张福萍
- 作品数：4 被引量：9H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多种缺损及突变的PrP蛋白在杆状病毒中的表达和纯化被引量：9
- 2003年
- PrP蛋白多肽序列上存在有不同的功能区域 ,影响着蛋白质构象、理化特性和生物学功能。为了获得不同缺损及突变的仓鼠PrP蛋白 ,以PCR方法获得不同大小的PrP基因片段 ,利用PCR大引物点诱变法获得带有突变糖基化位点PrP序列。所有PCR产物测序鉴定正确后 ,分别与pFASTBAC Hb质粒连接 ,与穿梭载体DH10BAC转座 ,构建各种重组病毒。Westernblot证实 ,8种不同长度的仓鼠PrP蛋白可在昆虫细胞Sf9中表达 ,包括全序列的PrP1 2 31,信号肽缺失的PrP2 3 2 31;N端缺损的PrP90 2 31和PrP12 0 2 31;C端缺损的PrP1 199、PrP1 174和PrP1 16 0。糖基化位点突变 :PrP2 3 2 31(N181Q)。其中不带信号肽序列的PrP蛋白均呈HIS融合蛋白 ,而N端带有信号肽的PrP蛋白则不能与Ni NTA琼脂糖亲和层析柱结合 ,但可以同PrP特异性抗体发生免疫沉淀反应。这提示PrP信号肽序列在昆虫细胞中可能也发挥着与哺乳动物细胞相似的作用。不同缺损及突变的PrP蛋白的表达和纯化为进行蛋白生物学性状研究奠定了基础。
- 张瑾张福萍聂凯陈岚周伟刘勇董小平
- 关键词：PRP杆状病毒信号肽
- 人牙本质磷蛋白功能片段的原核表达
- 2005年
- 目的本研究旨在利用分子生物学技术原核表达包含功能区的人DPP片段。方法首先构建带有人DPP基因5′端序列的GST融合蛋白表达质粒。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳。结果人牙本质磷蛋白基因5′端序列可在原核表达系统中进行不溶性表达,表达的融合蛋白分子量约为43KDa,进行初步纯化后,经SDS-PAGE证实,在预期位置出现了纯化蛋白条带。结论利用GST融合蛋白表达系统表达了人DPP功能片段。为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础。
- 万领李玉晶张福萍董小平
- 关键词：牙本质磷蛋白基因克隆原核表达
- 人牙本质磷蛋白功能片段的真核表达
- 2005年
- 目的 本研究旨在利用分子生物学技术真核表达包含功能区的人DPP片段。方法 构建了人DPP蛋白5′端基因片段的杆状病毒表达质粒pFastBacHb -hDPP -N ,经BH1 0BAC转座反应后感染昆虫细胞sf9,进行重组蛋白的表达。结果 经2～3代后,重组病毒产生明显的CPE ,人DSPP蛋白特异性多克隆抗体Westernblot鉴定,结果显示重组病毒感染3代毒sf9细胞的裂解物中在约1 7KD位置上出现了特异性的反应条带。结论 表明杆状病毒系统可表达人DPP基因片段。为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础。
- 万领李玉晶张福萍张瑾周伟董小平
- 关键词：真核表达牙本质磷蛋白昆虫细胞SF9杆状病毒系统牙髓修复
- 人牙本质磷蛋白基因全序列的亚克隆及其5’端序列的克隆和分析
- 2004年
- 目的 :本研究旨在鉴定质粒 pBlueBacHis2 -DPP上所携带的外源基因序列 ;建立带有人DPP基因的稳定克隆株 ;构建人DPP基因 5’端序列重组质粒 ,为表达纯化人DPP蛋白及其 5’端序列提供可参考的数据。方法 :用限制性内切酶分析并进行DNA序列测定质粒 pBlueBacHis2 -DPP上所携带的外源基因序列 ;以质粒pBlueBacHis2 -DPP为模板 ,构建人DPP基因 5’端序列重组质粒 ,并用蛋白序列分析软件包ANTHEPROT 4 5分析预测人DPP蛋白N端序列。结果和结论 :质粒pBlueBacHis2 -DPP上所携带的外源基因序列与基因文库上的人DPP基因序列相符合 ,建立带有人DPP基因的稳定克隆株pBV2 2 2 -DPP ;蛋白序列分析软件包分析预测人DPP蛋白N端序列氨基酸组成特点与人DPP全序列一致 ,体外即将表达的蛋白可能具有人DPP生物学功能的重组蛋白。
- 万领李玉晶张福萍聂凯董小平
- 关键词：蛋白序列克隆株牙本质磷蛋白亚克隆
