曹慧芳
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PTEN多克隆抗体制备和原发性肝癌组织PTEN蛋白表达的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :制备并鉴定抗PTEN(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosome 10 )兔多克隆抗体 ,利用该抗体研究PTEN蛋白在原发性肝癌中表达的临床病理意义。方法 :以PCR扩增合成人PTEN全长cDNA序列 ;与 6组氨酸融合表达载体pPROEXHTb构建原核表达重组体 ,转染进大肠杆菌诱导融合蛋白表达后将其纯化 ;用融合蛋白免疫新西兰大白兔制备抗PTEN多克隆抗体 ,经Western杂交鉴定后用于免疫组织化学检测 6 0例肝癌组织中PTEN蛋白的表达。结果 :采用制备的兔多克隆抗体进行Westernblot的结果显示 ,在瞬时转染了pcDNA3 0 PTEN的MCF 7细胞裂解液中检测 1条相对分子质量约为 4 8× 10 3的特异性蛋白带 ,而转染了空载体pcDNA3 0的MCF 7细胞中未检测到该蛋白条带。免疫组化显示PTEN蛋白定位于肝细胞的胞质内 ,原发性肝癌组织内PTEN蛋白表达阳性率为4 8 33% ,显著低于对应的癌旁肝组织内 10 0 %的检出阳性率。PTEN蛋白的表达水平与肝癌患者的病理分级和有无癌栓显著相关。结论 :获得了作用特异的PTEN兔多克隆抗体 ,该抗体可应用于研究PTEN在肝癌组织中的表达分析。
- 万兴旺王红阳江明何雅琴曹慧芳刘淑琴唐亮邱秀华吴孟超
- 关键词：肝肿瘤PTEN蛋白免疫组织化学
- p27^kipl在PTEN抑制肝癌细胞生长增殖中的可能作用
- 2003年
- 目的 研究PTEN对肝癌细胞生长增殖能力的影响并探讨p27^kipl在其中的可能作用。方法 采用脂质体转染法建立稳定表达野生型PTEN的肝癌细胞。采用MTT比色法和软琼脂克隆形成法研究PTEN基因转染对肝癌细胞生长增殖能力的影响。p27^kipl的表达水平采用Northern blot和Western blot检测。结果 PTEN稳定表达的Huh-7细胞增殖和软琼脂板克隆形成能力显著低于空白细胞和转染了空载体的克隆化细胞(P<0．05)，而p27^kipl表达水平则显著高于对照细胞和转染了空载体的克隆化细胞(P<0．05)。结论 PTEN上调Huh-7细胞内p27^kipl表达水平，并抑制肝癌细胞的生长增殖能力。PTEN可能在原发性肝癌的发生过程中起重要的作用。
- 万兴旺何雅琴曹慧芳刘淑琴唐亮邱秀华吴孟超王红阳
- 关键词：肝癌细胞增殖PTEN基因P27^KIPL
- 抑癌基因PTEN在原发性肝癌中的表达及意义被引量：13
- 2003年
- 目的 研究抑癌基因PTEN在原发性肝癌发生过程中的作用及意义。方法 应用免疫组织化学和northern杂交分析60例原发性肝癌及对应癌旁组织中PTEN mRNA及PTEN蛋白表达情况,结合患者的临床病理资料分析PTEN在原发性肝肝癌中的意义。结果 PTEN蛋白明确定位于肝细胞胞浆内。60例HCC的癌组织中,PTEN蛋白阳性率为48.3％(29/60),明显低于癌旁肝组织的阳性率(100％)。PTEN蛋白在肝癌组织内的表达阳性率与肝癌的病理学分级、有无癌栓有关,PTEN蛋白在肝癌组织的Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的阳性率分别为84.0％、23.8％、21.4％,无癌栓形成组PTEN蛋白表达的阳性率为55.56%,有癌栓形成组PTEN蛋白表达的阳性率为26.7％。Northern杂交显示,PIEN基因在肝癌细胞内存在四个转录子,其大小分别为5.5、4.4、2.4、1.8 kb。患者肝癌组织内PTEN mRNA的表达水平明显低于对应的癌旁肝组织。PTEN 5.5 kb和4.4 kb的转录子表达水平的降低与血清中AFP水平、有无癌栓、有无卫星灶及病理学分级有关;2.4 kb的转录子表达水平降低与患者有无癌栓、有无卫星灶有关;1.8 kb转录子表达水平的降低与临床病理学指标无关。结论 PTEN在肝癌的发生过程中可能起重要作用,其表达水平有可能作为反映肝癌进展和预后的病理学指标。
- 万兴旺王红阳江明何雅琴刘淑琴曹慧芳邱秀华唐亮吴孟超
- 关键词：抑癌基因PTEN原发性肝癌
- 细胞内基质金属蛋白酶-2/细胞内基质金属蛋白酶组织抑制剂-2在PTEN抑制肝癌细胞粘附及浸润迁移中的作用被引量：7
- 2003年
- 目的 研究PTEN在原发性肝癌浸润转移中的作用并探讨其可能机制。方法 PTEN对肝癌细胞粘附能力的影响采用计数 2 0和 12 0min后与特异性和非特异性底物粘附细胞数的方法。PTEN对肝癌细胞浸润迁移的影响采用分析 6h内细胞穿透BoydenChamber多聚碳膜上层粘蛋白的肝癌细胞数进行。PTEN对Huh 7细胞内基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )及其组织抑制剂 2 (TIMP 2 )表达水平的影响用Northernblot分析。结果 PTEN使Huh 7细胞在Vitronectin上2 0min时的贴壁率由 ( 18.6± 1.4) %显著降低至 ( 6.1± 0 .5 ) % (P <0 .0 1) ,在 12 0min时的贴壁率由 ( 71.5± 6.5 ) %降低至 ( 3 6.8± 1.6) % (P <0 .0 1) ;在Laminin上 ,PTEN使Huh 7细胞在 2 0min时贴壁率分别由 ( 2 2 .9± 2 .1) %降低至 ( 6.5± 0 .5 ) % (P <0 .0 1) ,而在 12 0min时的贴壁率由( 75 .0± 6.5 ) %降低至 ( 2 0 .8± 1.1) % (P <0 .0 1)。PTEN使Huh 7细胞穿透迁移小室多聚碳膜的细胞数由 44 .0± 3 .7个显著降低至 2 4.8± 2 .6(P <0 .0 5 )。PTEN显著上调Huh 7细胞内TIMP 2和显著抑制MMP 2的表达。结论 PTEN抑制原发性肝癌细胞浸润转移 ,该作用可能与调节细胞内MMP 2、TIMP 2表达水平有关。
- 万兴旺王红阳何雅琴刘淑琴曹慧芳邱秀华唐亮吴孟超
- 关键词：细胞内PTEN肿瘤浸润
