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多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响: 2009年; 目的探讨多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响。方法分别用单一载体(破伤风类毒素)和混合载体(破伤风类毒素和白喉类毒素)作为多糖结合物的载体蛋白,制备5～9价肺炎链球菌荚膜多糖结合物,免疫NIH小鼠,采用间接ELISA法测定免疫小鼠血清中抗荚膜多糖特异性IgG抗体水平。结果多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物的免疫效果优于相应的单价结合物;随着结合物配制价数的增高,小鼠的免疫应答能力趋于下降;多价结合物中使用两种载体能缓解此现象,但载体含量过高时,依然会抑制免疫应答。结论多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物免疫小鼠后,随着载体剂量的增高,会出现载体诱导的表位抑制现象,使小鼠的免疫应答反应减弱。两种载体蛋白同时使用能缓解此现象。; 任克明陈晓航张轶刘爱萍陈美华王剑虹沈荣; 关键词：结合物破伤风类毒素白喉类毒素免疫应答

核磁共振氢谱分析法在肺炎球菌荚膜多糖疫苗质量控制中的应用被引量：3: 2015年; 目的：将一维核磁共振氢谱（~1H-NMR）法分析应用于肺炎球菌荚膜多糖（Pn Ps）的质量控制。方法：用~1H-NMR法检测供试品Pn Ps,对部分特征信号进行归属,判断供试品化学结构是否与文献公布结果一致。对图谱异常的Pn Ps22F、23F的1H-NMR图谱进一步分析,辨认其水解特征信号。分析样品中是否有C-多糖（3.23ppm）、乙酸盐（1.92ppm）和Tris（3.73 ppm）等残留。结果：~1H-NMR分析结果显示Pn Ps14,6B,1,12F和33F结构与分析文献公布结果一致,样品中均含有少量的C多糖残留。图谱异常的Pn Ps22F和Pn Ps23F分别有部分脱氧乙酰基和部分脱磷酸甘油酯基团。3型中含有Tris残留。结论：1H-NMR检定方法快捷、所需样品量少、结果直观,可用于Pn Ps的质量控制。; 王玺李阿妮张轶张新庄任克明王剑虹沈荣; 关键词：肺炎球菌荚膜多糖核磁共振

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)稳定剂配方的筛选被引量：6: 2016年; 目的筛选出适合冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的热稳定性好、无明胶的稳定剂配方。方法以水分、外观、效价、热稳定性效价为指标,尤其是效价和热稳定性效价,对A、B、C、D、E、F、G等6种稳定剂配方进行系统的优化组合筛选,6种稳定剂配方分别含有蔗糖、乳糖、人血白蛋白、甘氨酸、精氨酸、明胶、尿素、甘露醇、右旋糖苷,其中A为现行疫苗生产配方。运用单因素五元设计法,筛选出最优稳定剂组合。结果方差分析结果显示D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的M-ABT结果 13.95,37℃放置4周M-ABT结果 13.05;NIH效价1.94,37℃放置4周NIH效价1.56。结论 D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)有较好的保护作用。; 马超陆俭孙燕陈军刘鹏李守丽于滢张轶; 关键词：稳定剂

18～60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平调查被引量：2: 2016年; 目的了解18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平,为肺炎链球菌性疾病的预防与控制提供参考依据。方法选取甘肃、宁夏健康献浆员为调查对象,分为18~30、31~40、41~50、51~60岁4个年龄组,共调查347人。采用WHO推荐的标准化酶联免疫吸附试验检测12种肺炎链球菌血清型IgG抗体水平,并计算IgG抗体阳性率和几何平均浓度（Geometric mean concentration,GMC）。结果质控血清QC907的IgG抗体浓度均值与参考值之间的误差百分数均未超过±40%,测定值符合其参考值范围,各血清型抗体浓度检测结果的CV均〈30%。347份血清样品肺炎链球菌IgG抗体总阳性率为64.8%~96.0%,GMC为0.37~2.24μg/m L。不同血清型间IgG抗体GMC差异具有统计学意义（P〈0.05）。不同年龄组同种血清型IgG抗体阳性率及GMC均无统计学意义（P〉0.05）。除19F型外,不同地区同种血清型IgG抗体阳性率均有统计学意义（P〈0.05）;除4、7F、14和18C型外,不同地区同种血清型IgG抗体GMC间差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平普遍较高,对肺炎链球菌主要流行血清型均具有一定的保护力。; 张轶熊明郁张新庄任珍芸刘倩张丽芝任克明王玺陈晓航王剑虹沈荣; 关键词：肺炎链球菌抗体水平酶联免疫吸附试验

