国汉邦 作品数:80 被引量:296 H指数:9 供职机构: 北京医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市自然科学基金 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 社会学 更多>>
人重组载脂蛋白E在大肠杆菌中的表达和纯化 被引量:3 2002年 用含有载脂蛋白EcDNA的PET32a原核表达载体转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,使之高效表达载脂蛋白E thioredoxin融合蛋白。利用融合蛋白上的一段组氨酸序列 ,用镍离子亲合层析柱进行分离纯化。由于在载脂蛋白E和thioredoxin之间存在凝血酶的识别位点 ,用凝血酶消化后 ,经SephacrylS 30 0凝胶过滤得到人重组载脂蛋白E。用此方法可以从 1L大肠杆菌培养液中纯化 2 0~ 30mg高纯度的各种载脂蛋白E异构体和非自然存在的突变体 ,方法简便 ,产量高 ,纯度达 95 %以上。 国汉邦 董军 王抒关键词:大肠杆菌 载脂蛋白E 重组蛋白 纯化 老年痴呆患者apoE基因型分布 被引量:20 1997年 目的观察中国老年痴呆患者apoE基因型的分布,初步探讨apoE在老年痴呆发病中的作用。方法应用聚合酶链式反应(PCR)对35例健康人、23例多梗塞性痴呆(MID)及17例老年性痴呆(AD)患者进行apoE基因多态性分析,测定血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)、载脂蛋白B(apoB)和载脂蛋白E(apoE)的浓度。结果AD组与健康对照组在apoE基因频率及等位基因频率分布上的差异有显著性(χ2=11.5,P<0.05;χ2=16.2,P<0.01);MID组与健康对照组间差异无显著性(P>0.05);应用Woolf公式计算,发现apoEε4等位基因与AD之间有显著性关联(χ2=7.7,P<0.01),相关危险度(RR)=3.0。AD组血清apoE水平显著高于对照组(P<0.05),而TC、LDL-C、apoAⅠ、apoB显著低于对照组(P<0.05)。结论结果提示apoEε4等位基因与老年性痴呆有显著性关联,apoEε4可能是AD发病的危险因素。 国汉邦 唐蔚青 秦斌 秦斌 夏永静 国弘 蔡晓杰 王抒 黎健关键词:载脂蛋白E 早老性痴呆 APOE 基因型 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4源性活性氧过量产生抑制胚胎干细胞向心肌细胞的分化(英文) 2007年 背景:作为信号传导通路中的第二信使,活性氧(主要指超氧离子和过氧化氢)对细胞的生长、分化起重要作用。过量的活性氧在心脏疾病中启动了心肌细胞的凋亡,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4源性活性氧的过量产生诱导凋亡是否抑制了胚胎干细胞向心肌细胞的分化。目的:探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4活性氧对心肌细胞分化的抑制作用。设计:随机对照实验观察。单位:卫生部北京医院老年医学研究所。材料:胚胎干细胞CGR8为本实验室自存,其他主要试剂除特别注明均购自Sigma公司。方法:实验于2003-10/2005-08在卫生部北京医院老年医学研究所进行。①将小鼠胚胎干细胞分化成胚小体。在分化4d后以不同浓度的过氧化氢(1,10,100,1000nmol/L)处理胚小体1h,在分化8d后观察心肌细胞的生成,分析活性氧对心肌细胞分化的影响。②将pcDNA3.1和pcDNA3.1-NOX4质粒分别转染CGR8细胞,同时以未进行转染的CGR8细胞为对照,以RT-PCR和WesternBlotting测定尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4mRNA和MLC2v蛋白水平,应用定量四唑氮蓝高水平表达尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4干细胞中活性氧水平。③采用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(5mmol/L)和过氧化氢酶(200U/mL)转染前处理2h作为对照,用Hoechst染色、TUNEL和DNAladder分析尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达后CGR8细胞凋亡情况,同时检测转染尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶氧化酶4后CGR8细胞中p21、p53及Bcl-2的表达。主要观察指标:①活性氧对心肌细胞分化的影响。②胚胎干细胞中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的表达。③尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达后活性氧产生量、心肌细胞的分化和胚胎干细胞凋亡的观察。④p53,p21和Bcl-2是否参与了尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达诱导的细胞� 张小勇 国汉邦 黎健关键词:活性氧 NADPH氧化酶 胚胎 干细胞 肿瘤坏死因子α引起脐静脉内皮细胞粘附功能损伤的作用机制的研究 <正>目的:本研究旨在通过观察肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞粘附功能的损伤,明确核酸解旋酶家族成员p68在其中可能起到的作用,并证实脐静脉内皮细胞中p68的调节机制,探讨其活化的相关信号通路。方法:1.用酶消... 