曹昊
- 作品数:5 被引量:4H指数:1
- 供职机构:吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:理学生物学轻工技术与工程更多>>
- 信号肽对OPMA在枯草杆菌中的分泌表达及其催化活性的影响被引量:3
- 2013年
- 将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组,分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMASG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌表达.SDS-PAGE分析表明,该信号肽的引入提高了异源蛋白的分泌量,OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53%和67%)比OPMA-N和OPMA-G(45%和58%)明显提高,但此信号肽在分泌表达OPMA-N或OPMA-G后不能被有效切除.活力分析表明,OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平与分泌水平一致,但OPMA-SG(4.50U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平却与分泌水平呈反相关性.通过分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空间构象发现,信号肽的存在不影响OPMA-N的活性部位构象,但影响OPMA-G的活性部位构象,从而导致OPOMA-G的催化活性下降.
- 李雁飞张金祥谷艳芹郝倩曹昊张应玖
- 关键词:信号肽
- OPMA-N保守位点W358对其催化选择性的影响研究
- OPMA-N是一种新型的多功能淀粉酶,它同时具有水解糖苷键活性和转糖苷活性,但是它的催化多功能性的分子机理至今尚不清楚.位于催化位点Glu356附近的Trp358残基不但在GH13_20中具有很高的保守性,而且位于TIM...
- 曹昊夏莹张金祥张应玖
- 关键词:异麦芽低聚糖
- 酶分子模块重组与功能集成
- 来自微生物的酶往往具有功能多重性,表现为功能集成。糖苷水解酶家族13中的20亚家族(新普鲁兰酶亚家族)针对α-糖苷键具有多种催化功能,包括水解α-1,4、α-1,6糖苷键、转糖苷形成α-1,4、α-1,6糖苷键。由于该家...
- 曹昊张应玖
- 文献传递
- 多功能淀粉酶OPMA-N功能集成性的机制研究
- 糖苷水解酶家族13是一类专门作用于α糖苷键的酶,也称作α淀粉酶家族,这个家族拥有数量庞大的成员,它们具有不同类型的催化性质,包括α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键的水解和转糖苷活性。其中,糖苷水解酶家族13中的第20亚家...
- 曹昊
- 关键词:分子模拟定点突变
- 文献传递
- 多功能淀粉酶固定化中的底物保护效应被引量:1
- 2015年
- 以壳聚糖为载体,通过正交实验确定了用壳聚糖凝胶微球固定多功能淀粉酶OPMA-N的最适条件:以20 mg/mL戊二醛交联,在25℃及pH=6.5条件下固定1.5 h,但需在引入底物淀粉介导的保护效应后,才能获得良好稳定性的固定化OPMA-N( IOPMA-N),显示了底物保护效应在催化部位占分子中较大区域的酶(如OPMA-N)固定化过程中的重要性.对比分析游离酶与固定化酶的性质与功能发现,在50℃及pH=6.0-7.0条件下, IOPMA-N的表观比活力比游离酶OPMA-N提高3倍以上,催化效率( kcat/Km )提高4倍以上,对弱酸性至中性及常温(30~50℃)环境的耐受性明显高于OPMA-N,并具有良好的操作稳定性和储存稳定性,重复使用15次后,酶活力仍然能够保持75%,在4℃下储存半衰期达31 d,而OPMA-N在4℃下储存5 d后活力基本丧失.催化产物的对比分析结果表明, OPMA-N固定化后,水解活性明显提高,但同时转苷活性有所下降,这与已报道的OPMA-N分子中2种催化活力存在平衡机制的结论一致,同时也表明在OPMA-N的固定化中底物淀粉对其水解活性有明显的保护作用,但对其转苷活性几乎无贡献.
- 夏莹曹昊张应玖
- 关键词:壳聚糖固定化底物