方厚华
- 作品数：30 被引量：116H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>
- Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株B亚型Gag和Env蛋白在大肠杆菌中的表达
- 2001年
- 将中国流行株 型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAGE电泳分析有重组蛋白表达。该蛋白表达量随诱导时间的延长而逐渐增加 ,4 h达到最大值。凝胶扫描结果显示 ,该蛋白表达量占菌体总蛋白的 1 0 .3 %。Western blotting检测 ,该重组蛋白可与中国流行株 HIV-1 B亚型阳性血清发生特异反应。重组表达质粒 p ETM1、p ETM2和 p ETM3仅在蛋白印迹中与 gp1 2 0单抗发生特异性反应而出现特异显色带 ,SDS-PAGE电泳分析未见表达蛋白带。
- 张锦霞金宁一方厚华罗坤郭焱邵一鸣殷震
- 关键词：核心蛋白中国流行株
- 糖尿病动物模型的研究进展被引量：12
- 2001年
- 方厚华仇志华
- 关键词：糖尿病动物模型
- 金属硫蛋白对NMDA诱导小鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用
- 2007年
- 目的金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量富含半胱氨酸,能与铜和锌等金属相结合的金属结合蛋白,它参与金属离子Cu2+、Zn2+稳态的维持,调节锌金属蛋白的生物合成和活性,抗自由基损伤和参与调节谷氨酸能等神经元的活动。NMDA受体广泛分布于中枢神经系统,对神经元信号的传递和基因表达的调控起着重要作用,而且还影响大脑的认知功能和脑细胞的生长发育。过度激动NMDA受体是许多神经系统疾病的病因,可使大脑产生包括神经元坏死和细胞凋亡的神经损害。本实验采用原代培养MT基因敲除小鼠和野生型小鼠的皮层神经细胞,研究MT对于NMDA诱导的神经细胞损伤的保护作用。方法取新生24h内的MT-Ⅰ和Ⅱ基因敲除小鼠(MT-/-)和C57BL/6野生型小鼠(MT+/+)的大脑皮层进行神经细胞原代培养,检测生长不同时间(第1、4、7和10d)的MT+/+和MT-/-组皮层神经细胞的生长状况(MTT法),绘制两者的生长曲线。于细胞培养第10d向培养基中加入不同浓度NMDA(0、25、50、100、200和400μmol/L),作用24h,观察损伤后的细胞形态变化,测定存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,通过MT+/+和MT-/-2组的比较研究MT对神经细胞的保护作用。结果显示MT+/+组皮层神经细胞在生长不同天数的MTT值均高于MT-/-组,说明MT的缺失导致2组细胞在基础的生长状况上存在差异。给予NMDA引起神经毒性损伤后,MT+/+组皮层神经细胞的存活率要高于MT-/-组,且都随着NMDA剂量的增大而降低,在100、200μmol/L浓度时差异有统计学意义。同时MT+/+组神经细胞LDH漏出率要低于MT-/-组,说明MT可降低NMDA所致细胞LDH漏出的增加。结论MT对于NMDA所致神经细胞损伤有保护作用。
- 于小倩彭双清方厚华
- 关键词：金属硫蛋白NMDA神经毒性
- 鸡痘病毒282E4株表达载体构建及新城疫病毒F蛋白的表达
- 将鸡痘病毒282E4株TK基因和1.5kbB片段2个非必需区克隆后,分别在TK基因Nco I位点和B片段EcoR I位点插入复合启动子(由牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子和20个串联的痘苗病毒(VV)突变型p7.5启动...