响应面法优化14型肺炎链球菌荚膜多糖的超滤工艺被引量：1: 2013年; 目的利用响应面法优化14型肺炎链球菌荚膜多糖的超滤工艺。方法选择跨膜压力、切向流量及多糖浓度为自变量,膜包处理能力为响应值,采用Box-Behnken设计分析各自变量及其交互作用对膜包处理能力的影响;利用Design Expert软件对数据进行回归分析,得到回归方程的预测模型,取3批14型肺炎链球菌荚膜多糖水溶液,对优化的工艺参数进行验证;按照最佳超滤工艺对3批14型肺炎链球菌荚膜多糖水溶液进行等体积透析,确定超滤终点;并对纯化的荚膜多糖进行各项检定。结果优化的14型肺炎链球菌荚膜多糖超滤工艺为:跨膜压力12.8 Psi,切向流量66 L/h,多糖浓度0.86 g/L,最适透析倍数为5倍,在该条件下,膜包处理能力的理论值为91.7 g/(h·m2),实际值为91.9 g/(h·m2)。3批纯化的14型肺炎链球菌荚膜多糖水溶液的多糖组分均符合《欧洲药典》7.0版相关规定,均未检出残余脱氧胆酸钠和乙醇,3批多糖的相对分子质量均大于420 000,抗原性良好,且抗原物质成分无差异。结论响应面法优化的14型肺炎链球菌荚膜多糖超滤工艺显著提高了工作效率,降低了生产成本,为14型肺炎链球菌荚膜多糖的规模化生产提供了实验依据。; 任克明张轶王剑虹王玺白贵杰沈荣; 关键词：肺炎链球菌多糖超滤响应面

18C型肺炎球菌荚膜多糖的水解及水解片段的特性: 2007年; 目的探索不同乙酸水解条件对18C型肺炎球菌多糖的水解效果。方法选择60℃和92℃2种温度,以不同乙酸浓度和不同时间对多糖进行水解,用层析法检测相对分子质量,免疫双扩散法和ELISA抑制法分别检测活性。结果0.2mol/L乙酸92℃水解16h,水解程度趋于稳定,相对分子质量可达57000;1.0mol/L乙酸60℃水解40h,水解程度趋于稳定,相对分子质量可达235000;用1.0mol/L乙酸在不同温度下水解时,随着温度升高,水解程度增加,而在92℃不同乙酸浓度对水解程度几乎无影响。上述条件所得水解片段均保留了抗原性,但随着相对分子质量的降低,抗原性有所减弱。结论在不同条件下,乙酸能将18C型肺炎球菌荚膜多糖水解为不同大小的片段,且未破坏抗原决定簇的基本结构。; 乔瑞洁陈晓航谈晓梅张轶孔素娟刘爱萍沈荣谢贵林朱家鸿; 关键词：肺炎球菌荚膜多糖水解乙酸

肺炎链球菌荚膜多糖分子大小及分子量分析方法的比较被引量：10: 2015年; 目的 3种方法分析10个血清型肺炎链球菌荚膜多糖（pneumococcal capsular polysaccharides,Pn Ps）样品的分子大小及分子量,并对这3种方法进行比较。方法采用Sepharose CL-4B凝胶排阻层析（SEC）技术检测1型、2型、4型、8型、9N型、12F型、14型、18C型、19A型和23F型Pn Ps各2～3批次样品在色谱柱中的分配系数（KD）和样品组分特征;采用高效凝胶排阻色谱-示差折光检测器（high performance size-exclusion chromatography with refractive index,HPSEC-RI）法建立Pullulan标准品分子量标准曲线,计算各Pn Ps样品的重均分子量（weight-average molecular weight,Mw）;采用高效凝胶排阻色谱-多角度激光光散射仪/示差折光检测器联用技术（high performance size-exclu-sion chromatography with multi-angle laser light scattering and refractive index,HPSEC-MALLS/RI）检测各Pn Ps样品的Mw、数均分子量（number-average molecular weight,Mn）、多分散水平（Mw/Mn）及均方根旋转半径（root mean square ratio of gyration,Rg）;对HPSEC-RI法和HPSEC-MALLS/RI法检测Pullulan分子量标准品的结果进行比较。结果 SEC技术不同化学方法检测的同批次Pn Ps样品的KD值十分接近,且主峰形态也比较近似,个别批次Pn Ps不同化学方法获得的峰形有差别。经HPSEC-RI检测Pullulan分子量标准品获得的回归方程为y=-0.278 x＋10.13,r2=0.998,各Pn Ps样品的分子量为1.812×105～1.246×106。HPSEC-MALLS/RI联用技术检测的各批Pn Ps样品的Mw分布于9.898×105～1.471×105,Rg为84.9～25.4 nm,同一血清型不同批次样品Rg间的大小关系与其Mw间的大小关系具有较好一致性。结论结合多种方法检测多糖样品的分子大小和分子量,可更客观、全面地了解Pn Ps分子的各种性质。; 张轶张新庄王玺刘倩陈晓航任克明白贵杰王剑虹沈荣; 关键词：分子大小分子量

