朱小甫
- 作品数：162 被引量：342H指数：7
- 供职机构：咸阳职业技术学院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目咸阳市科技计划项目陕西省教育厅科研计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 猪圆环病毒3型LAMP检测方法的建立与应用被引量：3
- 2022年
- 建立一种检测PCV3的LAMP方法,为现场快速诊断提供技术支持。根据PCV3全基因序列,设计了4条特异性引物,通过反应成分和反应条件的优化,建立了检测PCV3的LAMP方法,经过灵敏度试验、特异性试验、重复性试验和临床样品检测对比试验,确定该方法的实用性。结果表明,该方法检测的极限为10 copies/μL的质粒模板,与PRV、PPV、PCV-2、猪大肠杆菌、猪沙门菌DNA无交叉反应,重复性良好。应用该方法检测84份组织病料或血清,PCV3阳性率为15.5%,常规PCR方法阳性率为13.1%,两种检测方法符合率为97.6%(82/84)。LAMP方法比常规PCR方法检出率更高,可用于PCV3的现场快速诊断。
- 朱小甫吴旭锦李虹
- 关键词：环介导等温扩增LAMP
- 陕西省猪流行性腹泻病毒S基因克隆与生物学信息分析
- 2023年
- 【目的】分析2014-2021年陕西省猪群猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要毒力基因的生物学信息特征,揭示陕西省PEDV流行毒株基因变异情况,为防控猪流行性腹泻提供理论参考。【方法】参考PEDV全基因序列设计4对引物,采用RT-PCR方法分段扩增10株陕西省PEDV流行毒株S基因。利用生物信息分析软件,将获得的PEDV流行毒株S基因与GenBank中公开的57株PEDV序列进行比对分析。【结果】获得了10株陕西省PEDV流行毒株S基因全序列,长度为4149~4167 bp。将序列上传GenBank,获得相应的登录号为OL855978~OL855987。系统进化树分析显示,67个PEDV毒株分为G1a、G1b、G2a和G2b 4个亚群,10株PEDV流行毒株均属于G2b亚群,且遗传距离较近,与我国多个省区近年流行毒株亲缘关系较近。同源性分析结果表明,10株流行毒株之间S基因核苷酸序列同源性为95.4%~98.3%,氨基酸同源性为91.0%~98.1%;10株流行毒株与疫苗毒株S基因核苷酸序列同源性为91.7%~98.5%,氨基酸同源性为87.8%~98.5%。与G1a亚群的SD-M、CV777疫苗毒株核苷酸、氨基酸相比同源性均较低,而与G2b亚群的AJ1102、LNCT2、LW/L、XJ-DB2疫苗毒株核苷酸、氨基酸相比同源性均较高。与CV777 S蛋白相比较,共有88个氨基酸位点出现变异,变异位点占总位点数的6.36%(88/1383),其中在59~62位氨基酸有7株毒株出现了QGVN插入,在140位氨基酸有8株毒株出现N插入,在160~161位氨基酸有7株毒株出现DG缺失。S蛋白主要的中和表位、抗原表位和单抗识别表位出现多个变异位点。二级结构预测发现,与CV777相比较,多数流行毒株S蛋白的α螺旋、无规则卷曲占比稍有增加,β转角、延伸占比有所下降。S蛋白糖基化位点预测结果表明,与CV777株相比,流行毒株有多个引入或缺失的糖基化位点。【结论】陕西省PEDV流行毒株S蛋白抗原性发生了较大变化,推测疫苗免疫保护效果下降与此密切相关。
- 朱小甫吴旭锦郑红青尹宝英熊忙利
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因基因序列分析
- 猪瘟病毒RT-nPCR检测方法的建立及陕西部分地区猪瘟病毒E0基因分子特征分析被引量：6
- 2014年