朱玉萍 沈涛 王抒 黎健 国汉邦 黄秀清关键词:肿瘤坏死因子Α 文献传递 一种高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率的测定方法 本发明公开了一种高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率的测定方法,包括a)在新鲜全血样本中加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性抑制剂;b)加入沉淀剂得到只含有高密度脂蛋白的样品;c)将样品分成两份,一份加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性恢... 陈文祥 董军 彭涛 王抒 国汉邦 李红霞 满永文献传递 单纯性肥胖青少年血清脂蛋白亚组分胆固醇含量分析 肥胖已成为影响城市学生的健康的重要问题。肥胖与动脉粥样硬化(As)性疾病在发病机制上关系密切,其中血脂代谢异常在肥胖相关疾病的发生过程中起重要作用。本研究旨在通过对单纯性肥胖青少年的血脂、脂蛋白及其亚组分分布特点进行分析... 国汉邦 黄秀清 董军 李红霞 满永 王抒 黎健文献传递 低密度脂蛋白胆固醇测定匀相法试剂评价 被引量:1 2009年 低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)升高是动脉粥样硬化性心血管疾病(CVD)的重要危险因素。饮食和药物干预研究结果表明降低LDLC可以减少CVD事件的发生和死亡。因此,在美国国家胆固醇教育计划(NCEP)成人治疗方案第三版(ATPⅢ)和我国成人血脂异常防治指南中,都将降LDLC治疗作为CVD防治的第一目标。 国汉邦 李红霞 赵海舰 张传宝 董军 满永 王抒 陈文祥关键词:动脉粥样硬化性心血管疾病 低密度脂蛋白胆固醇 高密度脂蛋白胆固醇测定匀相法试剂评价 2009年 大规模的前瞻性流行病学研究证明高密度脂蛋白(HDL)对动脉粥样硬化性心血管疾病(CVD)有保护作用,HDL胆固醇(HDLC)降低是明确的CVD主要危险因素。HDLC水平与动脉硬化的负相关在调整了其他危险因素后依然存在,并且与HDL可能的抗动脉粥样硬化机制相符合。HDLC测定在临床被广泛用于心血管病危险评估和干预效果评价指标。 董军 国汉邦 赵海舰 张传宝 李红霞 王抒 陈文祥关键词:高密度脂蛋白胆固醇 动脉粥样硬化性心血管疾病 HDL抑制人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶4表达和活性氧生成 被引量:1 2008年 目的分析HDL对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)内NAD-PH氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)及其亚组分p22phox、p67phox、Rac1与活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,研究HDL对LDL的拮抗作用。方法用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养HUVEC;用RT-PCR、Western印迹观察NOX4、p22phox、p67phox、Rac1表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内ROS的变化。结果HDL处理HUVEC能下调NOX4和p67phox mRNA和蛋白水平,但不影响p22phox和Rac1的表达。高浓度LDL刺激HUVEC时,NOX4表达上调,细胞内ROS生成增加,但p22phox、p67phox和Rac1的表达没有明显变化。用HDL预处理再加高浓度LDL刺激时,NOX4表达下调,ROS生成量减少;结论HDL可通过下调HUVEC NOX4表达降低ROS水平。 王蕾 国汉邦 张小勇 屈顺林 丁莉 满永 王抒 黎健关键词:活性氧 人脐静脉内皮细胞 高密度脂蛋白 液相色谱串联质谱测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸方法的建立 被引量:2 2013年 目的建立液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸(CE-n-3FA)的方法,以进行营养监测和心血管疾病危险分析。方法本研究为方法学建立及评价。2012年1-8月征集111名北京地区健康志愿者(年龄19-72岁),其中男55名,女56名。建立各胆固醇酯(CEs)质谱测定条件,异丙醇提取血清CEs,稀释后用LC-MS/MS分析各种CEs,归一化法定量。评价新方法的精密度。用新建立的LC-MS/MS方法测定血清CE-n-3FA含量,同时用试剂盒测定三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和超敏c反应蛋白(hs-CRP)。用Spearman相关分析CE-n-3FA与年龄、体质指数(BMI)、TG、HDL-C、LDL-C和hs-CRP的关系。结果样本分析在5rain内完成,11种主要CEs分离良好;CE20:5和CE22:6平均批内CV分别为1.6%-2.3%和1.5%-2.3%,总CV分别为3.9%-7.6%和3.5%-7.4%,未见明显干扰因素。111名健康志愿者血清分析结果显示,CE20:5和CE22:6均呈正偏态分布(偏度分别为1.81和1.09;峰度分别为4.50和1.40),中位数分别为0.37%(0.13%-1.26%)和0.50%(0.29%-0.94%)。CE20:5与年龄、TG、TC、hs-CRP呈正相关(P〈0.05)。结论成功建立了LC-MS/MS测定血清CE-n-3FA含量的方法,有望用于营养监测,CE-n-3FA与心血管疾病的关系还有待进一步研究。 禹松林 董军 周伟燕 赵海建 杨睿悦 李红霞 张天娇 国汉邦 王抒 张传宝 陈文祥关键词:串联质谱法 胆固醇酯类