单于 作品数:12 被引量:34 H指数:4 供职机构: 中山大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 广东省重点攻关基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备 被引量:1 2007年 目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转基因小鼠。方法应用显微注射法将构建好的两种基因片段ApoE-rtTA及TRE-HCV-C分别注入超排的昆明母鼠的受精卵,再植入假母输卵管,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,将两者及阳性后代交配产生携带5只转基因鼠再经Western blot和RT-PCR在RNA和蛋白水平上进一步鉴定。结果产生了3只整合有ApoE-rtTA基因的首见鼠和125只阳性子代,以及产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首见鼠和16只阳性子代。PCR及Southern Blot证实上述阳性鼠确有转基因整合。将两者交配产生携带5只双转基因鼠。结论成功制备了携带有ApoE-rtTA及TRE-HCV-C转基因小鼠,建立了分别携带有这两种基因的鼠群,以及同时携带有两种基因的双转基因小鼠,为四环素调控系统提供了一个良好的通用型的调控动物模型,同时也可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 杨国柱 陈系古 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕关键词:载脂蛋白 转基因鼠 甘氨酸对脂多糖诱导LBP/CDl4 mRNA表达的影响 单于关键词:LIPOPOLYSACCHARIDE GLYCINE 肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立 被引量:2 2007年 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 杨国柱 傅思莹 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕 陈系古关键词:丙型肝炎病毒核心蛋白 转基因小鼠模型 组织特异性表达 丙型肝炎病毒核心蛋白基因表达致人肝细胞恶性转化的研究 被引量:4 2004年 丙型肝炎病毒核心 (HCV C)蛋白是维持丙型肝炎病毒结构的重要蛋白质 ,由于参与调节细胞的生长与凋亡 ,被认为与HCV感染所致的肝硬化及肝细胞癌的发生有关 .为了进一步探索HCV C蛋白与肝细胞癌发生的关系 ,首先构建了表达HCV C蛋白的真核表达载体 ,脂质体介导转染Chang liver人肝细胞株 ,建立表达HCV C蛋白的人肝细胞模型 ,RT PCR方法检测HCV C基因在人肝细胞内的表达 ,蛋白质印迹和免疫细胞化学方法鉴定Chang liver肝细胞内HCV C蛋白及其在细胞内的分布情况 .表达HCV C蛋白的Chang liver人肝细胞培养 2 0代以后 ,与对照组细胞相比 ,细胞的形态出现长梭形样改变 ,生长速度显著加快 ,细胞内DNA含量的均一性变差 .接种表达HCV C蛋白的Chang liver人肝细胞的 6只裸鼠在第 2 0天时全部有肿瘤长出 ,且肿瘤组织结构符合肝细胞癌病理形态特点 ,对照组裸鼠未见肿瘤生长 .上述结果表明HCV C基因表达可导致Chang liver人肝细胞发生恶性转化 ,提示HCV C蛋白与HCV感染所致肝细胞癌的发生有直接关系 . 单于 陈系古 黄冰 胡安斌 郭中敏 黄文革关键词:丙型肝炎病毒 核心蛋白 基因表达 肝细胞 恶性转化 丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达与肝癌发生关系的研究 第一章HCV-C基因的表达对人肝细胞生物学行为的影响;该研究首先建立表达HCV-C基因人肝细胞模型,在此基础上进一步观察HCV-C基因的表达对人肝细胞生物学行为的影响,为阐明C蛋白与HCV感染所致肝细胞癌发生的关系及新药... 单于关键词:转基因 昆明小鼠 文献传递 内毒素诱导的细胞内信息转导 被引量:12 2001年 Depending on LBP/CD14 systems, LPS activates a series of signal-transducing systems in cells. Protein tyrosin kinase(PTK)system,ceramide activated kinase(CAK)system might play an important role in cells signal-transducing.This article give a summary about signal transduction in cells induced by endotoxin. 单于 陆大祥关键词:内毒素类 蛋白质酪氨酸激酶 神经酰胺类 信号传递 ES细胞体外定向分化为成熟肝细胞的实验研究 被引量:9 2004年 探讨了肝细胞在胚胎干细胞 (EScell)体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法 .利用TGF ,bFGF、HGF等细胞生长因子进行BALB/c小鼠ES细胞向肝细胞方向的定向诱导 .利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫细胞化学 (ICC)和放射免疫法 (RIA)动态检测肝细胞特异性基因和蛋白AFP ,ALB ,G6P ,TAT ,CK8,CK18等在培养体系中的表达 ,并测定肝细胞的尿素合成功能 ,最后测定肝细胞分化率 .结果 ,肝细胞特异基因AFP ,ALB ,G6P和TAT最早分别于第 3、 9、 11、 13天表达 ,肝细胞特异蛋白AFP ,CK8,CK18和ALB最早分别于第 7、 9、 9和 11天开始表达 .第 12天开始检测到尿素出现 ,浓度为 8 3μmol/L ,并随培养时间延长而浓度逐渐增加 .最后 ,测得生长因子诱导组肝细胞的分化率为 32 % ,对照组肝细胞分化率为 8% .说明肝细胞可以在ES细胞体外诱导分化系统中出现并成熟分化 ,bFGF、HGF、OSM等可以明显提高细胞分化率和成熟度 ,有望成为解决肝功能替代疗法中细胞来源问题的新希望 . 胡安斌 蔡继业 郑启昌 洪岸 何晓青 戴云 单于 潘运龙 李凌松关键词:胚胎干细胞 肝细胞 定向分化 甘氨酸对脂多糖诱导LBP/CD14mRNA表达的影响 目的:内毒素是位于革兰氏阴性菌(G)细胞壁外膜中具有高度生物学活性的 以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为主要成分的大分子物质。LBP (lipopolysaccharide-binding pro... 单于文献传递 甘氨酸对脂多糖诱导LBP mRNA表达的影响 被引量:1 2003年 目的 :了解甘氨酸 (GLY)对脂多糖 (LPS)诱导脂多糖结合蛋白 (LBP)mRNA表达的影响。方法 :用RT-PCR方法检测LPS作用下大鼠肝组织LBPmRNA的表达水平 ,并在此基础上观察甘氨酸对LPS诱导大鼠肝组织LBPmRNA表达的影响。结果 :LPS组大鼠肝组织LBPmRNA表达高于control组 (P <0 .0 1) ,GLY +LPS组大鼠肝组织LBPmRNA表达低于LPS组 (P <0 .0 1)。结论 :LPS可诱导大鼠肝组织LBPmRNA的表达 。 单于 陆大祥 王华东 戚仁斌 付咏梅 李晓娟 李楚杰关键词:甘氨酸 脂多糖类 脂多糖结合蛋白 干细胞与肿瘤发生的关系 被引量:5 2003年 Stem cells are a lineage with capacities of self-renewal and multipotential differentiation. They are exactly regulated by microenvironment where they live. With the understanding of stem cells biology, researchers noticed that stem cells have many similar biology characters with tumor cells, and thought that tumors were likely derived from stem cells, and gave a concept that there were tumor stem cells in tumor tissues. 单于 陈系古关键词:干细胞 肿瘤