- 【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒(CSFV)RT-nPCR检测方法,为临床诊断提供一种可靠方法,同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析,揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征,为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病毒参考序列,设计并合成了2对引物,建立猪瘟RT-nPCR检测方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行检测。用该方法对采自陕西部分猪场的32份疑似猪瘟病料进行检测,并对获得的8株流行毒株E0基因进行测序及同源性分析。【结果】建立了猪瘟病毒RT-nPCR检测方法,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为6.7×10-5 ng/L,从BVDV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV等参考毒株中提取或反转录获得的DNA/cDNA中不能扩增出目的条带,提示方法灵敏度高、特异性强。对32份疑似猪瘟组织病料的检测发现,有12份呈现阳性,阳性率为37.5%。序列分析表明,8株流行毒株间E0核苷酸、氨基酸同源性分别在97.0%~99.3%和94.8%~98.5%。与参考毒株的核苷酸同源性为83.4%~95.4%,氨基酸同源性为85.8%~98.1%。流行毒株与我国疫苗毒株HCLV、C HVRI的核苷酸同源性仅为83.4%~85.1%,氨基酸同源性仅为86.1%~89.1%,呈现出较明显的远离疫苗株的变异趋势。进化树分析发现,8个流行毒株均属于基因Ⅱ群。首次发现了1株流行毒株(SXWN02株)E0Rnase活性基序位点第94位由E变异为K,其他位点未发生变异。【结论】建立的RT-nPCR检测方法灵敏度高、特异性强,可作为猪瘟病毒的临床诊断方法。陕西部分地区猪场猪瘟感染仍较严重,需要做好防控工作。流行毒株E0基因发生较大变异,尤其是在关键位点上出现变异毒株,需要密切关注。
- 吴旭锦朱小甫
- 关键词：猪瘟E0基因分子特征
- α-亚麻酸对动物生理病理作用的研究进展被引量：1
- 2011年
- 1抗炎症与抗过敏α-亚麻酸在降低炎症疾病的发生率上作用明显。但其对免疫系统作用的报道结果不尽相同,脂肪酸的摄入量不同,产生的作用效果不同,提高动物日粮中α-亚麻酸的比例可以提高免疫力。
- 吴旭锦朱小甫
- 关键词：Α-亚麻酸病理作用动物生理反应中间体动物日粮抗炎症
- 一例赛鸽毛滴虫病的诊治被引量：7
- 2019年
- 对陕西西安某赛鸽公棚发病鸽进行了临床症状观察、病理剖检以及实验室病原检测,确诊为鸽毛滴虫病。对病例进行了病因分析并提出了防治措施,取得了良好效果。该病例可为赛鸽养殖防治鸽毛滴虫病提供参考。
- 朱小甫吴旭锦秦永康
- 关键词：鸽毛滴虫病赛鸽诊治
- 猪瘟诊断技术研究进展被引量：22
- 2007年
- 猪瘟（Classical Swine Fever．CSF）是严重危害养猪业的主要传染病之一．世界动物卫生组织（OIE）将其确定为A类传染病．也是我国农业部规定的一类传染病。猪瘟病毒（Classical swine fevervirus．CSrV）属黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）．
- 朱小甫李晓成陈德坤吴旭锦张志洪军张燕霞
- 关键词：猪瘟病毒黄病毒科血清学诊断方法间接血凝试验荧光抗体试验
- 猪伪狂犬病毒HX14株的分离与鉴定被引量：1
- 2017年
