白主要定位于细胞质。本试验为进一步研究NS2蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。
- 郭林王晓杜刘庆伟沈阳邱亚峰李向东罗满林马志永
- 关键词：猪流感病毒NS2克隆特性分析
- PML-NBs参与干扰素介导的细胞先天性免疫抗病毒反应被引量：1
- 2009年
- 早幼粒细胞白血病（Promyelocytic leukemia，PML）蛋白最初发现于急性粒细胞白血病（Acute promyelocytic leukemia，APE）中，与染色体的移位密切相关。PML基因全长约35kh，含有9个外显子。该基因由于C段不同的剪接形式翻译成7种不同的PML蛋白，分别为PMLI Ⅶ。
- 李向东沈阳邱亚峰马志永
- 关键词：粒细胞先天性免疫抗病毒干扰素白血病
- PML-NBs参与干扰素介导的细胞先天性免疫抗病毒反应
- PML蛋白是早幼粒细胞白血病蛋白的简称,最初发现于急性粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中,与染色体的移位密切相关[1]。PML基因全长约35kb,含有9个外显子。该基因由于...
- 李向东沈阳邱亚峰马志永
- 文献传递
- 金迪普拉病毒研究进展
- 2003～2005年间,一种名为金迪普拉病毒(Chandipura virus,CHPV)在印度局部地区暴发流行。该病流行期间,千余名儿童感染,数百名儿童死于脑炎,死亡
- 李向东沈阳邱亚峰马志永
- 关键词：病原学流行病学
- 文献传递
- PML-NBs参与干扰素介导的细胞先天性免疫抗病毒反应
- PML蛋白是早幼粒细胞白血病蛋白的简称，最初发现于急性粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)中，与染色体的移位密切相关。PML基因全长约35kb，含有9个外显子。该基因由于C段不...
- 李向东沈阳邱亚峰马志永
- 关键词：PML蛋白抗病毒活性
- 鸡马立克病病毒Meq蛋白抑制p53的转录激活作用被引量：2
- 2008年
- 目的构建鸡马立克病病毒野生型Meq基因(Meq-wt)和p53结合区域缺失的突变型Meq基因(Meq-mut)表达质粒,研究Meq蛋白对p53转录激活功能的影响,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆鸡马立克病病毒Meq-wt基因,并采用突变PCR方法缺失Meq与p53结合区域,分别构建了Meq-wt和Meq-mut基因表达质粒。转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后,用Western印迹法检测Meq蛋白的表达,利用荧光素酶报告基因系统证实Meq蛋白对p53转录激活的抑制作用。同时借助免疫荧光技术,采用荧光显微镜观察Meq蛋白与p53蛋白在细胞中的定位。结果DNA序列测序表明克隆的Meq-wt、Meq-mut基因插入位点和核苷酸序列完全正确。荧光素酶报告基因系统证实Meq蛋白对p53转录激活具有明显的抑制作用。间接免疫荧光试验证实野生型Meq蛋白主要在胞质中表达,而缺失与p53结合区域的突变型Meq在胞质/胞核中均有表达。野生型Meq蛋白与内源性p53蛋白在胞核内能够很好地重合。结论Meq蛋白对p53的转录激活具有抑制作用,可能是通过直接与p53相互结合,来抑制对p53的转录活性。
- 李向东沈阳邱亚峰马志永
- 关键词：马立克病病毒MEQP53转录激活
- 小鼠Toll样受体9基因的克隆、表达及其活性的初步鉴定被引量：2
- 2010年
- 从小鼠巨噬细胞中提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增小鼠Toll样受体9(mTLR9)cDNA,构建真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-mTLR9,转染293T细胞,利用Western Blotting检测蛋白表达,并用双荧光素酶报告基因系统检测mTLR9对其介导的信号通路下游转录因子NF-κB转录活性影响.结果表明,本试验成功克隆到小鼠TLR9cDNA,构建的重组体转染细胞后表达的蛋白分子质量与预计相符,并能激活下游转录因子NF-κB的转录活性.
- 彭丽娜邱亚峰繆剑华李向东王晓杜袁经权王寿昆李力马志永
- 关键词：基因表达NF-ΚB转录活性
- 伪狂犬病病毒Bartha株gC膜外区部分基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,获得大小为35 ku的重组蛋白,命名为pET-gCN813。按照His-Bind纯化试剂盒说明书纯化表达产物,获得融合蛋白的纯化产物。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒GC基因原核表达融合蛋白
- 抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析
- 2011年
- 为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒GH基因
