张宝乐
- 作品数：17 被引量：24H指数：3
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省科技攻关计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- cDNA-AFLP法分离苏太猪肌内脂肪含量差异表达基因的方法
- 本发明公开了cDNA-AFLP法分离苏太猪肌内脂肪含量差异表达基因的方法。苏太商品猪屠宰后采取背最长肌，根据肌内脂肪的含量从中选取最高和最低各5头以上构建RNA池，提取肌内脂肪部位的总RNA，以总RNA为模板合成双链cD...
- 徐银学李纪委张子敬张宝乐
- 文献传递
- 鸭BLVRA基因部分cDNA的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 为研究胆绿素还原酶A(Biliverdin reductase A,BLVRA)基因的遗传分化,探索其结构和功能,根据鸡、人、小鼠、牛等动物BLVRA基因编码区的保守序列设计一对引物,以缙云麻鸭输卵管子宫部的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出鸭BLVRA基因的一段cDNA编码序列,并对其进行测序及序列分析。结果表明:该cDNA序列由634个核苷酸组成,编码211个氨基酸,分子量为24.1ku。与鸡、小鼠、牛、蟾蜍和人的核苷酸相似性分别为92.6%、64.9%、62.8%、69.0%、63.6%;氨基酸的相似性分别为96.2%、59.7%、60.7%、68.4%、59.7%,说明BLVRA基因在进化过程中较为保守。进一步的系统进化分析表明,鸭BLVRA基因与鸡的进化关系最近,蟾蜍次之,小鼠、牛和人较远,与传统的分类地位基本吻合。该基因部分cDNA序列的克隆,为获得BLVRA基因全长及其在各组织中的表达研究奠定了基础。
- 张宝乐李进军马永生董福禄陶争荣沈军达田勇石放雄卢立志
- 关键词：克隆
- 组蛋白高乙酰化介导的Egr-1结合促进gdnf基因高转录被引量：4
- 2015年
- 目的探讨大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区组蛋白H3K9高乙酰化引发该基因高转录的机制。方法采用Ch IP-PCR技术检测了大鼠C6星形胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中gdnf基因启动子II区转录因子Egr-1结合位点处H3K9的乙酰化水平以及Egr-1与该启动子的结合能力;利用Real-time PCR和Ch IP-PCR技术,检测了组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素(Curcumin)和去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)处理对C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区Egr-1结合位点处H3K9的乙酰化水平、Egr-1与之的结合能力以及该基因转录水平的影响。结果较之正常星形胶质细胞,C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区Egr-1结合位点处H3K9的乙酰化水平显著升高,并且Egr-1与之的结合能力也显著升高(P<0.01)。当Curcumin显著降低了Egr-1结合位点处H3K9乙酰化水平时,Egr-1与启动子II区的结合量以及gdnf基因m RNA的表达量都显著下调(P<0.05);而当TSA显著升高了Egr-1结合位点处H3K9乙酰化水平时,Egr-1与启动子II区的结合量以及gdnf基因m RNA的表达量都显著升高(P<0.05)。结论在大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区H3K9高乙酰化介导的Egr-1结合量升高可能是其高转录的原因。
- 李周儒刘捷雷宇倪海波蔡红星张宝乐
- 关键词：GDNF组蛋白乙酰化EGR-1
- 猪Gpr3基因特征、表达及其对卵泡颗粒细胞的影响
- 哺乳动物卵泡发育是一个复杂的生理生化过程，主要包括:原始卵泡的募集、腔前卵泡的发育、有腔卵泡的选择和生长及卵泡的成熟或闭锁。该过程受激素、生长因子、金属离子等多种因素控制，最终只有少数卵泡发育为优势卵泡并排卵，99％以上...
- 张宝乐
- 关键词：信号通路卵泡颗粒细胞
- 文献传递
- G蛋白偶联受体3:调控神经系统和卵泡发育的关键因子被引量：3
- 2013年
- G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)是细胞表面最大的受体超家族,参与调节多种生理和病理过程。G蛋白偶联受体3(G protein-coupled receptor 3,Gpr3)是一种新发现的鞘氨醇1-磷酸受体,它直接或者间接参与调节脊椎动物神经系统及卵泡的发育过程。作为潜在的治疗多种神经疾病和卵巢早衰的药物靶标,Gpr3的生理功能及作用的分子机制等都值得进一步研究。文章主要就Gpr3及其介导的信号通路在脊椎动物神经系统发育及卵巢卵泡发育过程中的相关作用作一综述。
- 张宝乐高殿帅徐银学
- 关键词：G蛋白偶联受体神经系统卵泡发育减数分裂
- 过表达Gpr3诱导猪颗粒细胞G_1阻滞及凋亡被引量：1
- 2014年
- G蛋白偶联受体3(Gpr3)属于G蛋白偶联受体视紫质家族成员.Gpr3通过激活Gs蛋白介导的下游信号通路,维持卵泡卵母细胞减数分裂的前期阻滞,但在卵泡颗粒细胞中的作用不清.为了明确Gpr3在猪卵泡颗粒细胞中的功能,构建了Gpr3基因的真核表达载体,利用过表达的方式激活其介导的信号通路,并利用MTT、流式细胞术和real-time PCR等方法检测了过表达Gpr3对猪卵泡颗粒细胞增殖及凋亡的影响.结果显示,过表达Gpr3后,猪颗粒细胞的增殖水平显著下调,G0/G1期细胞的百分比增加,S期细胞减少,Cyclin B1和CDK1 mRNA的表达量也显著降低;同时,显著增加了颗粒细胞的凋亡率,在抑制Bcl-2表达的同时,促进了Bax的表达.结果表明:过表达Gpr3在猪颗粒细胞中具有抑增殖促凋亡的作用,丰富了其在调节卵泡发育过程中的生物学功能.