- 郭志儒金宁一方厚华罗坤金扩世李萍
- 关键词：鸡痘病毒新城疫病毒F蛋白
- IBDV VP2/VP243基因DNA疫苗表达质粒的构建与表达被引量：16
- 2000年
- 将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) VP2 /VP2 4 3插入真核表达载体 pc DNA中 ,置于 CMV启动子的调控之下 ,构建成 DNA疫苗表达质粒 pc DNA VP2和 pc DNA VP0。分别转染 CEF细胞后 ,于 2 4、4 8、72 h取细胞裂解液进行 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot检测 ,pc DNA VP2于转染后 2 4 h呈阳性反应 ,4 8h表达量高于 2 4 h;pc DNA VP0于转染后 4 8h呈阳性反应 ,72 h表达量高于 4
- 刘毅金宁一古长庆罗坤方厚华王宏伟李萍殷震
- 关键词：DNA疫苗真核表达载体传染性法氏囊病病毒
- 金属硫蛋白对NMDA诱导小鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用
- 目的金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量富含半胱氨酸,能与铜和锌等金属相结合的金属结合蛋白,它参与金属离子 Cu、Zn稳态的维持,调节锌金属蛋白的生物合成和活性,抗自由基损伤和参与调节谷氨酸能...
- 于小倩彭双清方厚华
- 关键词：金属硫蛋白NMDA神经毒性
- 文献传递
- 中国流行株HIV-1B亚型Gag重组鸡痘病毒构建及其免疫原性被引量：1
- 2001年
- 在以鸡痘病毒 ( FPV) 2 82 E4 株为基础构建的重组表达质粒 p UTAL的 ATI-P7.5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株 HIV-1 B亚型核心蛋白 gag基因 ,构建了重组表达质粒 p UTALG。重组质粒与 FPV共转染 CEF细胞 ,进行了同源重组。通过 BUd R加压筛选 ,X-gal染色 ,获得重组鸡痘病毒 v UTALG。 Westernblot检测结果表明 ,重组病毒表达了 Gag蛋白 ,裂解后其相对分子质量分别为 5 5× 1 0 3 、4 8× 1 0 3 、2 4× 1 0 3 和1 7× 1 0 3 。以重组病毒 v UTALG免疫小鼠 ,与 FPV对照比较 ,小鼠脾 T淋巴细胞 CD4 + T细胞数和 CD4 + /CD8+值均有上升趋势 ,Con A、LPS诱导的脾细胞增殖能力增强 ,并能诱导 CTL和 HIV-1特异的血清抗体反应 。
- 罗坤金宁一郭志儒方厚华郭焱秦云龙李萍安汝国殷震
- 关键词：HIV-1重组鸡痘病毒
- 芥子气诱发细胞凋亡分子机制研究进展被引量：2
- 2006年
- 芥子气属糜烂性毒剂,具有强大的杀伤效应,目前仍是外军主要装备的化学毒剂之一。迄今为止,尚无芥子气的特效抗毒剂,仅采用对症和支持疗法。芥子气诱发细胞凋亡的分子机制是近年来其毒理学研究领域的热点,本文综述了该领域的研究进展,以期为全面认识芥子气凋亡机制及制订有效的凋亡干预策略提供思路。
- 时辉宁应翔宇钟玉绪方厚华
- 关键词：芥子气细胞凋亡
- IBDV VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达及实验免疫研究
- 以FPV 282E4株TK基因为侧翼,分别将IBDV VP2和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质粒,命名为pUTALacVP2和pUTALacVP...
- 金宁一刘毅郭志儒方厚华古长庆罗坤夏志平
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP基因重组鸡痘病毒免疫原性
- HIV-2 env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达被引量：1
- 1998年
- 将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中，构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，在原核表达系统成功地表达了ＨＩＶ－２ｅｎｖ融合蛋白，表达的蛋白分子量分别为３５０００、７００００和５００００，而原核表达质粒ｐＥＴＥ１在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶的３５０００处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定，原核系统表达的Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）相对含量为５．８％。在真核细胞中表达的Ｅｎｖ蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测分析，分子量分别为６００００、５７０００和４２０００。上述表达的Ｅｎｖ蛋白均能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。
- 王秀清金宁一田梅郭志儒郭志儒顾万钧方厚华殷震
- 关键词：HIV-2大肠杆菌痘苗病毒
