卢悟广
- 作品数：32 被引量：178H指数：7
- 供职机构：江苏省中医药研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省中医药领军人才培养项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种靶向MUC1及PD-1的双靶点蛋白疫苗设计及其体液免疫学分析被引量：2
- 2016年
- 机体内存在肿瘤免疫抑制是MUC1等肿瘤相关性抗原疫苗临床效果不佳的重要原因,我们认为减少免疫抑制将能够增强免疫应答。因此,我们以霍乱毒素B亚基为载体,设计了一种同时靶向小鼠MUC1（Muc1）VNTR区和小鼠程序性死亡受体（m PD-1）的融合蛋白疫苗并研究了其体液免疫学效果。通过插入突变的方法,将Muc1 VNTR序列插入CTB序列以替换其Q56~D59位氨基酸得到CTB-Muc1融合基因,进一步将m PD-1融合至CTB-Muc1的羧基端得到CTB-Muc1-m PD1融合基因,并经TG1大肠杆菌表达,亲和层析得到CTB-Muc1-m PD1的融合蛋白。融合蛋白辅以铝佐剂和Cp G ODN免疫BALB/C小鼠,并收集抗血清,以Elisa法检测抗体产生情况。结果表明：CTB-Muc1-m PD1重组蛋白能够打破小鼠自身免疫耐受,同时产生针对于Muc1和m PD-1的特异性抗体,此外,CTB-Muc1融合m PD-1后能够显著增强机体针对于Muc1的特异性免疫应答（p〈0.01）。这表明靶向抑制免疫环境抑制因子能够显著增强肿瘤相关性抗原的免疫应答。
- 邱凌翀卢悟广蔺智兵蔡花漫李荣秀
- 关键词：MUC1PD-1疫苗体液免疫
- 东亚钳蝎蝎毒素AGAP的生产方法
- 本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种说重组蝎毒蛋白AGAP的生产方法。该方法是先利用重叠PCR技术获得带有His6标签的SUMO-AGAP融合基因；然后构建含SUMO-AGAP基因的重组表达载体；再将构建的表达载体转...
- 曹鹏卢悟广王志刚于杰淼
- 文献传递
- 一种蛋白A的Z结构域衍生物的构建及对IgG亲和力的研究
- 2014年
- 蛋白A是金葡菌中一种重要的致病因子,有较强结合多种哺乳动物的IgG的能力,因此降低机体产生特异性SPA抗体的水平,使金葡菌具免疫逃逸功能.研究一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,对金葡菌疫苗的开发具重要意义.研究表明,蛋白A的Z结构域中位于第13、14位的Phe,Tyr是两个与IgG结合的关键位点.本文首次通过PCR突变技术,将这两个关键氨基酸均改造为Gly,构建突变体ZFY.Discovery Studio3.5受体-配体相互作用力模块分析显示,突变体ZFY与IgG结合力降低到-61.68kcal/mol,仅为原相互作用力的10.69%;构建得到ZFY蛋白,经ITC测定,ZFY与兔IgG的亲和常数降低到1.2×104 M-1,仅为原亲和常数的0.39%,证明了ZFY是一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,为实现新型蛋白A疫苗治疗金葡菌感染奠定基础.
- 李灵舒祝先潮卢悟广李荣秀
- 关键词：金黄色葡萄球菌ITC
- 重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽抑制人胆管癌细胞生长作用及其机制研究被引量：11
- 2013年
- 目的重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(recommbinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)是从东亚钳蝎中提取纯化出的单体,已证明其具有明显的抗肿瘤活性。文中主要探讨rAGAP对体外培养的人胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)细胞株HuCC-T1的毒性作用,并探讨其抗肿瘤的机制。方法不同浓度的rAGAP刺激细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增长率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力的变化;Hoechst荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果①rAGAP可抑制HuCC-T1细胞的增殖和迁移,并呈时间和剂量依赖性。②Hoechst33342染色结果显示rAGAP处理组细胞形态发生改变,见细胞核染色质边集、核固缩;流式细胞术证实rAGAP可诱导HuCC-T1细胞凋亡。③Western blot结果显示:随着rAGAP浓度的增加,Bcl-2表达下调;Bax表达上调;而Bcl-2/Bax减小。结论 rAGAP可抑制CCA细胞HuCC-T1的生长与迁移,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与Bcl-2/Bax信号通路有关。
- 葛贤秀曹鹏卢悟广季国忠李全鹏谢睿缪林
- 关键词：胆管癌细胞BCL-2BAX
- 七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的机制研究被引量：12
- 2012年
- 目的研究七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的作用及其机制。方法 MTT法分析七叶皂苷钠对Jurkat细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258染色、FITC-Annexin V/PI双染、DNA Ladder、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blotting法分析凋亡相关蛋白变化。结果七叶皂苷钠呈质量浓度和时间相关方式抑制Jurkat细胞增殖;经七叶皂苷钠处理后的Jurkat细胞出现凋亡的形态学特征、DNA条带,Annexin V+/PI细胞(早期凋亡细胞)显著增加;七叶皂苷钠可活化Jurkat细胞中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3,引起PARP的切割,并减少Bcl-2蛋白的表达。结论七叶皂苷钠能有效地通过诱导细胞凋亡抑制Jurkat细胞增殖。
