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表达猪瘟病毒E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒的研究被引量：3: 2012年; 为构建表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV),本研究首先利用高致病性PRRSV弱毒疫苗HuN4-F112株的感染性分子克隆作为平台,构建了一个在nsp2区有缺失的感染性分子克隆,命名为pHuN4-F112-△480-620。以pHuN4-F112-△480-620作为载体,采用突变PCR的方法将CSFV的主要保护性抗原E2基因1 bp～9 99 bp,1 bp～600 bp,1 bp～330 bp及256 bp～330 bp基因片段分别插到nsp2中aa 480～aa 620位氨基酸缺失编码区域。结果显示,插入完整E2基因或较大E2基因片段的重组PRRSV cDNA质粒均未能拯救出病毒,只有插入较小的E2基因片段(256 bp～330 bp)的重组病毒cDNA质粒成功地拯救出了重组病毒rPRRSV-F112-E2(256-330),拯救的病毒能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,而且生长速度明显高于其亲本病毒,间接荧光检测表明该重组病毒能够表达外源基因。; 童武周艳君徐彦召姜一峰王亚欣张善瑞朱建平虞凌雪孙晶陈焕春童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸道综合征病毒猪瘟病毒感染性分子克隆重组病毒

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失标记疫苗ELISA鉴别诊断方法的建立被引量：2: 2014年; 为了配合(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因标记疫苗株(rHN4-Δ25+NP49株)的临床抗体鉴别诊断应用,本研究以标记疫苗中缺失的25个氨基酸多肽作为包被抗原,通过对ELISA反应条件的优化,确定抗原最适包被浓度为500 ng/孔,血清最佳稀释度为1:40,同时确定其阴阳性临界值S/P判定标准为0.15,批内和批间重复实验结果显示其变异系数均低于10%,表明该方法具有良好的重复性。对临床血清检测结果显示与IDEXX试剂盒检测结果的符合率为94.84%,采用25 aa负标记ELISA方法检测HuN4-F112免疫猪血清,结果显示从免疫后21 d可检测25 aa特异性抗体,该抗体至少可持续存在126 d。本研究建立的ELISA检测方法为今后PRRSV基因工程标记弱毒疫苗株在临床鉴别诊断的应用提供了有利保障。; 孙晶周艳君姜一峰徐彦召童武童光志; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒多肽抗原

PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒及方法和应用: 本发明公开一种PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，所述试剂盒包含NP49多肽抗原，该NP49多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，以NP49多...; 童光志周艳君孙晶姜一峰童武; 文献传递

PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒及方法和应用: 本发明公开一种PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，所述试剂盒包含25aa多肽抗原，该25aa多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，以PRRSV...; 童光志周艳君孙晶姜一峰童武; 文献传递

PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒及方法和应用: 本发明公开一种PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，所述试剂盒包含NP49多肽抗原，该NP49多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，以NP49多...; 童光志周艳君孙晶姜一峰童武; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征基因标记疫苗株NP49-ELISA鉴别诊断方法的建立被引量：1: 2013年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)rHN4-Δ25+NP49株是新型基因标记弱毒疫苗候选株,为了配合对该基因标记疫苗免疫猪血清抗体的鉴别诊断,本研究以标记基因编码的NP49(新城疫病毒NP蛋白C末端49个氨基酸,即NP49)多肽作为包被抗原,建立标记疫苗免疫猪血清中NP49抗体的ELISA鉴别诊断方法。通过对NP49-ELISA工作条件的优化,结果显示NP49-ELISA的多肽抗原最适包被浓度为500 ng/孔,被检血清最佳稀释度为1:40。利用ROC曲线法确定S/P临界值为0.2,该方法批内与批间重复试验的变异系数均小于10%,与几种常见猪病阳性血清无交叉反应,具有较好重复性和特异性。本研究建立的NP49-ELISA鉴别诊断方法为猪繁殖与呼吸综合征新型基因标记疫苗的临床应用提供了有力保障。; 孙晶周艳君徐彦召姜一峰童武童光志; 关键词：多肽抗原

表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定被引量：5: 2012年; 以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆（rHuN4-F112）作为载体，将O型口蹄疫病毒（FMDV）VPl基因的421～480nt（141～160aa）和598～639nt（200～213aa）两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508～532位缺失区域，经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36h，将上清接种至MARC-145细胞中培养，并在MARC-145细胞中连续传代，拯救重组病毒。经RT-PCR扩增，MluI酶切及测序验证，结果表明插入的外源基因及人为突变的Mlu1分子标记都正确，说明重组病毒拯救成功，且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代，将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O／VPlep。rPRRsv-F112-O／VPlep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变，间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析，该病毒的TCID50=-log10-6.75／0．1mL，且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-Fll2（△508-532）相似，但明显高于rHuN4-F112病毒。; 童武徐彦召周艳君姜一峰张善瑞王亚欣朱建平虞凌雪孙晶陈焕春童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 O型口蹄疫病毒感染性分子克隆重组病毒

PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒及方法和应用: 本发明公开一种PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，所述试剂盒包含25aa多肽抗原，该25aa多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明PRRSV基因标记疫苗株ELISA鉴别诊断试剂盒，以PRRSV...; 童光志周艳君孙晶姜一峰童武; 文献传递

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孙晶