肺炎链球菌发酵过程中质控方法的应用被引量：1: 2013年; 目的建立肺炎链球菌发酵过程中的质控方法。方法应用革兰染色镜检与荚膜肿胀试验监测菌种的退化及发酵罐染菌情况,或用于退化菌种的复壮;应用发酵过程中测定培养液光密度(A600)的方法监测发酵状况、确定培养液初始浓度以及收获时间;应用血糖仪测定发酵过程中的葡萄糖含量,保证发酵过程中碳源的及时补充;应用渗透压仪检测发酵过程中培养液渗透压的变化,确定补料策略。结果确立了细菌革兰染色、荚膜肿胀试验、葡萄糖含量、渗透压、光密度(A600)等作为肺炎链球菌发酵过程中的质控方法。结论实验研究中建立的肺炎链球菌发酵过程质控方法能够较好地监测和评价肺炎链球菌的发酵过程。; 张新庄白贵杰张轶熊明郁任克明王玺沈荣; 关键词：肺炎链球菌发酵质控方法

经验放大法对肺炎链球菌规模化发酵工艺条件的研究被引量：1: 2016年; 目的应用经验放大法探索肺炎链球菌规模化基本发酵工艺条件。方法复苏肺炎链球菌菌种,传代培养,最后接种于30 L发酵罐中,以细菌发酵的培养时间、收获液菌浓度A600 nm值、荚膜多糖产率为指标评价发酵工艺;以纯化多糖的功能基团含量、相对分子质量大小(色谱分配系数KD值)、生物活性为指标评价多糖质量。以4型、19F型肺炎链球菌为首选菌株,用于筛选高产菌株、优化传代方法、培养基及30 L发酵罐的通气条件,并应用经验放大法至270 L及1 200 L发酵罐,并将发酵条件推演到其他血清型肺炎链球菌。结果筛选出肺炎链球菌4型和19F高产菌株,利用市售复合培养基,经3代种子液体-液体传代法,0.03 VVM通气条件下,4型和19F菌株在3 0 L发酵罐中获得良好的培养结果;并采用经验放大法至1 200 L发酵罐,获得良好结果。采用此发酵工艺条件,其他20个血清型肺炎链球菌在1 200 L发酵罐中也获得较理想结果。结论应用经验放大法初步探索了肺炎链球菌在1 200 L发酵罐中的发酵工艺条件。; 张新庄白贵杰张轶任珍芸张丽芝张钦沈荣; 关键词：肺炎链球菌菌种筛选培养基

18C型肺炎球菌荚膜多糖-TT结合物中多糖片段长度对其免疫原性的影响被引量：1: 2007年; 目的研究18C型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(TT)结合物中多糖片段的大小对其免疫原性的影响。方法采取乙酸水解多糖,Sephacryl S-300(XK-50)柱纯化多糖片段,ADH法制备结合物,免疫小鼠,检测血清的ELISA抗体滴度、亲和力以及调理吞噬能力。结果得到重复单位数分别为27、25、19、12、10、9和8的多糖片段。与TT制备的结合物在小鼠体内均能诱导产生IgG型抗体,并存在加强免疫效应,表现出T-细胞依赖型抗体免疫反应。随着链长度的缩短,血清GMT有增加的趋势,但只有8RUPn18C-TT与27RUPn18C-TT组之间差异有显著意义。当吞噬率为50%时,血清的稀释倍数分别为35.10、39.60、45.71、104.71、117.00、145.50和478.60。此趋势与抗体滴度呈正相关,但各组间亲和力差异无显著意义。结论较短多糖片段制备的结合物免疫原性高,血清GMT高,调理吞噬能力也强。; 乔瑞洁陈晓航张勇任克明孔素娟张轶刘爱萍沈荣谢贵林朱家鸿; 关键词：肺炎球菌结合物免疫原性

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张轶

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