- 采集临床疑似伪狂犬病例病料并分离到1株病毒。PCR鉴定仅能扩增出伪狂犬病毒特异性条带,其他常见的7种猪群疫病病毒为阴性。家兔接种试验能引起典型的神经症状,最终衰竭死亡,证实所分离病毒为强毒株,将分离到的伪狂犬病毒命名为HX14株。选取我国不同时期分离的伪狂犬野毒gE基因进行序列比对分析,结果显示,HX14株与参比序列同源性在93.8%~97.2%之间,同源性最高的是Min-A株,最低的是GZ-Z1株。氨基酸序列比较,HX14株和Ea、GDSH、HB-HS、HB-LF、HBJZ、LXB6、LXB88、Min-A、P-PrV、Yangsan株的同源性均为93.2%,与89V87同源性最低,为88.1%。HX14株在8个氨基酸位点上和参考毒株明显不同,分别是P^(12)→M^(12)、^(14)LRREPP19→^(14)CSARAA19、T^(115)→R^(115)。研究表明HX14株为gE基因变异较为明显的伪狂犬野毒强毒株。
- 朱小甫吴旭锦
- 关键词：伪狂犬病毒GE基因
- Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立与应用被引量：5
- 2019年
- 本研究根据GenBank发表的Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)基因序列,设计了2对通用检测引物,通过反应体系和条件优化,建立了Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法。通过灵敏性检测、特异性试验以及对临床病料中FAdV检测验证实用性与可靠性。建立的套式PCR检测方法灵敏度为3.12×10-6 ng/μL;特异性试验证实该方法仅能从FAdV参考阳性株扩增出750 bp的预期目的条带,其他5种常见禽病毒均为阴性。结果表明,本研究成功建立了一种灵敏度高、特异性好的检测Ⅰ群禽腺病毒通用套式PCR方法,为临床FAdV感染的快速准确诊断提供了技术手段。
- 朱小甫吴旭锦高睿尚红梅
- 关键词：套式PCR
- 紫苏子油纳米乳的研制
- 目的：研制紫苏子油纳米乳剂,并对其进行质量评价。方法：绘制伪三元相图优选处方,考察制剂的形态、黏度、电导率、折光率、乳滴粒径分布及稳定性。结果：以小麦胚芽油为油相,聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40)为表面活性剂的处方最佳,紫...
- 吴旭锦欧阳五庆朱小甫杨宝平
- 关键词：伪三元相图纳米乳表面活性气相色谱
- 文献传递
- 猪瘟病毒SXYL2006株全基因组序列特征分析
- 2016年
- 为了对分离到的猪瘟流行毒株SXYL2006进行全基因组序列克隆分析,揭示其遗传变异特征,为猪瘟分子流行病学研究提供素材,为猪瘟防控提供理论参考,根据Gen Bank上发表的古典猪瘟Shimen毒株及HCLV株全基因序列,参考有关文献合成了12对引物,应用RT-PCR技术,从陕西省猪瘟流行毒株SXYL2006中成功扩增出了11段c DNA,测序后拼接得到全长12 295 bp全基因序列,提交Gen Bank获得登录号GQ122383。将SXYL2006与参考毒株进行比较,结果表明SXYL2006与毒株39、ALD、Alfort187、Brescia、CAP、Glentorf、GPE、GXWZ02、HCLV、LPC、Paderborn、Riems和Shimen核苷酸序列同源性分别为88.2%、85.5%、85.4%、85.0%、85.1%、85.0%、85.2%、95.6%、84.4%、83.8%、94.8%、84.7%和85.1%,氨基酸序列同源性分别为94.2%、92.9%、92.9%、92.9%、92.1%、92.0%、92.5%、97.4%、91.6%、90.6%、97.5%、92.0%和92.5%。系统发生树分析结果表明SXYL2006与GXWZ02在进化上距离最近,亲缘关系最为密切,两者与德国流行毒株Paderborn同处于基因Ⅱ群。与HCLV株相比,SXYL2006株E0蛋白中,具有Rnase活性的2个主要氨基酸序列没有发生任何变异;在E2蛋白中,与免疫逃逸相关的5个位点有3个发生变异;已发现的26个T细胞表位中,有14个表位27个氨基酸位点变异。SXYL2006在遗传特性和抗原性上与经典强毒株Shimen、疫苗毒株HCLV差异较大。
- 吴旭锦朱小甫
- 关键词：猪瘟病毒全基因组