- 张宝乐李晔徐银学
- 关键词：过表达增殖凋亡
- 鸭BLVRA基因cDNA克隆及其在输卵管子宫部的mRNA表达量与青壳性状的相关性分析被引量：6
- 2010年
- 为研究胆绿素还原酶A(BLVRA)基因的结构功能,探索其与鸭青壳性状的相关性,根据鸭BLVRA基因部分已知编码序列(CDS),采用RT-PCR和5′RACE方法扩增缙云麻鸭BLVRA基因mRNA的3′和5′末端未知序列,应用荧光定量PCR方法测定鸭输孵管子宫部BLVRA基因表达量,用反射系数法测定蛋壳颜色。结果表明:鸭BLVRA基因cDNA由1071个核苷酸组成,编码302个氨基酸,等电点为7.15,分子量为34.3ku,分别将已有编码区序列向5′和3′端延伸238和199bp,与鸡、珍珠鸟、蟾蜍、牛、人和小鼠的相应氨基酸序列的相似性分别为95.3%、95.0%、70.0%、61.1%、60.5%和59.5%。白壳蛋缙云麻鸭输孵管子宫部BLVRA基因的相对表达量约是深青壳蛋鸭相对表达量的3倍(P<0.01),蛋壳颜色的反射系数与BLVRA基因mRNA相对表达量呈显著的正相关(r=0.719,P<0.05)。初步推断BLVRA基因可作为青壳蛋鸭分子选育的候选基因。
- 张宝乐李国勤章鹤沈军达李进军陶争荣陈奕春王德前陈文标石放雄卢立志
- 关键词：缙云麻鸭蛋壳颜色
- 猪Gpr6基因的克隆及表达分析
- 2013年
- 为了探明G蛋白偶联受体6基因(Gpr6)的结构、功能与表达模式,克隆了含有完整阅读框的猪Gpr6的cDNA序列。利用生物信息学方法对Gpr6基因的结构及功能进行了系统研究,运用Real-time PCR技术对其在组织中的表达规律进行了分析,并利用构建的原核表达载体pET32a-Gpr6对其在BL21菌株中的最佳蛋白表达条件进行了筛选。结果表明:猪Gpr6基因的cDNA序列由1 664个核苷酸组成,编码366个氨基酸残基,等电点为7.63,相对分子质量为38.38×103,与牛、犬、人、黑猩猩、大鼠和小鼠的氨基酸相似性分别为91.2%、89.5%、88.3%、88.3%、86.3%和86.1%。猪Gpr6基因在各组织中均有表达,但仅在下丘脑、垂体和肝脏中表达量较高。经原核表达分析,发现成功获得了相对分子质量约为27 000的Gpr6蛋白,并且确定了该蛋白的最佳表达条件为0.8 mmol.L-1IPTG,37℃诱导表达2 h。
- 李晔张宝乐丁建华张子敬徐银学
- 关键词：组织表达谱原核表达
- Egr-1参与组蛋白H3K9高乙酰化介导的胶质瘤细胞GDNF异常高转录
- ＜正＞胶质瘤细胞中胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的异常高转录机制尚不明确。本研究采用染色质免疫沉淀-聚合酶链反应（ChIP-PCR）、实时聚合酶链反应（real—time PCR）、pGL3双荧光素酶报告系统等...
- 孙申张宝乐高殿帅
- 文献传递
- 猪G蛋白偶联受体12(Gpr12)基因克隆鉴定及其表达分析被引量：1
- 2014年
- 为研究猪G蛋白偶联受体12(G protein-coupled receptor 12,Gpr12)基因的序列和组织表达特征,探索Gpr12 mRNA在卵泡发育过程中的表达规律,本研究利用克隆测序技术获取猪Gpr12基因的编码区序列,并利用生物信息学方法分析Gpr12基因序列和蛋白的潜在特征;RT-PCR技术检测Gpr12基因的组织表达模式;荧光定量PCR技术检测Gpr12 mRNA在猪卵泡发育过程中的表达规律。结果表明:猪Gpr12基因编码区序列长1 005 bp,编码蛋白含有典型的7次跨膜结构域和DRY基序,存在多个潜在的磷酸化和糖基化修饰位点;Gpr12基因在所检测的组织和细胞中均有表达,且在脑、垂体和卵母细胞中高表达;随着卵泡的发育,Gpr12 mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),表明Gpr12基因可能参与了猪卵泡发育的调控过程。
- 张宝乐李晔石放雄徐银学
- 关键词：基因克隆
