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卢强: 作品数：82 被引量：380H指数：11; 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国际科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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鲤鱼外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28全长cDNA的克隆与差异表达分析被引量：2: 2006年; 对DD-RTPCR获得的差异显示片段C15进行地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆DM7。测序分析表明,该阳性克隆长1 097 bp,具有完整的开放阅读框架,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28的全长cDNA,编码249个氨基酸,含有PA28的α和β亚单位功能结构域,与已报道的斑马鱼的蛋白酶体激活因子PA28的同源性达93%。分离鲤鱼外周血白细胞,经有丝分裂原在不同条件下刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28全长cDNA序列和鲤鱼β-actin的序列,设计引物,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定白细胞中PA28基因mRNA表达量的变化。结果表明,白细胞经LPS、ConA刺激后,PA28基因的mRNA表达量有所增加,但并不随时间的延长而持续增加。; 李莲瑞卢强付宝权谭业平邓洪宽崔国祯夏慧卿刘明远韩文瑜; 关键词：鲤鱼 CDNA克隆

旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的克隆及序列分析被引量：9: 2005年; 应用旋毛虫感染猪血清 ,对旋毛虫新生幼虫 c DNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆 p BK- CMV- WN10的序列分析结果表明 ,c DNA全长为 135 2 bp,含有 1个 12 18bp的完整的开放阅读框架 (ORF) ,编码的多肽由 4 0 6个氨基酸残基组成 ,其相对分子质量理论推导值为 4 5 90 0 ,等电点为 5 .4 3,N末端的信号肽及糖基化位点 (NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白 ,氨基酸序列 19～ 15 6与 15 8～ 2 95为重复区域 ,相似性为 74 % ,C末端有 1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域 ,但旋毛虫 p4 6 0 0 0抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异 ,可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。 PCR结果显示 ,从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和 5日龄成虫 c DNA中均扩增出此基因。; 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫抑制蛋白半胱氨酸蛋白酶抗原基因分泌性肌幼虫

鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定: 2011年; 为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子PA28α亚基、翻译延伸因子(EF-1α)和基质金属蛋白酶13(Mmp13)部分序列,为进一步研究这些差异表达基因在鱼类免疫中的作用机制奠定了基础。; 丰培金王文东李伟卢强; 关键词：白细胞

旋毛虫感染小鼠对p46000重组抗原的抗体应答被引量：1: 2006年; 分别以旋毛虫肌幼虫ES抗原和p46000重组蛋白作为抗原，对小鼠人工感染旋毛虫后的抗体应答进行了ELISA检测。结果表明，以肌幼虫200条／只经口感染小鼠后，肌幼虫ES抗原在感染后9d可检出抗体，并于感染后35～42d达到最高水平；应用重组抗原检测时，感染后10d可检出抗体，抗体水平略低于用ES抗原，但是其消长规律基本一致．而且与阴性血清相比差异明显；抗体在117d后仍维持于较高水平。; 原丽红付宝权刘明远林本夫张亚兰吴秀萍卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫 ELISA 抗体应答

鲤鱼白细胞介素10基因组DNA克隆及序列分析: 2013年; 为获得鲤鱼白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)全长基因组序列,本研究利用鲤鱼IL-10全长cDNA序列(Gen-Bank登录号:JX524550),通过在两端非编码区设计引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组为模板,使用PCR方法成功获得鲤鱼IL-10全长基因组序列。鲤鱼IL-10基因组全长2176bp,GenBank登录号为JX524551。将所获得的序列与其他物种IL-10基因组序列相比,结果发现都含有5个外显子,4个内含子,外显子在进化上相对保守,剪切位点都符合"gt......ag"规则;序列包含540bp的开放阅读框,编码179个氨基酸,有2段典型的IL-10氨基酸信号基序。; 冯祥汝陈义龙孙真贾生美王文东张俊辉杨振国卢强; 关键词：鲤鱼白细胞介素10 基因组克隆

致病性嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆与高效表达被引量：12: 2004年; 根据 Gen Bank中致病性嗜水气单胞菌气溶素 (Aer)基因的序列设计引物 ,以国内嗜水气单胞菌分离株为模板 ,扩增出 Aer基因的全长序列。经 T载体克隆和序列测定 ,证实克隆了国内分离株的不含信号肽的 Aer全长基因。将该基因以正确的读码框架与表达载体 p ET2 8b连接 ,经 IPTG诱导、SDS- PAGE检测 ,外源基因获得高效表达。诱导 4 h的培养物中 ,融合蛋白的表达占菌体总蛋白含量的 4 8.5 7%。 Western-印迹结果显示 ,利用纯化包涵体制备的兔抗血清可以很好地识别嗜水气单胞菌产生的天然毒素。; 卢强李连瑞付宝权吴秀萍石建平刘明远; 关键词：嗜水气单胞菌

抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达被引量：5: 2002年; 利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性。; 卢强刘维全赵凤芹刘明远江禹殷震; 关键词：抗菌肽绿色荧光蛋白抗菌活性天蚕素B 突变体 E.COLI

旋毛虫T3223-6 cDNA的表达及鉴定: 2005年; 利用PCR技术将T 3223-6 cDNA扩增克隆到原核表达载体pET-28a,将重组质粒转入克隆菌N ova-b lue,提取质粒进行酶切和测序鉴定后转入表达菌BL 21star(DE3)。用1 mM IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,检测重组蛋白的表达情况。用旋毛虫感染猪血清和正常血清,通过w estern b lotting检测重组蛋白的反应原性。结果表明:经IPTG诱导后重组转化菌的裂解产物出现44 kD左右的表达带,大小与理论值相符;w estern b lotting检测结果显示重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有反应原性。; 龙民慧付宝权刘明远孙树民郭恒卢强P.Boireau; 关键词：旋毛虫 CDNA

牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立被引量：6: 2010年; 用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。; 李伟李伟孟日增石建平何江帅赵晓; 关键词：IBRV 原核表达间接ELISA

旋毛虫新生幼虫期特异性基因N10的表达及鉴定: 2006年; 根据旋毛虫新生幼虫期特异性基因pBK-CMV-N10序列设计引物,利用PCR技术将基因N10的信号肽去除后,用T/A法克隆到pMD-18T载体,转化至大肠杆菌NovaBlue,经鉴定及序列测定,结果显示成功克隆到N10基因。将重组质粒pMD-18T-N10进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经鉴定后转化大肠杆菌BL21star(DE3),用IPTG诱导表达出与理论相符的融合蛋白,相对分子质量为38700,诱导4h的表达量占菌体总蛋白量的15%。从N10重组蛋白提取可溶性融合蛋白,对其生物学特性初步鉴定结果表明,具有类似脱氧核糖核酸酶的活性。; 高长玲刘明远郭恒孙树民付宝权崔国祯卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫

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