张绪
- 作品数:4 被引量:7H指数:2
- 供职机构:浙江大学化学工程与生物工程学系更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学一般工业技术化学工程更多>>
- 水通道蛋白AqpZ在大肠杆菌中的表达及纯化被引量:1
- 2012年
- 利用麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)/多聚组氨酸和肠激酶组成的强亲水性双标签表达系统用于水通道蛋白Aquaporin Z(AqpZ)在大肠杆菌中的表达。通过PCR方法人工在AqpZ的3'端添加8个组氨酸标签后,定向克隆到载体pMAL-c5e中成功构建了双标签融合表达载体pMAL-c5e-AqpZ-HIS。通过IPTG诱导,融合蛋白MBP-AqpZ-HIS在Rosetta(DE3)宿主中以可溶形式表达,其上清表达量约为160 mg/L。表达产物在肠激酶作用下,融合蛋白的MBP标签被完全切除,经过一步的亲和层析获得高纯度的AqpZ-HIS。每升培养液可以获得约10 mg AqpZ-HIS纯蛋白。纯化得到的AqpZ-HIS在SDS-PAGE上的行为表明了AqpZ-HIS以4聚体形式存在。通过对色氨酸荧光光谱的研究推断出AqpZ-HIS也形成了正确的3级结构。因此,该表达系统为在大肠杆菌中表达水通道蛋白开辟了新的途径。
- 潘剑峰刘云平张绪黄磊蔡谨龚兴国徐志南
- 无细胞蛋白表达系统新进展及在生物制药工程中的应用被引量:5
- 2014年
- 无细胞蛋白表达体系是一种以细胞抽提物为基础的体外合成蛋白质表达技术,具有遗传背景简单、反应操控简便等特点,已成为研究生物反应系统的重要技术手段。在研究人员的不断努力下,反应体系从原核扩展到真核蛋白质合成体系,而且目标蛋白表达量从毫克级提高到数克级每升,成本不断降低,反应规模可达到百公升级。近年来,无细胞蛋白表达系统在复杂蛋白、毒性蛋白和膜蛋白表达方面的优势逐渐体现,展示了其在生物制药领域的重要应用潜力。总之,无细胞技术已经成为异源蛋白质高效合成和生物制药领域中有巨大潜力的新策略。
- 盛嘉元张绪郑强徐志南
- 关键词:生物制药
- 一步法生物合成γ-聚谷氨酸的研究
- 本文探讨将谷氨酸的发酵生产与谷氨酸聚合相耦联,实现一步法生物合成γ-聚谷氨酸。首先开展将谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum S9114与具有γ-聚谷氨酸合成能力的枯草芽孢杆菌Bacillus...
- 张慧莉张绪石峰徐志南岑沛霖
- 关键词:Γ-聚谷氨酸发酵生产原生质体融合
- 无细胞体系高效合成复杂膜蛋白的关键技术及工业应用探索
- 膜蛋白由于具有极其重要的生物学和医学意义,其研究已经成为蛋白质科学、结构生物学以及医学药学领域的重要部分,同时也是仿生膜等工程领域的研究基础。膜蛋白有不同的分类方法,既包括一次跨膜结构的简单膜蛋白,又包括多次跨膜的复杂膜...
- 张绪
- 关键词:膜蛋白无细胞系统脂质体水通道蛋白仿生膜