- 万贵平张真真蔡雪婷卢悟广曹鹏
- 关键词：七叶皂苷钠细胞凋亡细胞增殖抗肿瘤
- 野菊花多糖的分离纯化及化学组成研究被引量：8
- 2013年
- 目的:从野菊花中分离纯化多糖,并对其进行相对分子质量测定及单糖组成分析。方法:经热水提取、乙醇沉淀、大孔吸附树脂LSA-21脱色与Sevag法除蛋白,再经DEAE-52纤维素柱和Sephadex G75凝胶色谱分离纯化得到野菊花多糖。采用高效凝胶过滤色谱法(HPGPC)分析其相对分子质量,并借助衍生化气相色谱法(GC)对其单糖组成进行解析。结果:从野菊花中得到3个均一多糖CIP-1',CIP-2'和CIP-3'。结论:CIP-1'的相对分子质量为8 242 Da,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖6种单糖组成,摩尔比为0.75∶1.48∶1.96∶0.72∶1.80∶3.00;CIP-2'的相对分子质量为8 383 Da,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖6种单糖组成,摩尔比为1.17∶1.19∶0.23∶0.56∶1.70∶2.20;CIP-3'的相对分子质量为19 201 Da,由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖5种单糖组成,摩尔比为2.40∶1.43∶3.84∶7.45∶5.10。红外光谱表明,三者均为吡喃糖。
- 陆颖任爱农李厚兵卢悟广
- 关键词：野菊花多糖红外光谱化学组成
- 紫草素对乙酰胆碱-氯化钙混合液诱导的房颤大鼠的保护作用研究被引量：5
- 2020年
- 目的探索紫草素对乙酰胆碱-氯化钙(Ach-CaCl2)诱导的房颤大鼠的保护作用及可能机制。方法采用雄性SD大鼠尾静脉注射Ach-CaCl2混合液建立大鼠房颤模型,分为正常对照组、模型组与紫草素组。其中,紫草素组预先1周灌胃给予紫草素4mg/(kg·d),再与模型组同时给予Ach-CaCl2混合液造模,采用心电图检测、心脏彩超观察、Masson染色、ELISA法、Western blot等方法评价紫草素对房颤大鼠的保护作用。结果心电图结果显示紫草素延长了大鼠房颤诱发时间,彩超结果显示紫草素改善房颤大鼠心脏扩大情况,ELISA结果显示紫草素降低了房颤大鼠血清炎症因子IL-6和TNF-α水平,Western blot法同样表明紫草素抑制了房颤大鼠心房组织的IL-6和TNF-α的蛋白表达。结论紫草素对房颤大鼠具有保护作用。
- 王钥陈斌卢悟广蔡蕊徐留刚黄丹曹鹏沈建平周谦
- 关键词：紫草素房颤IL-6TNF-Α
- SUMO-BMP7融合蛋白的表达及纯化被引量：8
- 2009年
- 采用融合表达技术,将BMP-7与SUMO(Small ubiquitin-related modifier)基因通过PCR技术连接起来,组成SUMO-BMP7基因片段,双酶切后插入到pET28a载体中克隆,挑取单克隆进行酶切及菌落PCR检测,提取检测结果为阳性的质粒,转化进大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SUMO属于小泛素样修饰因子,具有帮助蛋白质折叠的作用,可提高目的蛋白的表达量和增加目的蛋白的可溶性,经特异性酶切后,目的蛋白能够得到天然的N末端;结果:表达后经超声、Ni-NTA纯化得到SUMO-BMP7融合蛋白。确定了可溶性SUMO-BMP7适宜的诱导温度、诱导时间和IPTG浓度,得到了电泳纯度大约98%的SUMO-BMP7融合蛋白;获得的可溶性融合蛋白,具有很高的表达量。分离纯化后,SDS-PAGE纯度可达到98%左右。为其下一步的酶切和活性研究提供基础。
- 于杰淼曹鹏卢悟广蔡雪婷张娟王旻
- 关键词：骨形态发生蛋白7克隆纯化
- EGFR/HER2联合多肽表位疫苗的构建及体液免疫学分析被引量：3
- 2011年
- 构建以乙肝病毒核心抗原(HBcAg)为载体的带有1个EGFR和2个HER2的模拟B细胞表位多肽的融合表达质粒pET28a/HBcAg-△n,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫BALB/c小鼠获得抗目的蛋白的抗体。采用PCR法将3个模拟表位插入HBc序列的第78～79位,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建重组表达质粒,用大肠杆菌BL21(DE3)作宿主菌表达出融合蛋白HBHE,纯化后免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的体液免疫应答。测序结果表明,重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体。以HBcAg为载体的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与3个B表位结合的抗体,为进一步研究HER家族成员联合多肽表位疫苗的广谱抗肿瘤作用奠定了基础。
- 胡春萍蔡雪婷卢悟广王志刚季夏芸曹鹏
- 关键词：EGFRHBCAG疫苗
- 一种EGFR与HER2联合多肽表位疫苗
- 本发明公开了一种EGFR与HER2联合多肽表位疫苗，将HER家族HER2的两个B细胞表位模拟多肽I和II、HER家族EGFR的一个B细胞表位模拟多肽以串联的形式插入到乙肝核心抗原HBcAg的第78位氨基酸与第79位氨基酸...
- 胡春萍曹鹏卢悟广蔡雪婷王志刚季夏芸胡云龙
- 文献传递
