刘庆军
- 作品数：14 被引量：5H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血红素加氧酶-1显性负性突变体转基因小鼠模型的建立与鉴定
- 2010年
- 目的建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型。方法通过SalI/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,并移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠;用PCR对子代鼠尾DNA进行鉴定,并用Southern blot对结果做进一步验证;通过RT-PCR、免疫组化和Western blot方法检测HO-1基因的表达。结果表达盒回收片段正确;假孕鼠出生的17只子代小鼠共有3只阳性,均为雄性;RT-PCR、免疫组化和Western blot结果表明,阳性小鼠体内的HO-1 mRNA与蛋白表达水平增高。结论成功建立HO-1显性负性突变体G143H表达的转基因小鼠,该模型为研究HO-1在体内的作用机制奠定了基础。
- 王波程萱刘庆军魏旭冉尹玉静高旭杨晓周虹
- 关键词：HO-1显微注射法转基因小鼠
- 血红素加氧酶-1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究
- 2010年
- 目的构建人血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）及其突变体的真核表达载体，观察其在胃腺癌细胞中HO-1表达和活性变化，研究HO-1活性变化的胃腺癌细胞对顺铂抗药能力的变化，为进一步研究HO-1对肿瘤细胞影响机制奠定基础。方法根据GenBank中HO-1cDNA序列设计引物，调取基因并克隆入pcDNA3．1（＋）质粒中，构建表达人野生型HO-1与突变型HO-1（HO-1G143H）的重组质粒。脂质体介导重组质粒转染胃腺癌细胞BGC823，用RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞中HO-1mRNA的表达和蛋白表达水平，体外测定HO—1活性变化，应用顺铂进行体外抗药性实验。结果酶切鉴定和测序证实，HO-1真核表达载体构建成功；转染质粒后的BGC823，HO-1的mRNA和蛋白的表达水平明显上升；转入野生型质粒的细胞HO-1活性上升，转入突变型质粒的细胞HO-1活性下降；HO-1活性下降BGC823细胞抗顺铂杀伤能力增强。结论构建了HO-1野生型与突变型真核表达载体；将其转入胃腺癌细胞，引起了HO-1的mRNA和蛋白表达的增加和活性变化；体外实验表明，HO-1活性下降的BGC823细胞抗顺铂能力增强。
- 王波刘庆军于景翠尹玉静魏旭冉周虹
- 关键词：血红素加氧酶-1肿瘤基因重组
- HO-1与HCV的相关性研究被引量：1
- 2010年
- 血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）在肝脏和脾脏高表达，可以被包括某些病毒感染在内的多种因素诱导表达，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等保护作用。丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）感染可以造成慢型肝炎、肝硬化和肝癌等疾病，对人类健康造成很大威胁。研究发现HO-1通过影响HCV的复制发挥其保护作用，同时HCV也可以反向调控HO-1的表达。尽管HO-1与HCV相互作用的分子机制还不明确，但H0—1与HCV感染相关性研究不断取得重大进展，将为HCV感染的治疗提供一种新方法。
- 刘庆军陈赣周虹
- 关键词：血红素加氧酶-1丙型肝炎病毒分子机制
- 平行板流动小室灌流系统
- 本实用新型一种平行板流动小室灌流系统，依次由气瓶、缓冲瓶、平行板流动小室和蠕动泵用管路连接，其中，缓冲瓶置于一水浴槽内，平行板流动小室置于由温度控制器控制的一加热垫上，在气瓶与缓冲瓶连通管路上设一气阀。本实用新型通过气阀...
- 赵莲尤国兴周虹刘庆军赵敬湘王字玲
- 文献传递
- 一种基于生物素与亲和素的快速筛选阳性细胞系统的构建
- 建立用于功能研究和用于基因治疗的稳定细胞系,非常关键的一点是需要选择有效的方法筛选出基因修饰的阳性细胞。目前应用比较广的筛选阳性细胞的传统方法主要包括:利用流式细胞仪分选带有荧光标记的基因修饰的阳性细胞和利用其它报告基因...
- 刘庆军
- 关键词：生物素链亲和素磁珠阳性细胞
- 丙酮酸钠在制备缓解高氯性酸中毒药物中的应用
- 本发明公开了丙酮酸钠的一种新用途，即在制备缓解高氯性酸中毒的药物中的应用。将丙酮酸钠作为活性成分制备成缓解高氯性酸中毒的药物，可调节血液的pH值趋于正常，并调节血液中的钠离子、钾离子、钙离子的浓度，从而缓解高氯性酸中毒的...
- 周虹赵莲王瑛杨晶陈赣赵敬湘王波尤国兴尹玉静刘庆军李鹏龙
- 文献传递
- 血红素加氧酶-1的表达、纯化方法与抗原表位
- 本发明公开了血红素加氧酶-1的表达、纯化方法与抗原表位。通过本发明可以获得高产量的可溶性血红素加氧酶-1，为大量制备具有生物活性的血红素加氧酶-1奠定了基础，可望解决生物工程和药物研发领域等血红素加氧酶-1难以高效表达的...
- 周虹魏旭冉刘庆军王波杨光
- 人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 目的确定人血红素加氧酶-1（human heme oxygenase-1，hHO-1）在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法，利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO—1多克隆抗体。方法将hHO-1原核表达质粒pMW172／hHO-1转人大肠埃希菌菌株BL21，通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的最佳可溶性表达条件；利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白，建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性；利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔，制备多克隆抗体；利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性，通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性。结果确定hHO-1最佳可溶性表达条件为：37℃、200r／min培养3h后，0．1 mmoL／LIPTG诱导培养4h。超声破碎菌体，上清经30％～40％盐析纯化及分子筛层析纯化，获得活性hHO-1蛋白，收得率为30．3％，纯化倍数为2．83倍，纯度为90％。制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10^6，并能中和掉46％hHO-1的催化活性。结论为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案；获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体，为HO-1功能、结构研究，以及相关疾病研究奠定了基础。
- 魏旭冉杨军刘庆军王波周虹
- 关键词：血红素加氧酶原核表达可溶性表达纯化中和抗体
- 丙酮酸钠在制备缓解高氯性酸中毒药物中的应用
- 本发明公开了丙酮酸钠的一种新用途，即在制备缓解高氯性酸中毒的药物中的应用。将丙酮酸钠作为活性成分制备成缓解高氯性酸中毒的药物，可调节血液的pH值趋于正常，并调节血液中的钠离子、钾离子、钙离子的浓度，从而缓解高氯性酸中毒的...
- 周虹赵莲王瑛杨晶陈赣赵敬湘王波尤国兴尹玉静刘庆军李鹏龙
- 文献传递
- C型利尿钠肽抑制内毒素诱导的内皮细胞活化及机制研究
- <正>目的:脂多糖(LPS)引起的内皮细胞活化是脓毒性休克、失血性休克及继发多器官功能障碍发生、发展的病理基础,而抑制LPS引起的内皮细胞活化对脓毒性休克、失血性休克等疾病的治疗有利。C型利尿钠肽(CNP)是利尿钠肽家族...
- 陈赣赵敬湘刘庆军王波尹玉静李鹏龙赵莲周虹
- 文献传递
